超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中氧氟沙星殘留量的不確定度評(píng)定

鄭陸紅 張慧瓊 陳茹

摘 要：依據(jù)《水產(chǎn)品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部1077號(hào)公告—1—2008），通過(guò)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)水產(chǎn)品（魚）中氧氟沙星的測(cè)定過(guò)程進(jìn)行分析，確定整個(gè)測(cè)定過(guò)程中影響結(jié)果的不確定度來(lái)源，對(duì)不確定度進(jìn)行計(jì)算及分析，評(píng)定出測(cè)量結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度。當(dāng)樣品中氧氟沙星含量為66.1 μg·kg-1時(shí)，取置信水平p=95%，擴(kuò)展不確定度為5.0 μg·kg-1（k=2），其結(jié)果可表示為（66.1±5.0）μg·kg-1，真實(shí)反映測(cè)量的置信度和準(zhǔn)確性，為采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品（魚）中氧氟沙星藥物殘留量得出的結(jié)果提供可靠的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：水產(chǎn)品；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；氧氟沙星；不確定度評(píng)定

Evaluation of Uncertainty of Ofloxacin Residues in Aquatic Products by Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

ZHENG Luhong1，2，3， ZHANG Huiqiong1，2，3， CHEN Ru1，2，3

（1.Guangdong Provincial Public Laboratory of Food Industry， Guangzhou 511442， China;

2.Guangdong Food Industry Institute Co.， Ltd.， Guangzhou 511442， China;

3.Guangdong Food Quality Supervision and Inspection Station， Guangzhou 511442， China）

Abstract： According to Agriculture No. 1077—1—2008， the determination process of ofloxacin in aquatic products （fish） was analyzed by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）， and the source of uncertainty affecting the results during the whole determination process was ensured. The uncertainty was calculated and analysed， and the combined standard uncertainty and extended uncertainty of measurement results were evaluated. When the content of ofloxacin in the sample was 66.1 μg·kg-1， the confidence level p=95%， the expanded uncertainty was 5.0 μg·kg-1（k=2）， the result could be expressed as （66.1±5.0）μg·kg-1， which truly reflected the confidence and accuracy of the measurement. This provide a reliable theoretical basis for the results of determination of ofloxacin residues in aquatic products （fish） by UPLC-MS/MS.

Keywords： aquatic products; ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; ofloxacin; uncertainty evaluation

氧氟沙星是一種人工合成抗菌藥物，具有抗菌譜廣、高效、低毒、組織穿透力強(qiáng)和價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于畜牧、水產(chǎn)等養(yǎng)殖業(yè)中水產(chǎn)動(dòng)物的疾病預(yù)防與治療[1-5]。氧氟沙星易殘留于動(dòng)物組織，通過(guò)食物鏈循環(huán)進(jìn)入人體，形成耐藥性，長(zhǎng)期食用含有該藥物殘留的食品，可危害人類健康[6-7]。2015年我國(guó)農(nóng)業(yè)部第2292號(hào)公告[8]規(guī)定水產(chǎn)品中不得使用氧氟沙星。近年來(lái)，國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局食品安全監(jiān)督抽檢中關(guān)于食用農(nóng)產(chǎn)品涉及的水產(chǎn)品項(xiàng)目中喹諾酮類獸藥殘留超標(biāo)的通告較多[9-12]，其中氧氟沙星項(xiàng)目占據(jù)較大比例。因此，檢測(cè)水產(chǎn)品中氧氟沙星藥物的含量非常有必要。

食品檢驗(yàn)過(guò)程會(huì)受到諸多不確定因素的影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果與真值之間存在一定的誤差[13-14]。為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，真實(shí)反映被測(cè)量估計(jì)值的不確定度，需要對(duì)不確定度進(jìn)行測(cè)量與分析。測(cè)量不確定度一般由若干個(gè)分量組成，表征賦予被測(cè)量值分散性的非負(fù)參數(shù)[15-16]。測(cè)量不確定度用于判斷測(cè)量結(jié)果的可靠程度，檢測(cè)過(guò)程中影響結(jié)果的不確定度來(lái)源及影響程度[17]。本文依據(jù)《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》及《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》（JJF 1059.1—2012）[18-19]，結(jié)合《水產(chǎn)品中17種磺胺類及15種喹諾酮類藥物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部1077號(hào)公告—1—2008）對(duì)水產(chǎn)品中氧氟沙星殘留量的不確定度進(jìn)行測(cè)量與分析，評(píng)定測(cè)量不確定度[20]。通過(guò)對(duì)其進(jìn)行不確定度評(píng)定，分析檢測(cè)過(guò)程中的不確定度來(lái)源及各分量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響程度，為控制及減少實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所產(chǎn)生的不確定度提供了參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

水，一級(jí)水；甲醇、乙腈、醋酸銨和甲酸，均為色譜純；無(wú)水硫酸鈉（650 ℃灼燒4 h，冷卻后貯于密閉容器中備用）；氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)：82419-36-1，純度≥95.71%）；諾氟沙星-D5標(biāo)準(zhǔn)品（CAS號(hào)：1015856-57-1，純度≥99.7%）；液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）；分析天平；渦旋混合器；超聲波清洗儀；離心機(jī)；均質(zhì)器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理過(guò)程

①稱取5 g樣品于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入50 μL諾氟沙星-D5（1 μg·mL-1）內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，渦旋混勻，避光放置10 min。②加入10 g無(wú)水硫酸鈉，渦旋混勻，再加入20 mL甲酸-乙腈（1∶99）溶液，渦旋混合1 min，超聲波提取10 min，離心，移取上清液。③殘?jiān)性偌尤?0 mL甲酸-乙腈（1∶99）溶液，重復(fù)提取1次。④合并兩次提取液于40 ℃水浴中氮?dú)獯蹈?。⑤?.0 mL 20%甲醇溶解殘留物，再加入2.0 mL正己烷渦旋混合，轉(zhuǎn)入5 mL離心管中，離心，取下層清液過(guò)0.22 μm濾膜后供UHPLC-MS/MS分析測(cè)定。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液配制

氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取10.53 mg氧氟沙星，用乙腈溶解，并定容到10 mL容量瓶中，得到濃度為1 008 μg·mL-1的氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

諾氟沙星-D5內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取4.92 mg諾氟沙星-D5，用甲酸+甲醇（2+98）溶解，并定容到10 mL容量瓶中，得到濃度為491 μg·mL-1的諾氟沙星-D5內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)中間液：吸取0.05 mL氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得到濃度為1.008 μg·mL-1的氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

諾氟沙星-D5內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液：吸取0.11 mL諾氟沙星-D5標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得到濃度為1.08 μg·mL-1的諾氟沙星-D5標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)中間液0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL和0.50 mL諾氟沙星-D5內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液于10 mL A級(jí)容量瓶中，用20%甲醇溶液定容至刻度，搖勻。氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度分別為5.04 ng·mL-1、10.08 ng·mL-1、20.16 ng·mL-1、50.40 ng·mL-1和100.80 ng·mL-1，諾氟沙星-D5內(nèi)標(biāo)濃度為54.0 ng·mL-1。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：phenomenex-C18（100 mm×2.1 mm，2.6 μm），柱溫：40 ℃，流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水、B為甲醇，流速：0.3 mL·min-1，進(jìn)樣量：1 μL。梯度洗脫程序：0～0.50 min，90%A；0.50～5.00 min，90%A～10%A；5.00～6.00 min，10%A；6.00～6.01 min，10%A～90%A；6.01～7.00 min，90%A。

2 結(jié)果與分析

2.1 數(shù)學(xué)模型

樣品中氧氟沙星殘留量采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法及同位素內(nèi)標(biāo)法定量，定量結(jié)果計(jì)算公式為

（1）

式中：X為試樣中氧氟沙星的殘留量，μg·kg-1；C

為從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的被測(cè)組分濃度，ng·mL-1；V為試樣最終定容體積，mL；W為樣品質(zhì)量，g。

2.2 不確定度來(lái)源分析

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，UHPLC-MS/MS）測(cè)定水產(chǎn)品（魚）中氧氟沙星殘留量的不確定度來(lái)源主要有標(biāo)準(zhǔn)工作液配制過(guò)程中產(chǎn)生的不確定度、定容體積產(chǎn)生的不確定度、樣品稱量過(guò)程中產(chǎn)生的不確定度、樣品進(jìn)行重復(fù)測(cè)定產(chǎn)生的不確定度、最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線產(chǎn)生的不確定度以及超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀引入的不確定度等。

不同的因素及其影響見圖1。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量評(píng)定

2.3.1 配制標(biāo)準(zhǔn)工作液產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，1（S）

（1）配制氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，2（P）。查閱氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書可知，其擴(kuò)展不確定度為0.46%（k=2），純度為95.71%，則其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度平方為u2rel，2（P）=[U÷（k×P）]2=[0.46%÷（2×95.71%）]2=5.775×10-6。

標(biāo)準(zhǔn)曲線所用內(nèi)標(biāo)溶液與試樣溶液所用內(nèi)標(biāo)溶液為同一溶液且加入的量一致，因此配制諾氟沙星-D5內(nèi)標(biāo)溶液過(guò)程中稱樣量、稀釋體積及純度的不確定度的分量可忽略不計(jì)，只考慮內(nèi)標(biāo)溶液取樣體積引入的不確定度。

（2）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，3（m1）。氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是由十萬(wàn)分之一電子天平進(jìn)行稱量。根據(jù)電子天平檢定證書，最大允許誤差（MPE）為±0.05 mg，按矩形分布（k=）計(jì)算，稱取氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.010 53 g，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度平方為u2rel，3（m）=[MPE÷（k×m）]2=[0.05÷（×10.53）]2=7.516×10-6。

（3）配制標(biāo)準(zhǔn)工作液配制過(guò)程中所用器具引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，4（V1）。配制氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液過(guò)程中所用器具引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度主要來(lái)源為容量瓶定容體積、移液槍移取溶液。配制所用的容量瓶經(jīng)鑒定均為A級(jí)，可按國(guó)家規(guī)范《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）規(guī)定，按三角分布計(jì)算，k=；移液器引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，由校準(zhǔn)證書得到，按三角分布計(jì)算，k=，配制氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液過(guò)程中所用器具的最大允許誤差及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的平方如表1所示。

配制氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制過(guò)程中所用器量引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的平方為u2rel，4（V1）=u2rel（容量瓶）+u2rel（移液槍）=6.667×10-7+1.667×10-7+3.334×10-6+3.750×10-5+1.125×10-4+1.167×10-4=2.709×10-4。

（4）標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制過(guò)程中所用量器溫度系數(shù)引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量urel，5（T1）。氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液均在（20±4）℃條件下進(jìn)行配制，溶液溫度與檢定標(biāo)準(zhǔn)溫度（20 °C）不同產(chǎn)生了相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量urel，5（T1）?？赏ㄟ^(guò)估算該體積膨脹系數(shù)和溫度范圍計(jì)算其引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。液體的體積膨脹明顯大于玻璃容器體積膨脹，故只考慮前者即可。乙腈的膨脹系數(shù)為1.37×10-3 ℃-1，甲醇的膨脹系數(shù)為1.19×10-3 ℃-1，水的膨脹系數(shù)為

2.1×10-4 ℃-1，按照矩形分布計(jì)算，k=，配制氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液過(guò)程中，所用器具溫度系數(shù)引起的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的平方見表2。

綜上，配制氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的平方為u2rel，1（S）=u2rel，2（P）+u2rel，3（m）+u2rel，4（V1）+

u2rel，5（T1）=5.775×10-6+7.516×10-6+2.709×10-4+2.866×

10-5 =3.13×10-4。

2.3.2 樣品前處理過(guò)程中產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，6（Q）

（1）樣品前處理過(guò)程中稱量產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，7（m）。通過(guò)查閱萬(wàn)分之一的電子天平使用說(shuō)明書，稱量5.000 0 g時(shí)，最大允差為0.5 mg，按矩形分布（k=），用該天平秤量樣品6份，得到5 023.3 mg、5 061.5 mg、5 067.2 mg、5 077.0 mg、5 051.2 mg和5 061.3 mg，方差為342.4 mg，所用校準(zhǔn)砝碼引起的不確定度貢獻(xiàn)較小，忽略不計(jì)。稱取樣品產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的平方為u2=（s2÷n）+[MPE2÷2]=（342.4÷6）+（0.52÷3）=57.15 mg。

稱取樣品質(zhì)量為5.023 3 g、5.061 5 g，其平均值為5.042 4 g，產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的平方為u2rel，7（m）=u2÷m2=57.15÷504 2.42=2.248×10-6。

（2）樣品處理過(guò)程中所用量器引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，8（V3）。本方法采用內(nèi)標(biāo)法定量，樣品前處理時(shí)使用1 000 μL移液槍移取400 μL諾氟沙星-D5內(nèi)標(biāo)（1.08 μg·mL-1）加入至樣品中。使用1 000 μL移液槍移取1 000 μL 20%甲醇溶液進(jìn)行定容。由于氧氟沙星含量超線性范圍，樣品定容后需再稀釋8倍，使用200 μL移液槍取125 μL樣液，加20%甲醇溶液定容至1.00 mL容量瓶。1 000 μL移液槍的最大容量允差為±10.0 μL，200 μL移液槍最大允差為±3.0 μL，1 mL容量瓶的最大允差為±0.010 mL，依據(jù)三角分布，k=，樣品處理過(guò)程中所用器量產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度平方為

（3）溫度系數(shù)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量urel，12（T3）。樣品是在（20±4）℃條件下進(jìn)行定容，溶液溫度與檢定標(biāo)準(zhǔn)溫度（20 °C）不同產(chǎn)生了相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量urel，12（T3）。水的體積膨脹系數(shù)為

2.1×10-4 ℃-1，甲醇的膨脹系數(shù)為1.19×10-3 ℃-1，按照矩形分布計(jì)算（k=）。內(nèi)標(biāo)中間液主要成分是甲醇，樣品定容溶液和稀釋液的主要成分是水，樣品處理過(guò)程中溫度系數(shù)產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度平

方為

綜上，樣品前處理過(guò)程中產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，6（Q）的平方為u2rel，6（Q）=u2rel，7（m）+u2rel，8（V3）+u2rel，12（T3）=

2.248×10-6+8.751×10-5+8.259×10-6=9.81×10-5。

2.3.3 樣品重復(fù)性測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合產(chǎn)生的相對(duì)不確定度urel，17（C）

（1）樣品測(cè)量結(jié)果重復(fù)性偏差產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量u（X）。選用一份陽(yáng)性的樣品，選取6份，經(jīng)處理后，進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表3。

u2（X）=5.800×10-4 ng·mL-1

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的標(biāo)準(zhǔn)偏差引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。將氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)系列溶液測(cè)定3次，得到氧氟沙星與諾氟沙星-D5峰面積之比，取平均值。以氧氟沙星與諾氟沙星-D5的濃度之比X為橫坐標(biāo)，氧氟沙星與諾氟沙星-D5峰面積之比Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析。用最小二乘法擬合求出一元回歸方程及相關(guān)系數(shù)，計(jì)算結(jié)果見表4。

采用最小二乘法擬合濃度-峰面積之比的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，線性回歸方程為y=4.169 4x-0.173；相關(guān)系數(shù)為r=0.999 9，大于0.995，符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）標(biāo)準(zhǔn)要求，說(shuō)明氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度與諾氟沙星-D5標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度之比和氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)系列溶液與諾氟沙星-D5標(biāo)準(zhǔn)系列溶液峰面積之比具有顯著的線相關(guān)性。根據(jù)貝塞爾公式，標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)差SR為

SR（2）

式中：yij為氧氟沙星與諾氟沙星-D5峰面積之比；yi為回歸直線計(jì)算的值；n為標(biāo)準(zhǔn)工作液的點(diǎn)數(shù)，n=5；m為標(biāo)準(zhǔn)工作液每個(gè)測(cè)量點(diǎn)重復(fù)測(cè)量次數(shù)，

m=3。

（3）回歸系數(shù)斜率a產(chǎn)生的不確定度u（a）的平方為

（4）回歸系數(shù)截距b產(chǎn)生的不確定度u（b）的平方為

（5）儀器測(cè)量結(jié)果產(chǎn)生的不確定度。u（x）、u（y）、u（a）、u（b）之間相互獨(dú)立不相關(guān)，根據(jù)公式：

其中為靈敏系數(shù)；uc（yi）為不確定度分量。按照不確定度傳播律進(jìn)行合成，需先得出傳播系數(shù)，對(duì)線性方程y=ax+b求偏導(dǎo)。

氧氟沙星各分量靈敏系數(shù)為

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc（c）的平方為

樣品重復(fù)性測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合產(chǎn)生的相對(duì)不確定度的平方為

2.3.4 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel，18（I ）

根據(jù)廣東省計(jì)量科學(xué)研究出具的儀器校準(zhǔn)證書，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀引入的相對(duì)擴(kuò)展不確定度Urel=10%，k=2，按照矩形分布k=，得到儀器引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的平方為

2.4 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的評(píng)定ucrel（X）

根據(jù)含量計(jì)算公式，水產(chǎn)品（魚）中氧氟沙星殘留量測(cè)定的合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度由標(biāo)準(zhǔn)工作液配制產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度、定容體積產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度、樣品稱量過(guò)程中所產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度、樣品進(jìn)行重復(fù)性測(cè)定產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度等分量組成，結(jié)果見表5。

2.5 擴(kuò)展不確定度的評(píng)定

當(dāng)樣品中氧氟沙星的含量為66.1 μg·kg-1，在95%置信區(qū)間，包含因子k=2，則其擴(kuò)展不確定度為UP=kp×urel=2×3.78×6.1=5.0 μg·kg-1。

3 結(jié)論

當(dāng)樣品中氧氟沙星含量為66.1 μg·kg-1時(shí)，取置信水平p=95%（k=2），則其結(jié)果可以表示為（66.1±5.0）μg·kg-1（k=2）。通過(guò)計(jì)算合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度可得知，UHPLC-MS/MS測(cè)定水產(chǎn)品（魚）中氧氟沙星殘留量的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各分量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響程度的大小，為評(píng)定方法及結(jié)果的準(zhǔn)確性提供了可靠的依據(jù)。相對(duì)于樣品前處理過(guò)程中產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，配制標(biāo)準(zhǔn)工作液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度和儀器測(cè)量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度對(duì)總合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度影響較大。為了控制標(biāo)準(zhǔn)工作液配制工程中產(chǎn)生的誤差，應(yīng)使用高純品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，檢定合格的器具，定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。根據(jù)實(shí)際情況選擇合適濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，提高檢驗(yàn)員人員的操作水平，減少操作過(guò)程引入的不確定度。

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