蛋雞大腸桿菌病的臨床診斷及藥敏檢測

文│劉嬌嬌（北京市密云區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局東邵渠所）

大腸埃希菌（Escherichia coli）俗稱大腸桿菌，屬于腸桿菌科大腸埃希菌屬（Escherichia），是一種條件致病菌。目前在養(yǎng)禽生產(chǎn)過程中，不良的衛(wèi)生條件會造成大腸桿菌病的發(fā)生，導(dǎo)致局部或全身感染。致病性大腸桿菌在自然界中廣泛存在，凡有哺乳動物和禽類活動的環(huán)境，其空氣、水源和土壤中均含有該菌。該病可經(jīng)過消化道、呼吸道、生殖道等途徑進行水平傳播，還可通過種蛋垂直傳播。

大腸桿菌除了是引起該病的病原體外，還會造成免疫抑制狀態(tài)，它們的存在往往會加重病原體本身的致病作用。單獨的大腸桿菌感染只會產(chǎn)生輕微癥狀或無癥狀，但當(dāng)大腸桿菌和其他病原體混合感染，臨床癥狀顯著加重。筆者對蛋雞大腸桿菌病的臨床診斷及藥敏檢測試驗進行討論。

一、試驗材料與方法

1.試驗材料。來自某商品蛋雞養(yǎng)殖場的病雞。

2.試驗試劑。普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、SS營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、LB肉湯、大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，生理鹽水、氫氧化鈉試劑、MR、VP、吲哚試驗所用試劑、五糖(葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇、乳糖）、枸櫞酸鹽。

3.試驗藥品。含乳酸環(huán)丙沙星、鹽酸環(huán)丙沙星、克林霉素、硫酸阿米卡星等藥物的紙片。

4.儀器設(shè)備。恒溫培養(yǎng)箱、干燥滅菌器、高壓蒸餾滅菌器、電泳箱、超凈工作臺。

5.試驗方法。本試驗首先通過臨床癥狀觀察、病理變化觀察做出初步診斷，然后根據(jù)臨床癥狀和病理變化進行試驗室檢測。

（1）臨床癥狀觀察。病例送檢后，首先對病雞進行臨床檢查，主要觀察病雞的精神狀態(tài)、食欲、活動、行為變化、呼吸系統(tǒng)變化及糞便情況。

（2）病理剖檢變化觀察。首先對病雞心臟采血，離心后分離得到血清備用，處死病雞，在超凈臺無菌環(huán)境中解剖病死雞。把雞在消毒液中浸泡后，用滅菌的剪刀剪開皮膚，打開胸腔、腹腔，觀察腹膜變化。觀察心包有無增厚、出血點、壞死等病理變化。觀察肝、脾、肺、腎、胰腺有無腫脹出血等病理變化。剪開雞的腺胃、十二指腸及直腸，觀察病雞消化系統(tǒng)的病理變化。剪開病雞腫脹的關(guān)節(jié)，觀察雞關(guān)節(jié)的病理變化。根據(jù)本批病例的臨床癥狀和病理變化，推測該商品蛋雞有感染大腸桿菌的可能。對可疑病原體進行分離鑒定。

（3）藥物敏感試驗用藥敏紙片。參照《獸醫(yī)衛(wèi)生物及免疫學(xué)技術(shù)》中平板的制作方法。

（4）大腸桿菌的分離。剖開雞腹腔后，對存在明顯病變的實質(zhì)器官（心、肝、脾）在病變交界處用燒紅的鐵片燒烙表面，再在燒烙過的部位用滅菌的接種環(huán)采取病料，直接接種在培養(yǎng)基上，把培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)18～24小時，觀察結(jié)果。

（5）大腸桿菌的純化。從經(jīng)過24小時培養(yǎng)的麥糠凱瓊脂平板上用滅菌接種環(huán)挑取光滑型、邊緣整齊、微隆起紅色菌落的一半，接種到普通瓊脂斜面上進行純培養(yǎng)（37℃、24小時）。

（6）大腸桿菌的保存。將分離到的大腸桿菌菌株經(jīng)普通斜面培養(yǎng)基37℃、24小時傳代后，置于室溫下保存，以便做進一步的鑒定。

（7）形態(tài)與染色特性。被檢菌為革蘭氏陰性小桿菌，短棒狀，兩端鈍圓，成對或散在。

（8）生化試驗。把分離純化的細(xì)菌分別做五糖發(fā)酵試驗、MR試驗、VP試驗、吲哚試驗和枸櫞酸鹽試驗，觀察并記錄結(jié)果。

（9）藥敏試驗。用滅菌接種環(huán)挑取24小時內(nèi)純培養(yǎng)在普通瓊脂斜面上的待檢菌于瓊脂平板上劃線培養(yǎng)，并用滅菌的玻璃棒涂抹均勻，待菌液稍干，用無菌眼科鑷將不同濃度的藥敏紙片平放在平板上，輕壓使其緊貼在平板上。藥敏片一旦接觸平板就不要再移動，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～24小時。

二、試驗結(jié)果

1.臨床癥狀。病雞有輕微的呼吸道癥狀（聲音嘶?。?，精神狀態(tài)不佳、嗜睡。病雞關(guān)節(jié)明顯腫脹變形，走路姿勢異常、行動困難、不愿走動，病雞拉黃綠色稀糞。

2.病理剖檢變化。病雞腎腫脹出血，胰腺出血，腺胃基底膜出血。十二指腸點狀出血，直腸黏膜出血且腸中有黃綠色稀糞。剖檢氣管可發(fā)現(xiàn)氣管輕微出血，氣管內(nèi)有濃稠的黏液。關(guān)節(jié)有干酪樣物質(zhì)滲出，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有濃汁。其他病雞關(guān)節(jié)有豆腐渣樣滲出物，病變不明顯的雞關(guān)節(jié)有少許血凝塊。

3.細(xì)菌學(xué)檢測。

（1）細(xì)菌的分離。分離的菌株在麥康凱培養(yǎng)基上形成紅色菌落，在TSA培養(yǎng)基上形成白色菌落。純培養(yǎng)的菌落在SS培養(yǎng)基上形成紅色菌落。

（2）細(xì)菌鑒定。拉絲試驗的結(jié)果為陽性，能拉出黏絲，分離到的細(xì)菌為革蘭氏陰性菌。生化試驗結(jié)果如表1。

表1 生化試驗結(jié)果

在TSA培養(yǎng)基上長出白色菌落，麥康凱培養(yǎng)基上形成紅色菌落，圓形、扁平、邊緣整齊、表面光滑、濕潤。在SS培養(yǎng)基上呈紅色菌落。細(xì)菌在鑒別培養(yǎng)基上生長和生化特性結(jié)果完全符合大腸桿菌特性，判定分離細(xì)菌為大腸桿菌。

（3）藥敏試驗結(jié)果。根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)判斷目的菌對各種藥物的敏感程度，如表2。

表2 分離大腸桿菌藥敏試驗結(jié)果

由表2可知，從病例身上分離得到的大腸桿菌對粘菌素、安普霉素、阿米卡星等藥物敏感。因此，臨床上可用以上藥物搭配使用治療大腸桿菌感染。

三、討論

1.臨床診斷。雞大腸桿菌病是養(yǎng)雞業(yè)中比較常見的一種病，該批病雞最終確診為大腸桿菌病。關(guān)節(jié)炎型大腸桿菌病主要侵害病雞附關(guān)節(jié)，關(guān)節(jié)腫脹、跛行，關(guān)節(jié)液有膿性滲出物或干酪樣滲出物，并伴有腱鞘炎。大腸桿菌病常繼發(fā)其他病，或與其他病原體混合感染。使得該病的診治變得復(fù)雜。首先，發(fā)病率高，且此病使雞發(fā)育不良、抵抗力下降，引起病雞死亡，造成經(jīng)濟損失。其次，該病雞在臨床癥狀和病理變化上都變得復(fù)雜，比單一感染某種病更難以診斷，需要通過一定的實驗室檢測手段進行確診?；旌细腥静荒軆H通過抗生素的方法治療，抗生素運用不當(dāng)反而會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。

2.藥敏試驗指導(dǎo)臨床的意義。藥敏試驗結(jié)果為臨床合理用藥提供了可靠依據(jù)。藥敏試驗結(jié)果證明，本次分離到的大腸桿菌對某些藥物如阿米卡星具有很強的敏感性。藥敏試驗研究了臨床常見的幾種藥物對大腸桿菌的抗菌效果，并為有效防治該病提供了科學(xué)依據(jù)和有利條件，對指導(dǎo)養(yǎng)殖生產(chǎn)具有重要意義和應(yīng)用價值。

近年來，由于抗菌藥物使用不規(guī)范，以及許多耐藥性質(zhì)粒在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移，造成大腸桿菌耐藥性增強，產(chǎn)生越來越多的耐藥菌株。不同地方分離到的大腸桿菌對抗生素的敏感性存在很大的差異，因此，很難確定一個能普遍適用的藥物敏感譜。因此，藥敏試驗?zāi)転榇竽c桿菌的感染提供合理的治療藥物，防止濫用抗生素造成大腸桿菌耐藥性的增加，同時有效用藥也節(jié)約了不必要的開支。在本次試驗研究中，患病商品蛋雞感染的大腸桿菌對粘菌素、阿米卡星等高度敏感，合理利用這些抗生素，采取輪換用藥、配合用藥的方法。藥物治療的同時還應(yīng)加強雞群的飼養(yǎng)管理。

3.防治措施。該病應(yīng)做好預(yù)防工作，由于該病的發(fā)生有明顯誘因，因此，預(yù)防工作顯得更為重要。在預(yù)防工作中，最為重要的是提高飼養(yǎng)管理水平。夏天做好雞舍通風(fēng)換氣工作，冬天做好防寒保暖工作，使雞舍溫、濕度適宜。及時清理雞糞，進行帶雞消毒，每天1次，連續(xù)消毒1周；對用具、食槽、水槽、接觸病雞的人員、污染場地嚴(yán)格消毒，給雞創(chuàng)造一個良好的生存條件，更能增強雞體抵抗力。從動物試驗可以看出，該病的感染途徑主要是經(jīng)過消化系統(tǒng)，因此要更加重視對食槽、水槽的消毒。

為了防止該病的繼發(fā)感染，可適當(dāng)投藥加以控制。根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，運用對該種大腸桿菌敏感的藥物進行治療，如粘菌素、阿米卡星等藥物，為了提高治療效果，避免藥物產(chǎn)生耐藥性，可采取輪換用藥和配合用藥。還應(yīng)加強商品蛋雞各種營養(yǎng)的補充，配合補液、收斂等對癥治療，增強效果。疾病重在預(yù)防，應(yīng)控制好傳染源，切斷傳播途徑，保護易感動物，才能從根本上控制該病的發(fā)生與傳播。

四、結(jié)論

根據(jù)臨床癥狀、病理剖檢變化，再結(jié)合細(xì)菌培養(yǎng)特性、形態(tài)特征、生化試驗等結(jié)果，初步鑒定分離的細(xì)菌為關(guān)節(jié)型大腸桿菌。通過藥敏試驗可知，該大腸桿菌對粘菌素、阿米卡星等高度敏感。