某品牌血液分析儀預(yù)稀釋模式性能評(píng)估

徐向東， 張 馳， 廖 慶， 林心肢， 費(fèi) 陽

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430030）

血常規(guī)檢測是臨床最常用的檢測項(xiàng)目，一般需采集2 mL靜脈全血進(jìn)行檢測。然而，對(duì)于嬰幼兒、大面積燒傷、放化療患者等特殊人群，不易取得足量靜脈血。XN-2000全自動(dòng)血液分析儀預(yù)稀釋模式因需要標(biāo)本量少，可解決上述問題。但該模式臨床應(yīng)用不廣泛，性能評(píng)估相關(guān)研究較少。本研究參照我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《WS/T 406—2012臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》[1]（簡稱WS/T 406—2012）及儀器說明書，對(duì)XN-2000全自動(dòng)血液分析儀白細(xì)胞（white blood cell，WBC）計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）計(jì)數(shù)、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）、血細(xì)胞比容（hematocrit，HCT）、血小板（platelet，PLT）計(jì)數(shù)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）、紅細(xì)胞平均體積（mean corpuscular volume，MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）、中性粒細(xì)胞絕對(duì)數(shù)（the absolute value of neutrophil，NEUT#）、單核細(xì)胞絕對(duì)數(shù)（the absolute value of monocyte，MO#）、淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)（the absolute value of lymphocyte， LYMPH#）、嗜酸性粒細(xì)胞絕對(duì)數(shù)（the absolute value of eosinophil，EO#）、嗜堿性粒細(xì)胞絕對(duì)數(shù)（the absolute value of basophil，BASO#）等項(xiàng)目的檢測性能進(jìn)行評(píng)估。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本收集

收集華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院住院患者乙二胺四乙酸二鉀抗凝全血標(biāo)本，濃度覆蓋低、中、高值。質(zhì)評(píng)物為2019年國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心第2次全血細(xì)胞計(jì)數(shù)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)樣品，共5份。

1.2 儀器與試劑

XN-2000全自動(dòng)血液分析儀及配套試劑、室內(nèi)質(zhì)控品（日本Sysmex公司）。每6個(gè)月使用配套商用校準(zhǔn)物對(duì)儀器進(jìn)行1次校準(zhǔn)，每12 h執(zhí)行1次室內(nèi)質(zhì)量控制，確保質(zhì)控在控，方可進(jìn)行標(biāo)本檢測。

1.3 方法

1.3.1 本底計(jì)數(shù) 以儀器配套稀釋液為樣本，手工1∶7稀釋后，采用預(yù)稀釋模式連續(xù)檢測3次，記錄最高值，判定標(biāo)準(zhǔn)參照WS/T 406—2012[1]。

1.3.2 攜帶污染率 在預(yù)稀釋模式下，取高濃度臨床標(biāo)本1份，顛倒混勻后手工1∶7稀釋，連續(xù)測定3次，結(jié)果分別記為 H1、H2和H3；取低濃度臨床標(biāo)本1份，混勻后手工1∶7稀釋，連續(xù)測定3次，結(jié)果分別記為L1、L2和L3。計(jì)算公式為：攜帶污染率（%）=（L1-L3）/（H3-L3）×100%。判定標(biāo)準(zhǔn)參照儀器說明書。

1.3.3 精密度 （1）批內(nèi)精密度。取1份正常濃度新鮮血臨床標(biāo)本，手工1∶7稀釋，在預(yù)稀釋模式下重復(fù)檢測11次。剔除第1次結(jié)果，計(jì)算后10次結(jié)果的s和變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）。WBC分類判斷標(biāo)準(zhǔn)參照儀器說明書，其他項(xiàng)目判定標(biāo)準(zhǔn)均參照WS/T 406—2012[1]。（2）批間精密度。每日對(duì)室內(nèi)質(zhì)控品（中、高2個(gè)水平）進(jìn)行1∶7稀釋，在預(yù)稀釋模式下檢測并記錄數(shù)據(jù)；每12 h用室內(nèi)質(zhì)控品執(zhí)行1次質(zhì)控。連續(xù)測定1個(gè)月。剔除失控值后，分別計(jì)算2種方法（預(yù)稀釋模式和常規(guī)模式）質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)、s、CV。WBC分類判定標(biāo)準(zhǔn)參照儀器說明書，其他項(xiàng)目判定標(biāo)準(zhǔn)均參照WS/T 406—2012[1]。（3）線性范圍。取預(yù)期上限附近高濃度臨床標(biāo)本1份，1∶7稀釋后，分別按100%、50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、0%比例稀釋，每個(gè)稀釋度均使用預(yù)稀釋模式重復(fù)測定2次，將均值與期望值進(jìn)行比較，并繪制線性擬合圖。根據(jù)WS/T 406—2012要求[1]，線性回歸方程斜率為1±0.05，r≥0.975或r2≥0.950，且WBC、RBC、Hb和PLT項(xiàng)目滿足儀器說明書規(guī)定的線性范圍，則判定為合格。

1.3.4 比對(duì)試驗(yàn) （1）與常規(guī)模式比對(duì)。取40份濃度覆蓋低、中、高值的新鮮全血臨床標(biāo)本，分別在預(yù)稀釋模式（1∶7稀釋）與常規(guī)模式下檢測，統(tǒng)計(jì)2種模式檢測結(jié)果的偏差，每份標(biāo)本2種模式檢測時(shí)間間隔不超過1 h。WBC分類判定標(biāo)準(zhǔn)參照本實(shí)驗(yàn)室自建標(biāo)準(zhǔn)，其他項(xiàng)目判定標(biāo)準(zhǔn)均參照WS/T 406—2012[1]。（2）準(zhǔn)確度。將5份2019年國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心第2次全血細(xì)胞計(jì)數(shù)室間質(zhì)評(píng)物（批號(hào)分別為201921、201922、201923、201924、201925）1∶7稀釋后，采用預(yù)稀釋模式進(jìn)行單次檢測，計(jì)算每份標(biāo)本檢測結(jié)果與靶值的相對(duì)偏差。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照2019年國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2017和SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。正態(tài)分布數(shù)據(jù)以x±s表示，非正態(tài)數(shù)據(jù)以中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示。采用線性回歸進(jìn)行相關(guān)性分析，預(yù)稀釋模式與常規(guī)吸樣模式檢測結(jié)果差異采用Wilcoxon檢驗(yàn)（非正態(tài)分布數(shù)據(jù)）和配對(duì)t檢驗(yàn)（正態(tài)數(shù)據(jù)）進(jìn)行比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 本底計(jì)數(shù)

WBC、RBC、Hb和PLT項(xiàng)目結(jié)果分別為≤0.5、≤0.05、≤2.0和≤10.0，本底計(jì)數(shù)合格。

2.2 攜帶污染率

WBC、RBC、Hb和PLT項(xiàng)目攜帶污染率分別為0.07%、0.13%、0.00%和0.22%，均在規(guī)定范圍之內(nèi)（≤1.0%）。

2.3 精密度

2.3.1 批內(nèi)精密度 WBC、RBC、Hb、PLT、MCV、MCH、MCHC、NEUT#、LYMPH#、MO#、EO#和BASO#批內(nèi)不精密度分別為1.39%、0.92%、0.47%、0.68%、2.43%、0.45%、0.89%、0.88%、1.35%、4.97%、12.01%、21.96%和35.14%，均符合要求（分別為≤4.0%、≤2.0%、≤1.5%、≤3.0%、≤5.0%、≤2.0%、≤2.0%、≤2.5%、≤16.0%、≤16.0%、≤40.0%、≤40.0%和≤50.0%）。

2.3.2 批間精密度 預(yù)稀釋模式除EO#中值質(zhì)控外，各檢測項(xiàng)目CV均在判斷標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)。常規(guī)模式各項(xiàng)目CV均遠(yuǎn)低于預(yù)稀釋模式，也均在判斷標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，符合要求。見表1。

表1 SYSMEX XN-2000血液分析儀預(yù)稀釋模式和常規(guī)模式批間精密度

續(xù)表1

2.4 線性范圍驗(yàn)證

W B C、R B C、H b、P LT項(xiàng)目線性范圍驗(yàn)證結(jié)果分別為（0～91.88）×109/L、（0～8.0 7）×1 012/L、0～2 7 0 g/L和（0～961）×109/L，回歸方程中a值均≤（1.00±0.05）、r均≥0.975，符合儀器說明書要求。線性范圍驗(yàn)證結(jié)果圖見圖1。

圖1 WBC、RBC、Hb和PLT項(xiàng)目線性范圍驗(yàn)證散點(diǎn)圖

2.5 比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果

2.5.1 預(yù)稀釋模式與常規(guī)模式比對(duì)結(jié)果 RBC和Hb項(xiàng)目符合率分別為67.5%和70.0%，其他項(xiàng)目符合率均＞80%。見表2。

表2 各項(xiàng)目預(yù)稀釋模式與常規(guī)模式比對(duì)結(jié)果

2.5.2 準(zhǔn)確度 各項(xiàng)指標(biāo)百分偏差均在允許范圍內(nèi)，預(yù)稀釋模式準(zhǔn)確度結(jié)果見表3。

表3 XN-2000全自動(dòng)血液分析儀預(yù)稀釋模式準(zhǔn)確度

3 討論

有研究發(fā)現(xiàn)，血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)檢測中，預(yù)稀釋模式和常規(guī)自動(dòng)吸樣模式相比，檢測結(jié)果有不同程度的差異[2-4]。還有研究發(fā)現(xiàn)，預(yù)稀釋模式的不精密度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于常規(guī)模式，且無法滿足儀器的精密度需求[5]。通常情況下，儀器的校準(zhǔn)、室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)都是在常規(guī)自動(dòng)吸樣模式下進(jìn)行，只能反映自動(dòng)吸樣模式下的準(zhǔn)確度和精密度，無法反映預(yù)稀釋模式的檢測性能[6]，因此預(yù)稀釋模式用于臨床標(biāo)本檢測是否準(zhǔn)確可靠，仍需研究和探討。

本研究依照WS/T 406—2012對(duì)XN-2000全自動(dòng)血液分析儀預(yù)稀釋模式進(jìn)行性能評(píng)估，結(jié)果顯示，儀器預(yù)稀釋模式本底計(jì)數(shù)、攜帶污染率、批內(nèi)精密度、線性范圍和準(zhǔn)確度均符合要求；但與常規(guī)模式相比，預(yù)稀釋模式批間精密度普遍偏低，且EO#項(xiàng)目批間精密度未達(dá)標(biāo)。精密度較低的原因可能為：（1）預(yù)稀釋模式需首先用血細(xì)胞稀釋液進(jìn)行1∶7手工稀釋，引入了人為誤差；（2）常規(guī)模式需進(jìn)樣88 μL全血進(jìn)行計(jì)數(shù)，而預(yù)稀釋模則吸取70 μL的稀釋樣品進(jìn)行檢測，吸樣量和細(xì)胞計(jì)數(shù)總量均較少；（3）采用室內(nèi)質(zhì)控品替代臨床標(biāo)本稀釋后檢測，質(zhì)控品為醛化處理全血，WBC膜滲透性差，核染色質(zhì)熒光染料染核能力低于新鮮全血，質(zhì)控品在臨床標(biāo)本檢測通道檢測結(jié)果中MO#、EO#和BASO#檢測值低，不精密度大大增高。另外，在不同吸樣模式比對(duì)過程中，本研究也發(fā)現(xiàn)預(yù)稀釋模式和常規(guī)模式各項(xiàng)目間亦存差異，可能因預(yù)稀釋模式標(biāo)本手工為1∶7稀釋所致。在實(shí)際操作中，除手工稀釋過程的影響外，還需注意，末梢血易混入組織液，可能對(duì)檢測結(jié)果有影響[7]。

2014年11月，歐洲臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)就性能規(guī)范設(shè)定問題在米蘭召開會(huì)議，會(huì)議提出了3個(gè)層次的性能規(guī)范設(shè)定策略[8]。WS/T 406—2012頒布之前，臨床實(shí)驗(yàn)室多采用基于當(dāng)前技術(shù)水平設(shè)定的美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行性能評(píng)估，優(yōu)先級(jí)別較低[9]。WS/T 406—2012中性能規(guī)范是基于被測量生物學(xué)變異導(dǎo)出質(zhì)量規(guī)范，優(yōu)先級(jí)別高于美國臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案，故本研究盡可能采用WS/T 406—2012推薦的性能規(guī)范，其次采用儀器說明書要求，兩者均無相關(guān)要求時(shí)，則采用實(shí)驗(yàn)室自建標(biāo)準(zhǔn)。

總之，靜脈血自動(dòng)吸樣模式（常規(guī)模式）有良好的精密度和準(zhǔn)確度，是檢驗(yàn)臨床標(biāo)本時(shí)優(yōu)先的選擇。預(yù)稀釋模式精密度不高，與常規(guī)模式結(jié)果存在差異，同時(shí)也易受手工稀釋操作影響，因此，并不推薦臨床常規(guī)使用。但對(duì)血管條件較差、不易采集靜脈血的患者，仍可采用預(yù)稀釋模式進(jìn)行檢測。本研究結(jié)果僅代表本實(shí)驗(yàn)室對(duì)XN-2000全自動(dòng)血液分析儀的性能評(píng)估結(jié)果，不同實(shí)驗(yàn)室可能得出不同結(jié)論[2-6]。