健康成人口腔微生物組成及功能的宏基因組學(xué)研究

人類口腔中生長(zhǎng)著大量的細(xì)菌、真菌、病毒和古生菌等微生物，形成了一個(gè)豐富的微生物群落，被稱為口腔微生物群，是人類體內(nèi)僅次于結(jié)腸微生物群的第二復(fù)雜的微生物群落

?？谇晃⑸锶号c宿主微環(huán)境之間復(fù)雜的相互作用，維持著口腔微生態(tài)區(qū)域的動(dòng)態(tài)平衡?？谇晃⑸鷳B(tài)一旦失衡，不僅會(huì)導(dǎo)致齲病

、牙周病

和口腔癌

等口腔疾病，還會(huì)引起糖尿病

、心血管疾病

、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

等全身系統(tǒng)性疾病?？谇晃⑸镆呀?jīng)成為了探究口腔疾病及相關(guān)全身系統(tǒng)性疾病生物標(biāo)志物的途徑，深入了解健康人群口腔微生物組的物種組成及功能基因代謝通路十分必要。

該病是氣傳病害，必須采取以種植抗病品種為主，藥劑防治和栽培措施為輔的綜合防治策略，才能有效地控制其為害。

隨著科技進(jìn)步，人們對(duì)口腔微生物的研究不再局限于傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法，而是有了一系列的高通量測(cè)序技術(shù)。比如常用的16S ribosomal DNA（16S rDNA）擴(kuò)增子測(cè)序技術(shù)和宏基因組學(xué)測(cè)序技術(shù)。兩種方法相比較而言，16S rDNA 擴(kuò)增子測(cè)序主要依賴于16S 基因中特定區(qū)域的測(cè)序，而選擇的這種特定區(qū)域可能代表性不足，導(dǎo)致生物類群分類學(xué)分析分辨率有限

。而Handelsman 等

于1998 年提出了宏基因組的概念，是指生態(tài)環(huán)境中全部微小生物遺傳信息的總和。與16S rDNA 擴(kuò)增子測(cè)序不同，宏基因組測(cè)序具有較高的分辨率，可以直接獲得可培養(yǎng)和不可培養(yǎng)微生物的全部遺傳信息，不僅可以發(fā)現(xiàn)一些豐度較低的細(xì)菌類群，而且可以分析樣本的功能基因，從而更深入地揭示口腔微生物群落的多樣性和復(fù)雜性

，為研究口腔微生物提供了極大的便利。

那天的黃昏是記憶中最美的，在清澈流淌的小河邊，一個(gè)簡(jiǎn)陋而又能遮風(fēng)雨的棚，雨后的斜陽(yáng)滲著無(wú)力的光，透過(guò)棚架，映在煙霧繚繞的方寸之地，生成了冷抽象的分割。昏暗中有人掛起了明亮的氣燈，燈在風(fēng)中搖曳，在動(dòng)感的燈光與太陽(yáng)的余暉交相掩映的瞬間，我看到了人們粗獷而善良的眼神，閃爍在驚喜的空間，那氛圍使人突然迸發(fā)出一種讓人畢生難忘的感動(dòng)。

目前對(duì)健康成人口腔微生物群落功能基因的研究并不多，在對(duì)人類口腔微生物的研究中多采集唾液、齦上菌斑、齦下菌斑這三種口腔微環(huán)境樣本，但由于本研究受試者的選擇均為牙周健康者，可供齦下微生物生長(zhǎng)的空間有限，因此本研究擬采用宏基因組學(xué)測(cè)序來(lái)描述健康成人受試者的唾液和齦上菌斑微生物群落組成及功能代謝途徑，為今后實(shí)現(xiàn)口腔疾病的微生物學(xué)精準(zhǔn)防治提供依據(jù)。

經(jīng)空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（審批號(hào)：KY20212053-F-2），本研究選取社區(qū)人群中符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)的健康受試者共10 名，平均年齡（42.20 ± 11.27）歲，男5 例（平均年齡40.00 歲），女5 例（平均年齡44.40 歲）。納入標(biāo)準(zhǔn): ①年齡≥18 歲；②同意參與本實(shí)驗(yàn)并自愿簽署知情同意書(shū)；③全口無(wú)明顯活動(dòng)性齲壞、牙周病、口腔膿腫、癌前病變、真菌感染和智齒冠周炎等口腔疾??；④所有受試者的余留牙數(shù)均大于等于28，齲失補(bǔ)指數(shù)（decayed,missing and filled teeth，DMFT）為0。排除標(biāo)準(zhǔn): ①近6 個(gè)月內(nèi)全身使用抗生素或免疫抑制劑等；②患有需要長(zhǎng)期用藥治療的全身系統(tǒng)性疾病，如糖尿病、腫瘤、心腦血管疾病等；③艾滋病、乙肝、梅毒等傳染性疾?。虎茉衅诩安溉槠诘膵D女；⑤近6 個(gè)月內(nèi)曾有過(guò)任何口腔藥物及手術(shù)治療史。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象的選擇

阿里又使勁點(diǎn)點(diǎn)頭。阿東又說(shuō)：“羅爹爹去東湖練拳，走不動(dòng)了。我們阿里每天早上用爸爸的輪椅推羅爹爹去，好不好？”

本組70例病患都接受CT和磁共振檢查，詳細(xì)如下：（1）CT檢查。指導(dǎo)取仰臥位，選擇雙層螺旋CT掃描儀，并設(shè)置層間距10～15mm，層厚20mm，然后再對(duì)病灶進(jìn)行全面的掃描，同時(shí)選擇病灶5mm厚度的部位進(jìn)行加層掃描。（2）磁共振檢查。指導(dǎo)取仰臥位，利用體線圈，便于成像。利用磁共振儀對(duì)患者施以全面的掃描，設(shè)計(jì)層厚為4～9mm，然后再對(duì)病灶施以4mm的薄層掃描。

1.2 樣本采集

所有受試者采樣前1 天晚飯后刷牙，然后禁飲食、禁止刷牙，直至第二天早上進(jìn)行唾液和齦上菌斑樣本的采集。唾液樣本：采集樣本之前囑咐受試者切勿咳痰，采用非刺激性的方法獲得唾液樣本，讓唾液自然流入50 mL 無(wú)菌離心管中，收集量至少達(dá)到10 mL（唾液中不含血、食物殘?jiān)?、痰等雜質(zhì)）。齦上菌斑樣本：使用無(wú)菌刮匙刮取受試者上下頜前牙、前磨牙、磨牙頰舌側(cè)牙頸部菌斑，并置于含有PBS 緩沖液的1.5 mL 無(wú)菌EP 管中。對(duì)所有采集到的樣本進(jìn)行分組編號(hào)（唾液組命名為A，齦上菌斑組命名為B，共20 個(gè)樣本）后置于液氮里冷凍，并在2 h 內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，放于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。

1.3 樣本DNA 提取

根據(jù)產(chǎn)品制造商的說(shuō)明，通過(guò)NEBNext 微生物組DNA 富集試劑盒（New England Biolabs，美國(guó)）提取唾液及齦上菌斑樣本微生物群落DNA。使用Qubit dsDNA BR 分析試劑盒（Invitgen，美國(guó)）和熒光光度計(jì)（Qubit Fluorometer，美國(guó)）對(duì)微生物群落DNA 進(jìn)行定量，并在1%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行質(zhì)量檢查。

定期邀請(qǐng)已畢業(yè)的優(yōu)秀學(xué)生和公司的人力資源主管給學(xué)生作報(bào)告，由他們講述公司的人才需求和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)學(xué)生在校學(xué)習(xí)也有積極作用。每年學(xué)校的畢業(yè)生雙選會(huì)，食品科學(xué)與工程專業(yè)都會(huì)邀請(qǐng)行業(yè)知名企業(yè)高管參加座談會(huì)，把脈行業(yè)發(fā)展趨勢(shì)，探討行業(yè)企業(yè)對(duì)畢業(yè)生的知識(shí)能力素質(zhì)需求，站在企業(yè)的角度上探討學(xué)生評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)，改進(jìn)現(xiàn)有的教學(xué)評(píng)價(jià)系統(tǒng)，促進(jìn)學(xué)生全面發(fā)展。

1.4 宏基因組文庫(kù)的構(gòu)建

本實(shí)驗(yàn)中20 例樣本共注釋到49 個(gè)門(mén)、72 個(gè)綱、146 個(gè)目、322 個(gè)科、1 185 個(gè)屬、4 450 個(gè)種，對(duì)各個(gè)物種分類水平上的菌群分布結(jié)果進(jìn)行分析，詳見(jiàn)圖2。在門(mén)水平，所有樣本的共有優(yōu)勢(shì)菌門(mén)為變形菌門(mén)（32.51%）、擬桿菌門(mén)（30.81%）、放線菌門(mén)（16.23%）、厚壁菌門(mén)（10.49%）、梭桿菌門(mén)（5.45%）、

門(mén)（1.03%）、螺旋體門(mén)（0.48%）、衣原體門(mén)（0.15%）、浮霉菌門(mén)（0.05%）、藍(lán)細(xì)菌門(mén)（0.04%），這10 個(gè)菌門(mén)占據(jù)了97.24% 以上。在種水平，所有樣本的共有優(yōu)勢(shì)菌種為馬氏棒狀桿菌（3.84%）、副流感嗜血菌（2.91%）、產(chǎn)黑色素普雷沃菌（2.76%）、奇異勞特普羅菌（2.47%）、

（2.01%）、丙酸丙酸桿菌（1.99%）、牙周梭桿菌（1.44%）、具核梭桿菌（1.19%）、腦膜炎奈瑟菌（1.13%）、人心桿菌（1.12%），共占了20.86%以上，約44.21%的菌種尚未被命名，表明了人類口腔微生物群落中仍有大量物種尚未被發(fā)現(xiàn)。

1.5 上機(jī)測(cè)序及數(shù)據(jù)組裝

質(zhì)控合格的文庫(kù)在MGISEQ-2000 平臺(tái)（BGI-深圳，中國(guó)）測(cè)序。所有原始數(shù)據(jù)用軟件SOAPnuke（v.1.5.2）進(jìn)行修剪。為了獲得功能信息，將蛋白質(zhì)序列與eggNOG 數(shù)據(jù)庫(kù)（2015-10），CAZy 數(shù)據(jù)庫(kù)（2017-09），KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)（89.1）等進(jìn)行功能注釋，E值的截止值為1e

。

1.6 生物信息學(xué)分析和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過(guò)長(zhǎng)久的相互適應(yīng)及功能融合，口腔微生物群落已經(jīng)和人體組成了一個(gè)完整的有機(jī)體?？谇晃⑸锶郝涫д{(diào)往往會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生，應(yīng)深入了解、探究健康狀況下的口腔微生物發(fā)生發(fā)展規(guī)律，從而設(shè)法維持口腔微生態(tài)環(huán)境的平衡，保持機(jī)體健康。近年來(lái)對(duì)口腔微生物的研究方法有培養(yǎng)法、16s rDNA 測(cè)序及宏基因組學(xué)測(cè)序方法。因?yàn)樵S多種類口腔微生物區(qū)系是不可培養(yǎng)的，故傳統(tǒng)培養(yǎng)法限制了對(duì)口腔微生物群的研究；16s rDNA 測(cè)序方法雖然能發(fā)掘無(wú)法培養(yǎng)的細(xì)菌、培養(yǎng)陰性的細(xì)菌、稀有細(xì)菌等

，但是它并不能在種水平上提供足夠高的分辨率來(lái)識(shí)別細(xì)菌，且不能同時(shí)探究口腔微生物的重要非細(xì)菌成分，包括真核微生物（真菌、原生動(dòng)物）和病毒等

。因此，本研究采用具有高分辨率的宏基因組學(xué)方法對(duì)健康成人的口腔微生物進(jìn)行物種組成及功能分析。

2 結(jié) 果

2.1 測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

構(gòu)建唾液及齦上菌斑基因集的維恩圖（圖4a），兩組基因集中包含共有基因462 243 個(gè)，唾液樣本中特有基因有259 038 個(gè)，齦上菌斑樣本組特有基因有581 874 個(gè)。齦上菌斑組基因集中的基因數(shù)目遠(yuǎn)高于唾液組（圖4b）。

2.2 物種稀疏曲線分析

為了檢驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)樣本量是否足夠，對(duì)唾液和齦上菌斑樣本的測(cè)序物種數(shù)目進(jìn)行稀疏曲線分析（唾液組命名為A，齦上菌斑組命名為B），如圖1 所示：隨著樣本量的增加，稀疏曲線末端逐漸平緩，檢測(cè)到的物種數(shù)目不再增加，表明樣本量能夠滿足本實(shí)驗(yàn)的要求。

2.3 健康口腔樣本在各分類水平上的微生物組成

用Covaris 儀（Covaris，美國(guó)）隨機(jī)擴(kuò)增1 μg 質(zhì)檢合格的DNA。用磁珠篩選片段DNA，平均大小為200～400 bp。篩選出的片段經(jīng)過(guò)末端修復(fù)，3’端腺苷酸、接頭連接、PCR 擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)磁珠純化。對(duì)雙鏈PCR 產(chǎn)物進(jìn)行熱變性，并用夾板寡核苷酸序列進(jìn)行環(huán)化。將單鏈環(huán)狀DNA 格式化為最終文庫(kù)，并經(jīng)質(zhì)控鑒定。

2.4 物種多樣性分析

2.4.1 唾液和齦上菌斑兩組間Alpha 多樣性分析對(duì)唾液樣本及齦上菌斑樣本微生物群落在種水平上的Alpha 多樣性（Shannon、Simpson、Chao1 指數(shù)）進(jìn)行分析，詳見(jiàn)表1。齦上菌斑組的Alpha 多樣性指數(shù)均高于唾液組。通過(guò)Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)分析，兩組Alpha 多樣性指數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05），說(shuō)明齦上菌斑樣本的物種豐富度和均勻度均高于唾液樣本。

利用Wilcoxon 非參數(shù)秩和檢驗(yàn)進(jìn)行唾液和齦上菌斑兩群落間種水平上的物種組成差異分析。結(jié)果顯示：唾液微生物中副流感嗜血菌、產(chǎn)黑色素普雷沃菌、牙周梭桿菌、中間普雷沃菌、坦納擬普雷沃菌、淺黃奈瑟菌、變黑普雷沃菌、組織普雷沃菌、輕型鏈球菌等較齦上菌斑豐富（

＜0.05）；而齦上菌斑樣本中馬氏棒狀桿菌、產(chǎn)酸丙酸桿菌、黏性放線菌、奇異勞特普羅菌、丙酸丙酸桿菌、具核梭桿菌、延長(zhǎng)奈瑟菌、內(nèi)氏放線菌、牙齦二氧化碳噬纖維菌、馬氏放線菌、齲齒羅氏菌等比唾液中豐富（

＜0.05）。

2.5 唾液和齦上菌斑兩群落間種水平上的物種組成差異

2.4.2 唾液和齦上菌斑兩組間微生物群落Beta 多樣性分析 唾液與齦上菌斑兩組樣本微生物群落種水平上的Beta 多樣性采用主成分分析（principal components analysis，PCA）和Anoism 分 析 進(jìn) 行 計(jì)算。結(jié)果如圖3a 和圖3b 所示：PCA 分析表明兩組樣本間明顯能各自聚類，Anoism 分析表明唾液與齦上菌斑樣本的微生物群落構(gòu)成差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

=0.936，

=0.000 2）。

2.6 健康成人唾液及齦上菌斑基因集構(gòu)建

20 個(gè)樣本測(cè)序下機(jī)數(shù)據(jù)量（raw data）均值為11 817 225 240，去除低質(zhì)量數(shù)據(jù)，獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)（clean deta）量均值為11 421 498 690，有效數(shù)據(jù)率均值為96.74%。

2.7 唾液與齦上菌斑微生物功能組成及代謝通路差異

KEGG Orthology 功能數(shù)據(jù)庫(kù)注釋得到唾液和齦上菌斑微生物功能代謝途徑的直觀分布圖，如圖5a 所示，口腔微生物KEGG 功能代謝途徑主要集中在碳水化合物代謝、氨基酸代謝、輔酶和維生素的代謝、膜轉(zhuǎn)運(yùn)、能量代謝。利用KEGG 通路數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)唾液和齦上菌斑微生物的功能代謝途徑差異進(jìn)行了鑒定,得到兩組間共有53 個(gè)差異代謝通路（reporter score 絕對(duì)值＞1.65），按豐度值取前38 名作功能代謝通路差異分布圖，結(jié)果如圖5b 所示。結(jié)果顯示唾液微生物功能代謝途徑中鞭毛組裝、鐵載體非核糖體肽的生物合成、戊糖-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)換、淀粉與蔗糖的代謝、亮氨酸和異亮氨酸降解、精氨酸生物合成較齦上菌斑豐富，而齦上菌斑中丙酮酸代謝、糖酵解/糖合成、嘌呤代謝、碳代謝、生物素代謝、核黃素代謝等途徑較唾液中豐富。

3 討 論

利用R 語(yǔ)言包在物種、功能基因和KO 水平上進(jìn)行組成分析，用Shannon 指數(shù)、Simpson 指數(shù)、Chao1 指數(shù)對(duì)微生物α 多樣性進(jìn)行量化，基于樣本相似性距離矩陣進(jìn)行PCA 分析及Anoism 分析計(jì)算β 多樣性；使用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，通過(guò)Wilcoxon 非參數(shù)檢驗(yàn)確定不同組間物種及功能差異顯著的特征（

＜0.05）；采用MetaGeneMark 算法程序?qū)y(cè)序得到的宏基因組基因從頭預(yù)測(cè)，然后通過(guò)CD-hit 算法程序進(jìn)行基因集去冗余得到高質(zhì)量基因集。根據(jù)Reporterscore 評(píng)分值確定差異富集的KEGG 通路，以評(píng)分絕對(duì)值≥1.65 作為顯著性檢測(cè)閾值。

充足的樣本量是研究的基礎(chǔ)和前提，能夠保證研究信息的完整性。本研究通過(guò)稀疏性曲線分析結(jié)果可知，隨著樣本數(shù)目增加，曲線末端趨于平緩，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量是足夠的。通過(guò)物種注釋得到達(dá)1 185 個(gè)屬、4 450 個(gè)種，檢測(cè)到的各分類學(xué)水平的物種數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)與同類研究16S rDNA口腔微生物測(cè)序的結(jié)果

。微生物組成分析結(jié)果顯示口腔微生物中變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、放線菌門(mén)、厚壁菌門(mén)、梭桿菌門(mén)等占整個(gè)口腔微生物群菌門(mén)的97.2%，與現(xiàn)有人類口腔微生物基因組數(shù)據(jù)庫(kù)的結(jié)果一致

。這些研究表明在不相關(guān)的健康個(gè)體中發(fā)現(xiàn)的大多數(shù)口腔分類群是相似的，并且支持了口腔健康核心微生物組的概念。

口腔是一個(gè)非常復(fù)雜的環(huán)境，不同的微生物優(yōu)先在不同的棲息地定居

。深入分析掌握口腔各空間不同微生態(tài)的菌群特點(diǎn)，可能是人類成功調(diào)節(jié)口腔微生物及進(jìn)行口腔疾病防治的關(guān)鍵。本研究結(jié)果顯示，唾液和齦上菌斑樣本微生物群落微生物多樣性及菌群構(gòu)成具有明顯差異，齦上菌斑相比唾液微生物具有更高的豐富度和均勻度，唾液微生物中產(chǎn)黑色素普雷沃菌、牙周梭桿菌、中間普雷沃菌、變黑普雷沃菌等牙周致病菌較齦上菌斑豐富，而齦上菌斑樣本中產(chǎn)酸丙酸桿菌、黏性放線菌、丙酸丙酸桿菌、具核梭桿菌、內(nèi)氏放線菌、齲齒羅氏菌等齲病致病菌比唾液中豐富。由此筆者推測(cè)唾液微生物組特征對(duì)識(shí)別牙周病易感個(gè)體更加敏感，而齦上菌斑微生物組特征可能對(duì)識(shí)別齲病易感個(gè)體更加敏感；這一結(jié)果和最近幾項(xiàng)研究相符，Yang 等

通過(guò)對(duì)乳磨牙和上頜第一恒磨牙的齦上菌斑和非刺激性唾液樣本測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)相比唾液，齦上菌斑是研究齲病菌群的最佳微生物群落。此外，Acharya 等

利用唾液微生物種類將慢性牙周炎患者與健康對(duì)照組區(qū)分開(kāi)來(lái)，并發(fā)現(xiàn)唾液微生物組特征或許能夠準(zhǔn)確識(shí)別出牙周炎易感個(gè)體。但是由于本實(shí)驗(yàn)樣本量有限且口腔微生物受到研究對(duì)象飲食、生活習(xí)慣等多種因素的影響，這就限制了以上結(jié)果的普適性。本研究結(jié)果顯示物種豐度分布在兩個(gè)細(xì)菌群落之間有很大的不同，Segata 等

研究結(jié)果也表明齦上菌斑微生物中棒狀桿菌屬、二氧化碳噬纖維菌屬、羅氏菌屬、卟啉單胞菌屬相對(duì)豐度占據(jù)了2%以上，而唾液微生物中，鏈球菌屬、韋榮菌屬、普雷沃菌屬、奈瑟菌屬、梭桿菌屬、放線菌屬和纖毛菌屬的相對(duì)豐度均超過(guò)2%。齦上菌斑和唾液微生物的這種顯著差異可能來(lái)源于多種因素，不同口腔微生態(tài)環(huán)境的理化性質(zhì)不同，唾液微生物多為浮游微生物，而牙齒表面為齦上菌斑提供了不同的細(xì)菌粘附受體，生物膜內(nèi)部的協(xié)同和拮抗作用也可能會(huì)介導(dǎo)菌群不同的定植和分布

。

不同口腔微生態(tài)菌群的功能代謝途徑也可能不同。本研究發(fā)現(xiàn)口腔健康受試者的口腔微生物KEGG 功能代謝途徑主要集中在碳水化合物代謝、氨基酸代謝、輔酶和維生素的代謝等。其中，碳水化合物代謝是口腔微生物的重要代謝途徑。當(dāng)碳水化合物途徑發(fā)生變化時(shí)，口腔微生態(tài)的生態(tài)平衡便會(huì)被打破，口腔致病菌也會(huì)隨之變化

，比如糖酵解途徑增加，會(huì)使口腔微生態(tài)呈現(xiàn)酸性環(huán)境，變形鏈球菌、乳酸桿菌等耐酸菌便會(huì)成為優(yōu)勢(shì)菌種，并最終導(dǎo)致齲病的發(fā)生

。本研究唾液和齦上菌斑微生物功能代謝途徑差異分析結(jié)果顯示，唾液中亮氨酸代謝較齦上菌斑豐富。亮氨酸是支鏈氨基酸，可以通過(guò)脫氨、脫羧、還原生成乙酰輔酶A，分別轉(zhuǎn)化為異丁酸和異戊酸，而唾液中較豐富的中間普雷沃菌便可利用此途徑

，這與本研究物種分布結(jié)果相符。同時(shí)唾液中的牙周梭桿菌和普雷沃特氏菌可以利用精氨酸，通過(guò)精氨酸脫亞胺酶及胍丁胺脫亞胺酶系統(tǒng)代謝途徑中和酸性環(huán)境，生態(tài)環(huán)境一旦失衡可能促進(jìn)更多這種牙周病細(xì)菌的引入

。齦上菌斑中丙酮酸代謝較唾液豐富，其中與之相對(duì)應(yīng)的溶糖細(xì)菌如丙酸桿菌、放線菌可通過(guò)丙酮酸代謝途徑，通過(guò)各種分支途徑進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為乳酸、醋酸、乙醇和甲酸鹽

。以上結(jié)果均說(shuō)明了對(duì)口腔微生物的研究不僅要關(guān)注微生物組成的改變，對(duì)口腔微生態(tài)功能基因代謝途徑的探究能使人們對(duì)口腔疾病的發(fā)病機(jī)制更加了解。

綜上所述，本研究對(duì)健康成人口腔微生物各分類學(xué)水平組成及功能基因進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)黑普雷沃菌、副流感嗜血菌、

在健康人群唾液內(nèi)為優(yōu)勢(shì)菌群，馬氏棒狀桿菌、奇異勞特普羅菌、丙酸丙酸桿菌在健康人群齦上菌斑內(nèi)為優(yōu)勢(shì)菌群，碳水化合物代謝在健康受試者口腔微生物代謝中起著重要作用。本研究結(jié)果可能和所有關(guān)注口腔微生物組及口腔疾病微生物變異的研究相關(guān)，可為描述各類型疾病期間發(fā)生的口腔微生物的失調(diào)狀況提供基線理論參考。但本研究也存在一定的局限性，如樣本數(shù)量有限導(dǎo)致研究結(jié)果可能不夠全面；此外，本研究只對(duì)健康成人口腔微生物進(jìn)行了分析，沒(méi)有對(duì)牙周病、齲病等口腔疾病狀態(tài)下的口腔微生物進(jìn)行研究。因此，今后的研究還需擴(kuò)大樣本量對(duì)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，并對(duì)牙周病、齲病等口腔疾病狀態(tài)下口腔微生物組成和功能基因的改變進(jìn)行探究，以深入了解人類口腔微生物群落在健康和疾病中發(fā)揮的實(shí)際作用。

四川盆地長(zhǎng)寧-威遠(yuǎn)頁(yè)巖氣開(kāi)發(fā)示范區(qū)生產(chǎn)廢水管理…………………………………………………………(4):113

Li YJ collected, measured and analyzed the data and wrote the article. Cheng XG analyzed the data. Qian F, Pan YT and Chen LY collected and measured the data. Tian Y designed the study and revised the article. All authors read and approved the final manuscript as submitted.

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