關(guān)于食品中亞硝酸鹽測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍的探討

楊凱 郝夢(mèng)甄

摘 要：《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）中分光光度法測(cè)定亞硝酸鹽含量使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍窄。為擴(kuò)大標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，本文使用了增大吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液體積和提高標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩種方法優(yōu)化檢測(cè)方法。結(jié)果顯示，國(guó)標(biāo)法與兩種改進(jìn)方法無顯著性差異，且兩種改進(jìn)方法的準(zhǔn)確度、精密度、回收率均符合要求。因此，本文使用的兩種測(cè)定食品中亞硝酸鹽方法能夠滿足檢測(cè)要求。

關(guān)鍵詞：亞硝酸鹽；標(biāo)準(zhǔn)曲線；線性范圍

Discussion on the Linear Range of Standard Curve for Determination of Nitrite in Food

YANG Kai1， HAO Mengzhen2

（1.Pingyi County Center for Inspection and Testing， Pingyi 273300， China;

2.Laixi County Center for Inspection and Testing， Laixi 266600， China）

Abstract： In GB 5009.33—2016， the linear range of the standard curve used in the spectrophotometric determination of nitrite content is narrow. In order to expand the linear range of the standard curve， this paper uses two methods to optimize the detection method： increasing the volume of the standard solution and increasing the concentration of the standard solution. The results showed that there was no significant difference between the national standard method and the two improved methods， and the accuracy， precision and recovery of the two improved methods met the requirements. Therefore， the two methods used in this paper to determine nitrite in food can meet the detection requirements.

Keywords： nitrite; standard curve; linear range

亞硝酸鹽是一種常用的食品添加劑，主要起到防腐保鮮、提高熟肉制品的色澤和延長(zhǎng)腌制食品保質(zhì)期的作用，在腌臘肉制品類、西式火腿、醬鹵肉制品和肉灌腸類等食品中常被使用[1-2]。但食用過量的亞硝酸鹽會(huì)引起中毒甚至導(dǎo)致死亡，研究表明成人攝入0.2～0.5 g即可引起中毒，3 g即可致人死亡[3]。很多食品企業(yè)以及食品小作坊生產(chǎn)者對(duì)亞硝酸鹽的使用量沒有正確的認(rèn)識(shí)，因此加強(qiáng)食品中亞硝酸鹽含量的檢測(cè)十分重要。

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）中分光光度法測(cè)定食品亞硝酸鹽含量使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍窄，檢測(cè)亞硝酸鹽含量高的食品時(shí)會(huì)超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，只能通過稀釋原樣品的濃度再次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，這會(huì)造成實(shí)驗(yàn)效率低下，浪費(fèi)實(shí)驗(yàn)試劑。因此，本文采用增大吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液體積和提高標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩種方法擴(kuò)大標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，驗(yàn)證兩種方法的可行性，以提高工作效率，減少試劑的浪費(fèi)。

1 國(guó)標(biāo)中分光光度法測(cè)定食品中亞硝酸鹽存在的不足

1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍窄

《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）中使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為5 μg·mL-1，標(biāo)準(zhǔn)曲線的最大吸取體積是2.5 mL，

按照稱樣質(zhì)量5.0 g計(jì)算，得到該標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點(diǎn)的亞硝酸鹽含量為12.5 mg·kg-1[4]。但《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）中規(guī)定，腌臘肉制品類、醬鹵肉制品和肉灌腸類等的亞硝酸鹽限量為30 mg·kg-1，西式火腿的亞硝酸鹽限量為70 mg·kg-1，該標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍不能滿足日常食品中亞硝酸鹽含量的檢測(cè)[5]。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度值偏低

物質(zhì)吸光的定量依據(jù)為朗伯-比爾定律：A=kcL，當(dāng)吸光度A=0.434時(shí)，吸光度測(cè)量誤差最小[6]。如果要求測(cè)量誤差小于5%，則吸光度值A(chǔ)=0.050～1.500；測(cè)量誤差小于2%，則吸光度值A(chǔ)=0.155～0.950[6]。但《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）中標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)對(duì)應(yīng)的吸光度值為0、0.012、0.027、0.039、0.054、0.069、0.104、0.141和0.173，表明亞硝酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)曲線不在最佳線性范圍內(nèi)，這將造成較大實(shí)驗(yàn)誤差。

2 材料與方法

2.1 試劑與儀器

亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg·mL-1，北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院，編號(hào)：BWZ6967-2016）；乙酸鋅；對(duì)氨基苯磺酸；亞鐵氰化鉀；硼酸鈉；鹽酸萘乙二胺。

分光光度計(jì)（TU-1810）；分析天平（FA2004）；電熱恒溫水浴鍋（LKTC-B1）。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 國(guó)標(biāo)法

標(biāo)準(zhǔn)曲線使用濃度ρ（NaNO2）=5.0 μg·mL-1（以亞硝酸鈉計(jì)），吸取0 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL和2.50 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于50 mL比色管中。于各管中分別依次加入對(duì)氨基苯磺酸溶液、鹽酸萘乙二胺溶液，加水至50 mL刻度，混勻，靜置15 min，用1 cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)538 nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[4]。

2.2.2 改進(jìn)法一

標(biāo)準(zhǔn)曲線使用濃度ρ（NaNO2）=5.0 μg·mL-1（以亞硝酸鈉計(jì)），吸取0 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL、12.00 mL和14.00 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于50 mL比色管中。對(duì)氨基苯磺酸溶液、鹽酸萘乙二胺溶液加入順序、加入量、混勻后靜置時(shí)間以及測(cè)量波長(zhǎng)等條件均與2.2.1國(guó)標(biāo)法完全相同。

2.2.3 改進(jìn)法二

標(biāo)準(zhǔn)曲線使用濃度ρ（NaNO2）=25.0 μg·mL-1（以亞硝酸鈉計(jì)），吸取0 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.20 mL、1.60 mL、2.00 mL、2.40 mL和2.80 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于50 mL比色管中。對(duì)氨基苯磺酸溶液、鹽酸萘乙二胺溶液加入順序、加入量、混勻后靜置時(shí)間以及測(cè)量波長(zhǎng)等條件均與2.2.1國(guó)標(biāo)法完全相同。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中亞硝酸鈉的質(zhì)量（μg），縱坐標(biāo)為對(duì)應(yīng)的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1和圖2所示。國(guó)標(biāo)法的線性方程為y=0.014x-0.001 5，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6；改進(jìn)法一的線性方程為y=0.012 5x+0.013 6，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 0；改進(jìn)法二的線性方程為y=0.012 6x+0.013 2，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 0。通過相關(guān)系數(shù)可以看出，國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一、改進(jìn)法二線性關(guān)系良好，符合實(shí)驗(yàn)要求。

3.2 回收率的測(cè)定

隨機(jī)取一實(shí)驗(yàn)用樣品，用國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二分別重復(fù)實(shí)驗(yàn)，測(cè)得樣品中亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計(jì)，下同）的質(zhì)量分別為1.893 μg、1.872 μg、和1.889 μg。取上述實(shí)驗(yàn)用樣品，加入3種不同亞硝酸鹽含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二對(duì)每個(gè)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)重復(fù)測(cè)量7次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

由表1、表2、表3可知，國(guó)標(biāo)法測(cè)得回收率為89.0%～99.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.53%～2.56%；改進(jìn)法一測(cè)得回收率為88.9%～96.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.38%～2.56%；改進(jìn)法二測(cè)得回收率為88.5%～96.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.18%～3.02%。結(jié)果表明，改進(jìn)法一和改進(jìn)法二的加標(biāo)回收率均符合要求，數(shù)據(jù)穩(wěn)定性好。

3.3 準(zhǔn)確度和精密度的測(cè)定

將不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液使用國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二分別重復(fù)測(cè)量7次，比較所測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度。由表4、表5可知，國(guó)標(biāo)法測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度為-3.32%～2.55%，精密度為1.55%～3.60%；改進(jìn)法一測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度為-2.90%～2.58%，精密度為0.73%～2.27%；改進(jìn)法二測(cè)得結(jié)果的準(zhǔn)確度為-2.13%～2.06%，精密度為0.69%～2.55%。結(jié)果表明，改進(jìn)法一和改進(jìn)法二的準(zhǔn)確度、精密度均符合要求。

3.4 國(guó)標(biāo)法和改進(jìn)法的顯著性檢驗(yàn)

用國(guó)標(biāo)法、改進(jìn)法一和改進(jìn)法二分別對(duì)某實(shí)驗(yàn)樣品中亞硝酸鹽含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表6。所測(cè)得的數(shù)據(jù)用軟件SPSS 21.0進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，計(jì)算顯示，國(guó)標(biāo)法與改進(jìn)法一的P值為0.594＞0.05；國(guó)標(biāo)法與改進(jìn)法二的P值為0.301＞0.05。結(jié)果表明，與國(guó)標(biāo)法相比較，改進(jìn)法一、改進(jìn)法二所測(cè)得數(shù)據(jù)無顯著性差異，符合要求。

4 結(jié)論與討論

本文通過實(shí)驗(yàn)將《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33—2016）測(cè)定食品中亞硝酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍擴(kuò)大，以滿足實(shí)驗(yàn)室的日常使用。結(jié)果顯示，改進(jìn)法一、改進(jìn)法二與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果無顯著性差異，且改進(jìn)法一、改進(jìn)法二的準(zhǔn)確度、精密度、回收率均符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）的要求[7]。因此，可通過增大吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液體積或提高標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的方法擴(kuò)大標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍，從而提高工作效率，減少試劑的浪費(fèi)。

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