2020年貴陽地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染情況調(diào)查

張 海，鄧珊珊，藺利仲，李照偉，徐春志，楊 源，劉 艷，景書灝，袁 林

（1.貴陽市動物疫病預防控制中心，貴州 貴陽 550081；2.貴陽市清鎮(zhèn)市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州貴陽 551400；3.貴陽市鄉(xiāng)村振興服務中心，貴州 貴陽 550081；4.貴州省動物疫病預防控制中心，貴州 貴陽 550081；5.貴陽市息烽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州 貴陽 550300）

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus, PCV）在分類學上屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是一種無囊膜單股環(huán)狀DNA病毒，呈二十面體對稱，是已知的最小的動物病毒之一[1]。根據(jù)抗原性和基因型不同，PCV分為4個血清學，分別是PCV1、PCV2、PCV3和PCV4[2]。PCV1對豬無致病性，1974年Tischer等首次在豬腎細胞中發(fā)現(xiàn)PCV1，該病毒不會造成豬細胞病變[3]。PCV2對豬具有致病性，主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎與腎病綜合征、豬呼吸道病綜合征、母豬繁殖障礙等疾病。PCV3常見于患有繁殖障礙性疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、多系統(tǒng)炎癥、心肌炎和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的豬，然而也見于無明顯臨床癥狀的健康豬。盡管在多種患病豬中檢測到該病毒的基因組，但是由于未進行完整的診斷研究，某些臨床觀察的相關疾病與PCV3的因果關系仍不能夠得到完全證實。PCV4于2019年在患有嚴重臨床癥狀疾病的豬只中發(fā)現(xiàn)，相關致病性研究比較少。目前報道能夠引起豬發(fā)病的基因型主要是PCV2，我國于2000年在豬群中首次發(fā)現(xiàn)PCV2，此后PCV2在全國各地的養(yǎng)殖場不斷的被報道。PCV2可以感染不同日齡的豬，感染仔豬的死亡率較高。該病在世界范圍內(nèi)均廣泛流行，均對養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展造成比較嚴重的危害，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將豬圓環(huán)病毒病列為二類動物傳染病。

PCV2的防控主要是采取疫苗免疫注射預防，但是由于不同地區(qū)毒株的變異較大，且豬場內(nèi)PCV2呈現(xiàn)多種基因型并存的情況，導致疫苗免疫效果不佳。PCV2的感染豬只中常常與細菌或病毒混合感染，因此準確、有效的檢測方法對PCV2的診斷非常重要。PCV2的檢測方法有常規(guī)PCR、多重PCR、競爭PCR、套式（巢式）PCR、熒光定量PCR、數(shù)字PCR環(huán)介導等溫擴增技術、ELISA、間接免疫熒光、免疫組織化學技術、免疫膠體金技術和病毒分離鑒定等[4]。熒光定量PCR結果直觀、特異性強、敏感性比較好、技術也比較成熟，是實驗室檢測比較常用的檢測方法。

本試驗采用熒光定量PCR方法對2020年貴陽地區(qū)6個區(qū)（市/縣）55個豬場采集287份病料（年出欄500～2 000頭生豬養(yǎng)殖場35個采集182份病料，年出欄2 000頭以上生豬養(yǎng)殖場20個采集105份病料）進行PCV2核酸檢測，旨在了解PCV2在貴陽地區(qū)的流行情況，以期為貴陽市規(guī)?；i場PCV2防控策略的制定提供參考數(shù)據(jù)，以降低PCV2的發(fā)病率，提高養(yǎng)殖場（戶）經(jīng)濟效益。

1 材料與方法

1.1 病料

2020年1—12月從貴陽地區(qū)不同豬場無菌采集的疑似病料，保存于-70 ℃。共采集貴陽地區(qū)6個區(qū)（市/縣）55個豬場287份病料，其中年出欄500～2 000頭生豬養(yǎng)殖場35個采集182份病料，年出欄2 000頭以上生豬養(yǎng)殖場20個采集105份病料。

1.2 試劑盒

豬圓環(huán)病毒2型熒光PCR檢測試劑盒、核酸提取試劑盒均購自北京森康生物技術有限公司。

2 結果

2.1 疑似病料檢測結果

從貴陽市6個區(qū)（市/縣）的55個養(yǎng)殖場共采集287份病料組織，采用熒光定量PCR進行檢測PCV2核酸（表1），PCV2核酸檢出病料63份，檢出率為21.95%（63/287），其中PCV2核酸檢出率最高的是白云區(qū)（40.00%），其次息烽縣、花溪區(qū)均為（30.00%）、開陽縣（21.05%）、修文縣（21.01%）、清鎮(zhèn)市（18.42%）。

表1 疑似病料PCV2核酸檢測結果匯總

2.2 不同養(yǎng)殖規(guī)模檢測結果

從貴陽市6個區(qū)（市/縣）的55個養(yǎng)殖場共采集287份病料組織，其中年出欄500～2 000頭生豬養(yǎng)殖場35個采集182份病料，年出欄2 000頭以上生豬養(yǎng)殖場20個采集105份病料，采用熒光定量PCR進行檢測PCV2核酸（表2）。經(jīng)過統(tǒng)計，年出欄500～2 000頭生豬養(yǎng)殖場PCV2核酸檢出率為28.57%（52/182），年出欄2 000頭以上生豬養(yǎng)殖場核酸PCV2核酸檢出率為10.48%（11/105）。由檢測結果可知，年出欄500～2 000頭生豬養(yǎng)殖場PCV2核酸檢出率明顯高于年出欄2 000頭以上生豬養(yǎng)殖場。

表2 不同養(yǎng)殖規(guī)模PCV2核酸檢測結果統(tǒng)計

3 討論

本試驗對貴陽地區(qū)6個區(qū)（市/縣）55個規(guī)模化豬場進行了病原學流行病學調(diào)查，結果顯示貴陽市發(fā)病規(guī)?；i場核酸檢出率為21.95%（63/287），其中PCV2核酸檢出率最高的是白云區(qū)（40.00%），其次息烽縣、花溪區(qū)均為（30.00%）、開陽縣（21.05%）、修文縣（21.01%）、清鎮(zhèn)市（18.42%），年出欄500～2 000頭生豬養(yǎng)殖場PCV2核酸檢出率為28.57%（52/182），年出欄2 000頭以上生豬養(yǎng)殖場核酸PCV2核酸檢出率為10.48%（11/105）。說明PCV2仍然是危害貴陽市生豬養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的動物傳染病之一，且年出欄500～2 000頭生豬養(yǎng)殖場PCV2核酸檢出率（28.57%）明顯高于年出欄2 000頭以上生豬養(yǎng)殖場（10.48%）。

在知網(wǎng)查閱分析近幾年關于PCV2病原核酸檢測的有關文獻，其中段群棚等[5]采用PCR方法對2015年3月至2019年2月采集自廣西14個地市規(guī)模豬場的1 114份樣品進行PCV2檢測，PCV2核酸檢出率為38.96%。吳熠丹等[6]對2018年1—10月份收集福建省龍巖市、漳州市、廈門市、莆田市和泉州市的30個規(guī)?；i場送檢的流產(chǎn)死胎、流產(chǎn)母豬的血清和種公豬精液等230份樣本進行PCV2檢測，核酸檢出率為60%。魏春華等[7]對2012—2018年采集的東南區(qū)域5個省份的疑似病料649份進行PCR檢測，核酸檢出率為41.9%。何世成等[8]采用熒光PCR方法對來自湖南省14個市州的821份臨床病料和屠宰場豬淋巴結樣品進行PCV2檢測，PCV2核酸檢出率為81.49%。楊潤煥等[9]采用PCR方法對2016和2017年間來自云南省16個縣市送檢發(fā)病豬的肺、腎和淋巴結等組織病料和血液共計406份進行PCV2等病毒檢測，PCV2陽性率最高為59.00%。李志賢等[10]采用熒光定量PCR方法對2018年3月至2019年12月在廣西賀州市無害化處理場采集的病死豬樣品共計352份進行病原學調(diào)查，其中PCV2核酸陽性率最高為53.98%。以上的數(shù)據(jù)表明PCV2全國各地均存在一定程度的感染，部分區(qū)域的養(yǎng)殖場感染率達到了60%以上，且感染情況有逐年加重的趨勢，嚴重影響生豬養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展和養(yǎng)殖效益。

通過對貴陽市的疑似病料樣本檢測發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖規(guī)模集約化程度越高的養(yǎng)殖場PCV2的核酸陽性檢出率越低，因此提高養(yǎng)殖場防控技術尤為重要，特別是2018年以來在非洲豬瘟常態(tài)化防控的背景下，提高養(yǎng)殖場動物疫病綜合防控技術已經(jīng)迫在眉睫。養(yǎng)殖場要有“預防大于治療”的防控意識，加強養(yǎng)殖飼養(yǎng)管理。豬場引種必須要選擇無PCV2感染的豬場，堅持“自繁自養(yǎng)”和“全進全出”的原則。做好PCV2疫苗免疫接種，特別是養(yǎng)殖場有PCV2流行的，要制定合理的免疫程序并嚴格落實，定期開展免疫效果評估。做好養(yǎng)殖場消毒工作，對各養(yǎng)殖區(qū)域的生產(chǎn)用具和運輸工具嚴格分開，定期消毒，禁止各區(qū)域養(yǎng)殖人員相互交叉。同時有條件的養(yǎng)殖場還可以開展動物疫病凈化工作，提升生物安全防護水平。