血清NPY水平與子宮內(nèi)膜異位癥患者疼痛及焦慮、抑郁的相關(guān)性

章永平

[摘要] 目的 分析、探討血清神經(jīng)肽Y（NPY）表達水平與子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）患者疼痛、焦慮和抑郁癥狀的相關(guān)性。方法 采集2018年1月至2020年12月江西省人民醫(yī)院病理診斷為子宮內(nèi)膜異位癥患者108例的血清標(biāo)本和健康對照者102例的血清標(biāo)本，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（Elisa法）檢測血清NPY在研究組和對照組以及研究組不同疼痛程度組間的表達，同時探討血清NPY與EMS患者焦慮、抑郁的關(guān)系。結(jié)果 血清NPY在對照組中表達水平為（95.13±11.04）pg/ml，在研究組中表達水平為（147.80±21.83）pg/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;EMS患者疼痛程度越強，血清NPY水平越高，疼痛亞組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;EMS疼痛伴焦慮、抑郁者與對照組相比，血清NPY表達低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 血清NPY在EMS患者中高表達，其水平與EMS患者疼痛程度正相關(guān)，與EMS疼痛患者焦慮、抑郁程度負相關(guān)，表明NPY可能參與EMS的發(fā)病機制，其表達與EMS機體的情感障礙、應(yīng)激狀態(tài)密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 神經(jīng)肽Y;子宮內(nèi)膜異位癥;疼痛;焦慮;抑郁

[中圖分類號] R711.71? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）07-0051-04

Correlation between serum NPY level and pain， anxiety and depression in patients with endometriosis

ZHANG Yongping

Department of Gynecology， Jiangxi Provincial People′s Hospital， the First Affiliated Hospital of Nanchang Medical College，Nanchang? 330006， China

[Abstract] Objective To analyze the association between serum neuropeptide Y （NPY） expression and pain， anxiety， and depression in patients with endometriosis （EMS）. Methods Serum samples were collected from 108 patients with pathologically diagnosed endometriosis and 102 healthy subjects in Jiangxi Provincial People’s Hospital from January 2018 to December 2020. The enzyme linked immunosorbent assay （Elisa） method was used to detect the expression of serum NPY in the study group， the control group and the groups with different pain levels in the study group， and the relationship between serum NPY and anxiety and depression of patients in the study group was analyzed. Results The expression level of serum NPY was [95.13±11.04]pg/ml in the control group and [147.80±21.83]pg/ml in the study group， with a statistically significant difference （P<0.05）. The more severe the pain was in EMS patients， the higher the serum NPY level was， and statistically significant differences were observed between the pain subgroups （P<0.05）. The expression of serum NPY in patients with EMS pain accompanied by anxiety and depression was lower， with a statistically significant difference （P<0.05）. Conclusion Serum NPY is highly expressed in EMS patients， and its level is positively correlated with the degree of pain in EMS patients， but negatively correlated with anxiety and depression in EMS patients， suggesting that NPY may be involved in the occurrence and development of endometriosis， and its expression is closely related to the stress state of the body with endometriosis.

[Key words]Neuropeptide Y （NPY）; Endometriosis （EMS）; Pain; Anxiety; Depression

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMS）是婦科常見病，多見于生育期女性，但其發(fā)生、發(fā)展機制仍不為世人所熟知。疼痛癥狀是折磨患者的頭號慢性殺手，因此EMS相關(guān)疼痛成為臨床研究亟待解決的問題。眾所周知，慢性疼痛疾病患者往往伴隨著心理障礙，因此，EMS患者經(jīng)歷漫長的疼痛過程常伴有不同程度的心理障礙，臨床亦急需在解決子宮內(nèi)膜異位癥疼痛的同時，治療其心理障礙。

肽類神經(jīng)遞質(zhì)中神經(jīng)肽Y（neuropeptide Y，NPY）分布廣泛，可存在于機體各大系統(tǒng)的器官交感神經(jīng)中，機體一旦發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，如亢奮、緊張等情緒波動，交感神經(jīng)興奮將導(dǎo)致去甲腎上腺素（norepinephrine，NE）釋放，NE刺激交感神經(jīng)立即高效合成NPY并釋放入血，NPY調(diào)控其相關(guān)受體完成機體指令發(fā)出的相應(yīng)生理功能，最終參與機體應(yīng)激器官的保護功能[1]。NPY在充血性心力衰竭、冠心病、糖尿病、原發(fā)性高血壓、神經(jīng)、精神等多系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起到極其重要的作用。本文研究NPY在EMS患者的血清表達水平，以求證實其與EMS疼痛、焦慮、抑郁的相關(guān)性，進一步探討NPY可能參與EMS的疼痛機制與應(yīng)激機制，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象為2018年1月至2020年12月江西省人民醫(yī)院108例EMS疼痛患者（研究組）及102名健康查體女性（對照組），問卷回收率100%，問卷調(diào)查前與患者及健康查體人員詳細解釋并征得對方自愿同意后簽署知情同意書。

問卷調(diào)查均在規(guī)定時間、場所內(nèi)完成，由研究組成員協(xié)助完成一般情況調(diào)查表、簡化視覺模擬評分（visual analogue scale，VAS）（Cronbach′s ɑ=0.85）、自評焦慮量表（self-rating anxiety scale，SAS）（Cronbach′s ɑ=0.897）、自評抑郁量表（self-rating depression scale，SDS）（Cronbach′s ɑ=0.788）。根據(jù)一般情況調(diào)查表，研究組患者與對照組人員在年齡、文化程度（高中以上）、既往有無重大疾病史、心理疾病史比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。見表1。

VAS 0分為無痛組、1～3分為輕微痛組、4～6分為中等痛組、≥7分為重度疼痛組;SAS標(biāo)準(zhǔn)閾值設(shè)定為40分，40分以上為焦慮[2];SDS標(biāo)準(zhǔn)閾值設(shè)定為50分，50分以上為抑郁[3]。

問卷內(nèi)容、目的及程序均經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批同意。問卷時長20～30 min，問卷全部真實、有效，結(jié)束后立即采集210人肘靜脈血5 ml，靜置15 min后取血清，放置離心機內(nèi)2500 r/min離心15 min，移液槍吸取上清液后用eppendorf管封管，標(biāo)記，凍存于-80℃冰箱中待用。

1.2 方法

NPY Elisa試劑盒由Cloud Clone Corp. USA公司生產(chǎn)（貨號CEA879Hu，批號L181012416），實驗耗材和儀器分別由江西省人民醫(yī)院病理實驗室、中心實驗室和PCR實驗室提供。

①碳酸鹽緩沖液加入抗體中逐漸稀釋，直至蛋白質(zhì)含量為5 μg/ml左右，聚苯乙烯酶標(biāo)板（Elisa Plate）96孔每個小孔中均加入100 μl，在恒溫冰箱中4℃過夜，第2天吸去孔內(nèi)溶液，緩沖液沖洗3次。②每孔再加入200 μl封閉液，于37℃恒溫箱中孵育2 h后放入洗板機，洗滌3遍。經(jīng)過生理鹽水稀釋的100 μl血清上清液樣品加至已經(jīng)過處理的反應(yīng)孔中，均以標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白孔進行比對，然后再以陰性和陽性對照孔比對質(zhì)控。③封板后再次放入恒溫箱中孵育2 h，洗滌3遍后加入抗體，并在每個孔中加入100 μl抗體稀釋液。⑥再次封板后又放入恒溫箱中孵育1 h，再次洗滌3遍后，在每個孔中加入100 μl酶反應(yīng)稀釋液。⑦再次封板后放入恒溫箱避光孵育30 min，再次洗滌3遍后，恒溫箱內(nèi)避光，在每個孔中加入100 μl TMB底物溶液，標(biāo)準(zhǔn)品孔經(jīng)底物溶液稀釋后出現(xiàn)明顯色澤梯度為止。⑧每個反應(yīng)孔中均加入100 μl 2M硫酸溶液，孔內(nèi)顏色逐漸由藍變?yōu)辄S。10 min內(nèi)在酶標(biāo)儀上，450 nm處以空白孔對照調(diào)零后，再測各孔OD值進行測定結(jié)果并逐一記錄。

1.3 觀察指標(biāo)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和OD值設(shè)定NPY標(biāo)準(zhǔn)曲線作為觀察指標(biāo)，再依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別計算出樣本的濃度值，并一一記錄。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，P值均取雙側(cè)概率，α值均取0.05為檢驗水準(zhǔn)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗和F檢驗，如差異較顯著則采用LSD-t檢驗進行組間兩兩比較校正，計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組血清NPY水平比較

研究組血清NPY水平表達明顯高于對照組（P<0.001），表明NPY可能參與EMS的發(fā)病機制。見表2。

2.2 不同疼痛程度的EMS患者血清NPY水平比較

根據(jù)VAS將研究組劃分為不同疼痛程度的4組（無痛組、輕微痛組、中等痛組、重度疼痛組），其4組間血清NPY水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，重度疼痛組表達最高，無痛組表達最低，各組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.3 研究組與對照組SAS、SDS評分比較，研究組血清NPY在不同焦慮、抑郁程度患者中的表達

研究組SAS評分顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4。按照SAS評分劃分標(biāo)準(zhǔn)，將研究組劃分為無焦慮組（n=49）和焦慮組（n=59），焦慮組與無焦慮組比較，血清NPY表達更低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表5。

研究組SDS評分顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表6。按照SDS評分劃分標(biāo)準(zhǔn)，將研究組劃分為無抑郁組（n=47）和抑郁組（n=61），抑郁組與無抑郁組比較，血清NPY表達更低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表7。

3 討論

NPY作為神經(jīng)肽家族中一員，廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)，是一種多效性因子，參與機體多項重要的生理功能，如影響細胞增殖、心血管和代謝功能和神經(jīng)元興奮性[4]。研究最多、影響最廣的表現(xiàn)在以下幾個方面：血清NPY水平可以在心肌缺血缺氧或心肌梗死、高血壓等狀態(tài)下起伏明顯[5];慢性腎功能衰竭患者血清中NPY表達升高顯著[6];血清NPY還對胰島素分泌起調(diào)控作用，參與飲食、生長發(fā)育等內(nèi)分泌的調(diào)控[7]。以上均與機體應(yīng)激狀態(tài)關(guān)系密切。近年血清NPY與神經(jīng)性疼痛的研究進展迅速，F(xiàn)u等[8]報道了NPY作用于脊髓NPY Y1受體，抑制脊髓背角細胞內(nèi)由外周神經(jīng)損傷誘導(dǎo)，驅(qū)動慢性神經(jīng)性疼痛的感覺和情感成分的信號通路，Sun等[9]研究發(fā)現(xiàn)表明，NPY基因可能在神經(jīng)性疼痛中發(fā)揮重要作用，可能將來作為神經(jīng)性疼痛的治療靶點。血清中NPY除了血小板釋放以外，大多數(shù)來源于支配部位的交感神經(jīng)，交感神經(jīng)受到外界刺激引起興奮產(chǎn)生NPY，釋放入血，因而NPY血清水平可從側(cè)面反映機體的應(yīng)激狀態(tài)。本研究中血清NPY水平隨EMS疼痛及疼痛相關(guān)的焦慮、抑郁程度而變化，論證NPY與機體的應(yīng)激狀態(tài)相關(guān)。

近些年較多文獻報道NPY與情感、心理的關(guān)系密切，NPY系統(tǒng)可能是神經(jīng)保護或抗抑郁化合物的潛在治療靶點，尤其是Y2和Y5受體在神經(jīng)系統(tǒng)疾病和精神疾病如抑郁癥中的神經(jīng)保護作用[10]。動物實驗研究證實，海馬中NPY低表達的大鼠比正常表達的大鼠更傾向于情緒低落，NPY表達水平與情感障礙密切相關(guān)，由此推斷NPY低表達基因型人群同樣會表現(xiàn)出強烈的負面情緒[11]。但是，當(dāng)機體長期處于應(yīng)激狀態(tài)下，血清NPY水平會逐漸下調(diào)，從而出現(xiàn)情感障礙，由此可見血清NPY對機體應(yīng)激反應(yīng)起到重要的調(diào)控作用[12];研究還發(fā)現(xiàn)，NPY也可反作用降低下丘腦的生物學(xué)作用，從而反作用調(diào)低應(yīng)激反應(yīng)[13]。通過蛋白、基因等不同層面的實驗方法均證實NPY表達與抑郁程度密切相關(guān)[14]。更為有趣的是，焦慮和抑郁患者經(jīng)治療癥狀明顯緩解后，血清NPY表達可上調(diào)至正常，表明NPY水平與焦慮、抑郁密切相關(guān)[15]，由此推斷NPY可成為抗抑郁藥研究熱點。那么NPY通過何種途徑起調(diào)控作用？有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，血清NPY可能通過其受體Y1和/或Y2產(chǎn)生級聯(lián)效應(yīng)，起到抗焦慮、抗抑郁和抑制癲癇的作用[16]。內(nèi)源性NPY能夠起到調(diào)控機體應(yīng)激狀態(tài)，那么外源性NPY是否亦有此功效呢？有研究將NPY注入大鼠海馬CA3區(qū)后，再注入外源性Y1受體可以起到較明顯致抗抑郁作用，而注入外源性Y2受體卻可增加抑郁[17]。受此啟發(fā)，實驗證明注射外源性NPY、Y1受體激動劑可明顯抗焦慮和（或）抑郁作用，而外源性NPY拮抗劑有明顯致焦慮或抑郁的作用[18]。由此可見，NPY通過調(diào)節(jié)其受體Y1、Y2來調(diào)控諸如焦慮、抑郁等情緒應(yīng)激行為，NPY-Y1通路和NPY-Y2通路可能在應(yīng)激狀態(tài)調(diào)控過程中分別擔(dān)任不同的作用[19]。為進一步了解Y1、Y2受體是協(xié)同還是拮抗作用，實驗人員通過情緒障礙動物模型得到驗證，NPY-Y1通路能夠明顯緩解動物的情緒焦慮和抑郁，而NPY-Y2通路則恰恰相反，由此斷定NPY-Y1通路和NPY-Y2通路在情緒調(diào)控方面是相反或拮抗作用[20]。當(dāng)然也存在少數(shù)不同觀點，認為血清NPY水平并不能真實反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中的NPY水平表達，因而認定其與抑郁焦慮等心理障礙和應(yīng)激狀態(tài)無明顯相關(guān)性[21]，有待于進一步驗證。綜合以上，大多數(shù)文獻認定NPY參與機體疼痛機制，參與機體調(diào)節(jié)焦慮、抑郁心理障礙機制。本研究結(jié)論與大多數(shù)文獻結(jié)論相一致，在EMS患者中NPY可能參與EMS疼痛、焦慮和抑郁機制。

本研究結(jié)果證實NPY在EMS患者血清中水平較健康人群高，表明其可能參與EMS的發(fā)生、發(fā)展;血清NPY與EMS疼痛程度表達一致，表明其與EMS疼痛密切相關(guān);血清NPY與EMS疼痛相關(guān)的焦慮、抑郁程度表達一致，表明其與EMS疼痛相關(guān)的焦慮、抑郁密切相關(guān)。綜上所述，血清NPY與EMS疼痛相關(guān)的應(yīng)激狀態(tài)密切相關(guān)，推測NPY可能與EMS發(fā)生、發(fā)展及疼痛機制、心理障礙密切相關(guān)，有可能成為EMS疼痛治療及心理治療的新靶點。

[參考文獻]

[1]? ?Nelson TS，Taylor BK. Targeting spinal neuropeptide Y1 receptor-expressing interneurons to alleviate chronic pain and itch[J].Prog Neurobiol，2021，196：101 894.

[2]? ?Dunstan DA，Scott N. Norms for Zung′s self-rating anxiety scale[J].BMC Psychiatry，2020，20（1）：90.

[3]? ?Dunstan DA，Scott N. Clarification of the cut-off score for Zung′s self-rating depression scale[J].BMC Psychiatry，2019， 19（1）：177.

[4]? ?Cattaneo S，Verlengia G，Marino P，et al. NPY and gene therapy for epilepsy：How，When，... and Y[J].Front Mol Neur- osci，2020，13：608 001.

[5]? ?Landry T，Shookster D，Chaves A，et al. Energy status differentially modifies feeding behavior and POMCARC neuron activity after acute treadmill exercise in untrained mice[J].Front Endocrinol（Lausanne），2021，12：705 267.

[6]? ?Zoccali C，D′Arrigo G，Leonardis D，et al. Neuropeptide Y and chronic kidney disease progression：A cohort study[J].Nephrol Dial Transplant，2018，33（10）：1805-1812.

[7]? ?Lee NJ，Herzog H. Coordinated regulation of energy and glucose homeostasis by insulin and the NPY system[J].J Neuroendocrinol，2020，33（4）：e12 925.

[8]? ?Fu W，Wessel CR，Taylor BK. Neuropeptide Y tonically inhibits an NMDAR→AC1→TRPA1/TRPV1 mechanism of the affective dimension of chronic neuropathic pain[J].Neuropeptides，2020，80：102 024.

[9]? ?Sun W，Kou D，Yu Z，et al. A transcriptomic analysis of neuropathic pain in rat dorsal root ganglia following peripheral nerve injury[J].Neuromolecular Med，2020，22（2）：250-263.

[10]? Domin H. Neuropeptide Y Y2 and Y5 receptors as pot- ential targets for neuroprotective and antidepressant therapies：Evidence from preclinical studies[J].Prog Neur-opsychopharmacol Biol Psychiatry，2021，111：110 349.

[11]? Tang C，Hu J，HDAC1-mediated microRNA-124-5 preg- ulates NPY to affect learning and memory abilities in rats with depression[J].Nanoscale Res Lett，2021，16（1）：28.

[12]? 徐亞輝，王瑛，劉暉，等.酒依賴患者神經(jīng)肽Y與焦慮、抑郁及渴求的相關(guān)性[J].中國神經(jīng)精神疾病雜志，2015， 41（11）：690-693.

[13]? Yang Y，Yu H，Babygirija R，et al. Electro-acupuncture attenuates chronic stress responses via up-regulated central NPY and GABAA receptors in rats[J].Front Neurosci，2021， 14： 629 003.

[14]? Yue Y，Jiang H，Yin Y，et al. The role of neuropeptide Y mRNA expression level in distinguishing different types of depression[J].Front Aging Neurosci，2016，8：323.

[15]? Ozsoy S，Olguner EO，Abdulrezzak U. The effects of anti depressants on neuropeptide Y in patients with depres- sion and anxiety[J].Pharmacopsychiatry，2016，49（1）：26-31.

[16]? Nwokafor C，Serova LI，Nahvi RJ，et al. Activation of NPY receptor subtype 1 by [D-His26]NPY is sufficient to prevent development of anxiety and depressive like effects in the single prolonged stress rodent model of PTSD[J] .Neuropeptides，2020，80：102 001.

[17]? Ishida H，Shirayama Y，Iwata M，et al. Infusion of neuro-peptide Y into CA3 region of hippocampus produces antidepressant-like effect via Y1 receptor[J].Hippocampus，2007，17（4）：271-280.

[18]? Desai SJ，Borkar CD，Nakhate KT，et al. Neuropeptide Y attenuates anxiety-and depression-like effects of cholecystokinin-4 in mice[J].Neuroscience，2014，277：818-830.

[19]? Morales-Medina JC，Dumont Y，Benoit CE，et al. Role of neuropeptide Y Y1and Y2 receptors on behavioral despair in a rat model of depression with comorbid anxiety[J].Neuropharmacology，2012，62（1）：200-208.

[20]? Narváez M，Borroto-Escuela DO，Santín L，et al. A novel integrative mechanism in anxiolytic behavior induced by galanin 2/neuropeptide Y Y1 receptor interactions on medial paracapsular intercalated amygdala in rats[J].Front Cell Neurosci，2018，12：119.

[21]? Nishi D，Hashimoto K，Noguchi H，et al. Serum neuro- peptide Y in accident survivors with depression or posttr-aumatic stress disorder[J].Neurosci Res，2014，83：8-12.

（收稿日期：2021-06-07）