不同預處理劑對乳牙牙本質粘接耐久性的影響

樹脂粘接修復術是兒童口腔科治療乳牙齲病的常用方法之一，牙本質粘接力主要來源于粘接劑向脫礦的牙本質膠原纖維網中滲透固化后形成的混合層所提供的微機械嵌合力。乳牙牙本質中存在的基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）在酸性壞境下容易被激活降解膠原纖維

?，F(xiàn)有的粘接技術和粘接劑都不能完全包裹暴露的膠原纖維，暴露的膠原纖維容易發(fā)生酶解和水解，加速混合層退變，降低修復體的使用壽命

。氯己定作為抗菌劑在牙科領域應用廣泛，具有抗菌和抑制內源性蛋白酶活性的作用，是眾多蛋白酶抑制劑中研究最多的一種。2%氯己定預處理可以改善乳恒牙牙本質粘接界面的穩(wěn)定性

，但其細胞毒性不容忽視

。

近年來，天然多酚成為牙本質粘接領域的研究熱點，白藜蘆醇（resveratrol）是一種含有芪類結構的非黃酮類多酚化合物，具有抗癌、保護神經和心臟的作用

。研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇能抑制MMP-2、MMP-9 的活性

，抑制變異鏈球菌的致齲性

，具有良好的生物相容性

。研究表明使用白藜蘆醇/乙醇溶液預處理恒牙牙本質可以提高樹脂-牙本質粘接耐久性，降低粘接界面的納米滲漏

。與恒牙牙本質相比，乳牙牙本質的礦化程度低，有機物含量高，二者的組織結構和微觀形態(tài)均存在差別，因此乳恒牙牙本質粘接效果可能會有一定差異。探尋能夠有效提高樹脂-乳牙牙本質粘接耐久性的預處理劑具有重要意義。目前關于白藜蘆醇對乳牙牙本質粘接效果的研究報道較少，因此本實驗選擇人乳牙作為實驗對象，觀察不同預處理劑對乳牙牙本質剪切粘接強度和界面納米滲漏的影響，以期為臨床選擇合適的乳牙牙本質表面預處理劑提供參考。

本文對微環(huán)諧振腔結構中耦合間距與其耦合系數(shù)、傳輸性能的影響關系進行了理論分析與仿真,通過MEMS工藝制備了耦合間距不同的微環(huán)諧振腔。通過耦合實驗測試,得到了不同耦合間距下的諧振響應譜線,并全面分析了耦合間距對耦合深度、耦合效率、3 dB帶寬及品質因數(shù)Q的影響關系,為環(huán)形微腔的進一步優(yōu)化設計提供了依據(jù),避免了優(yōu)化過程的盲目性,同時對微環(huán)諧振腔在改善濾波性能、提高品質因數(shù)以及在其他相關領域中的研究具有重要的意義。

1 材料和方法

1.1 實驗材料和主要設備

白藜蘆醇粉末（Sigma Aldrich，美國）；2%氯己定（朗力生物，中國）；人工唾液（LANSO，中國）；37%磷酸酸蝕劑（SPIDENT，韓國）；Single bond Uni-versal Adhesive（3M ESPE，美國）；復合樹脂Z250（3M ESPE，美國）；無水乙醇；10%次氯酸鈉溶液；氨化硝酸銀溶液；電子萬能試驗機（Instron，美國）；低速金剛石切割機（沈陽科晶自動化設備有限公司，中國）；掃描電子顯微鏡（JEOL，日本）；體視顯微鏡（OLYMPUS SZ61，日本）；能量色散X 射線光譜儀（Hitachi，日本）。

1.2 實驗牙收集

本研究通過了哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院倫理委員會的批準（編號：2021XS27-02），收集了42 顆因滯留拔除的無齲或早期齲乳磨牙，要求牙冠完整，無裂紋和充填物，去除色素、牙石、牙周膜等軟組織保存于4 ℃的生理鹽水。

1.3 預處理劑配制

將白藜蘆醇粉末溶于無水乙醇，在37 ℃恒溫水浴箱水浴15 min，配制成10 mg/mL 的白藜蘆醇預處理劑，4 ℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 實驗分組

本研究共分為3 組，A 組為對照組（蒸餾水預處理），B 組為氯己定預處理組，C 組為白藜蘆醇預處理組，實驗分組與預處理劑應用順序見表1。

1.5 剪切粘接強度實驗

選取24 顆乳磨牙，用高速渦輪手機冷卻條件下去除牙根。用硬組織切割機沿牙冠近遠中方向切割成頰、舌側兩部分，自凝樹脂將樣本包埋成9 mm×9 mm×9 mm 的規(guī)則模型，樣本略高于自凝塑料平面3 mm，在流水降溫條件下用高速渦輪手機磨除釉質暴露牙本質面，600 目碳化硅水砂紙打磨1 min，超聲蕩洗8 min，獲得統(tǒng)一標準的牙本質粘接面。各實驗組按照表1 的方法制備48 個剪切實驗試件，形成與粘接界面垂直的樹脂小柱（直徑和高均為3 mm）。將制備好的試件在37 ℃人工唾液中儲存24 h；每組16 個試件中取8 個試件進行即刻剪切粘接強度測試，其余8 個保存在10%次氯酸鈉溶液中浸泡1 h 后測試。用電子萬能試驗機測試剪切粘接強度，剪切力的方向平行于粘接界面，加載速度為1 mm/min，直至樹脂與牙面斷裂，記錄實驗數(shù)據(jù)，計算剪切粘接強度值=樹脂小柱斷裂時的最大載荷（N)/ 粘接面積（mm

）。剪切粘接強度實驗過程見圖1。

1.6 斷裂模式分析

性，但其氣味大、味微苦，兒童難以接受，且對成牙本質樣細胞有較強的細胞毒性作用

。有研究表明低于10 mg/mL 白藜蘆醇和10 mg/mL 白藜蘆醇改性粘接劑的細胞毒性和生物相容性均在可接受范圍

，因此本實驗選擇白藜蘆醇的濃度為10 mg/mL。白藜蘆醇可以抑制MMPs 的活性

，低濃度的白藜蘆醇具有基因保護活性，能減低牙本質粘接劑成分的細胞毒性和DNA 損傷

，抑制變異鏈球菌的活性

，提高恒牙牙本質粘接耐久性

，乳恒牙的牙本質微觀形態(tài)和組織結構存在較大差異，乳牙牙本質粘接混合層更容易降解

，因此，評估白藜蘆醇預處理對乳牙牙本質粘接性能的影響具有重要意義。

1.7 界面納米滲漏實驗

選取18 顆離體乳磨牙，用高速渦輪手機冷卻條件下去除牙根，流體樹脂封閉髓腔。用自凝塑料將樣本包埋成1.2 cm×1.2 cm×1.2 cm 的規(guī)則模型，牙齒 面高于自凝塑料平面3 mm，磨除 面釉質暴露牙本質粘接面（方法同前），按表1 方法處理粘接面，分次放置復合樹脂，形成3 mm 高的樹脂修復體。將制備好的試件在37 ℃人工唾液中儲存24 h；每組隨機取3 個樣本用于即刻檢測，其余3 個在10%次氯酸鈉溶液中老化1 h。用硬組織切割機將樣本沿牙齒長軸方向切割成2 mm 厚的片狀試件。每組試件在距離樹脂-牙本質粘接界面1 mm以外均勻涂布兩層指甲油，自然干燥后避光保存在質量分數(shù)為50%氨化硝酸銀溶液中（pH=9.5）24 h，蒸餾水沖洗，浸泡于顯影液中熒光燈照射8 h，定影液固定8 h。所有試件依次使用600、800、1 500、2 000 目碳化硅砂紙在流水條件下打磨拋光，超聲蕩洗15 min，干燥，噴金，場發(fā)射掃描電子顯微鏡背散射模式下觀察粘接界面納米滲漏情況，每個樣本隨機選取5 個視野（每組15 張圖像），使用Image J 計算每個圖像中銀顆粒占整個圖像面積的百分比，其分級表示如下：0，無納米滲漏；1，滲漏≤25%；2，25%＜滲漏≤50%；3，50%＜滲漏≤75%；4，滲漏＞75%。使用能量色散X 射線光譜儀面掃分析粘接界面Si 元素、Ca 元素、Ag 元素的分布情況。

沒有了剛兌，沒有了承諾收益率，投資者有必要更仔細的閱讀資管產品說明書了。對于私募產品，每季度都要關注產品的凈值和其他重要信息；對于固定收益類產品，要對每筆非標準化債權類資產產品投資的客戶信息、項目名稱、產品收益，投資期限、交易結構以及風險狀況等相關內容進行充分的了解；對于權益類產品，要對產品投資股票面臨的風險進行明確的認識；對于商品及金融衍生品類產品，也需要對產品的持倉風險、掛鉤資產、控制措施以及衍生品公允價值變化進行詳細的了解；而對于混合類產品，要關注產品的投資資產組合情況。

1.8 粘接界面觀察

掃描電子顯微鏡下觀察各組的粘接界面形態(tài)如圖5，各組牙本質小管內均有不同長度的樹脂突，C 組的樹脂突最長，與A 組和B 組比較更加致密。A 組和B 組老化后均在混合層頂部出現(xiàn)裂隙。

1.9 統(tǒng)計學分析

患者口腔是測試和評估粘接修復體的最終環(huán)境。模擬口內老化的常用方法有水儲存、冷熱循環(huán)、次氯酸鈉溶液浸泡、pH 循環(huán)等。研究表明10%次氯酸鈉溶液浸泡1 h 相當于冷熱循環(huán)10 000 次、水儲存半年、pH 循環(huán)15 次的老化程度，10%次氯酸鈉溶液浸泡快速高效

。因此本實驗采用10%次氯酸鈉浸泡1 h 模擬修復體在口內的老化環(huán)境。

2 結 果

2.1 剪切粘接強度測試結果

各組剪切粘接強度測試結果如表2 所示，A 組的即刻粘接強度為（33.62±13.67）MPa，老化后的粘接強度為（17.71±3.82）MPa，二者比較具有顯著差異（

＜0.05）。B 組、C 組的即刻粘接強度與老化后的粘接強度無顯著差異（

＞0.05）。A、B、C 三組即刻粘接強度無顯著差異（

＞0.05），老化后的粘接強度組間兩兩比較具有顯著差異（

＜0.05），且C 組的粘接強度值最高，B 組次之，A 組最低。

2.2 斷裂模式分析

各組的斷裂模式分析見圖2，A 組、B 組主要為混合斷裂，C 組主要為復合樹脂內聚斷裂。各組體視顯微鏡圖像如圖3 所示：A 組即刻斷裂模式為粘接劑界面斷裂和牙本質內聚斷裂；B 組即刻斷裂模式為牙本質內聚斷裂和復合樹脂內聚斷裂；C 組即刻斷裂模式為粘接劑界面斷裂、復合樹脂內聚斷裂以及牙本質內聚斷裂；A、B 組老化斷裂模式為粘接劑界面斷裂和復合樹脂內聚斷裂，C 組老化斷裂模式為牙本質內聚斷裂。

2.3 界面納米滲漏結果

粘接強度是評估樹脂-牙本質粘接性能最常用的指標。評估粘接強度常用方法為微拉伸強度和微剪切強度測試，微拉伸強度測試對試件制備要求高，技術敏感性強，而微剪切粘接強度測試相較于微拉伸強度測試更為簡單方便

，試件制備后無需進一步切割成一定形狀。本實驗選擇乳磨牙為研究對象，乳牙的體積比恒牙小，牙本質的厚度遠不如恒牙牙本質，微拉伸強度實驗的試件制備存在一定難度，因而本實驗選擇剪切強度測試評估粘接強度。

2.4 粘接界面形態(tài)觀察

從1.7 實驗余留樣本中每組隨機選取2 個試件，待觀察面依次用600、800、1 500、2 000 目碳化硅砂紙流水條件下拋光，37%磷酸酸蝕觀察面10 s，沖洗，浸入5%次氯酸鈉溶液中2 min，乙醇溶液梯度脫水，噴金，掃描電子顯微鏡下觀察粘接界面情況。

3 討 論

牙本質粘接界面退變是影響粘接耐久性的根本原因，而口腔環(huán)境會加速其退變的進程。粘接界面的退變包括粘接樹脂的浸出、老化和膠原纖維的降解

。牙本質預處理是改善粘接耐久性的方法之一，理想的牙本質預處理劑對牙髓細胞、成牙本質細胞的毒性作用應該很低或無毒性。氯己定是非特異性基質金屬蛋白酶抑制劑和抗菌劑，用于預處理牙本質可以改善牙本質的粘接耐久

體視顯微鏡下（40 倍）評估剪切實驗測試后樣本的斷裂模式，斷裂面的類型分為4 種：①粘接劑界面斷裂；②牙本質內聚斷裂；③復合樹脂內聚斷裂；④前三種斷裂面形態(tài)的任意組合（混合斷裂）。

界面納米滲漏結果見表3，A 組、B 組的納米滲漏結果顯示在即刻和老化時有顯著差異；C 組在即刻和老化時無顯著差異。三組納米滲漏程度即刻檢測結果為A 組＞C 組＞B 組，但三組組間比較無顯著差異。經10%次氯酸鈉溶液老化1 h 后，三組納米滲漏程度A 組＞B 組＞C 組，A 組與B 組、C 組比較差異均具有統(tǒng)計學意義，B 組與C 組比較無顯著差異。圖4a 為掃描電鏡觀察Ag 離子滲漏情況，圖4b ～ 圖4c 為EDX 分析粘接界面的納米滲漏情況。紅色區(qū)域代表Si 元素，主要為復合樹脂分布區(qū)域（圖4b）。青色區(qū)域代表Ag 元素，代表納米滲漏情況，主要集中分布在粘接界面混合層底部（圖4c）。黃色區(qū)域代表Ca 元素，主要為牙本質分布區(qū)域（圖4d）。

各組剪切粘接強度值數(shù)據(jù)采用平均值±標準差表示，采用SPSS26.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析，剪切粘接強度實驗數(shù)據(jù)采用方差分析，三組組間比較采用LSD 檢驗，納米滲漏實驗等級資料采用Kruskal-Wallis 檢驗進行分析，

＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

實驗結果顯示各組即刻粘接強度無顯著差異，說明氯己定或白藜蘆醇預處理不會影響乳牙牙本質的即刻粘接性能，這與Giacomini 等

和Porto 等

以恒牙為研究對象的結果一致。經過10%次氯酸鈉溶液老化后，對照組的粘接強度顯著降低，2%氯己定組和白藜蘆醇組的即刻粘接強度和老化后的粘接強度比較無顯著差異，說明2%氯己定和10 mg/mL 白藜蘆醇均可以改善老化后乳牙牙本質粘接強度。本實驗中2%氯己定組和白藜蘆醇組經10%次氯酸鈉溶液老化后粘接強度無明顯降低，這與先前的研究結果有差別，可能是由于老化方式不同，次氯酸鈉主要降解有機相，而脫礦牙本質表面經氯己定或白藜蘆醇預處理后更多的膠原纖維被粘接樹脂包裹。老化后，對照組、2%氯己定組和白藜蘆醇組的粘接強度均有顯著差異，白藜蘆醇組的粘接強度最高。白藜蘆醇含有3 個酚羥基，可通過氫鍵與膠原纖維發(fā)生交聯(lián)作用，無水乙醇作為白藜蘆醇的溶劑，可以通過降低介電常數(shù)來促進多酚與膠原的交聯(lián)作用，從而改變膠原纖維的機械性能。乙醇或以乙醇為溶劑的預處理劑處理酸蝕脫礦的牙本質后，脫礦膠原基質懸浮于乙醇溶液中使得膠原纖維直徑縮小，增大纖維網間的間隙，增加牙本質表面的疏水性并引起水分含量的變化，促進疏水樹脂單體向更深層滲透和浸潤，提高粘接界面的穩(wěn)定性

。

1.發(fā)票的開具。“營改增”之前企業(yè)通過“建筑業(yè)統(tǒng)一發(fā)票”來結算有關業(yè)務，納稅企業(yè)無需辨別承稅方的納稅資格。稅改之后，企業(yè)則需開具“增值稅專用發(fā)票”，所有企業(yè)，包括小規(guī)模納稅人，都交由國家稅務機關開增值稅發(fā)票，確保發(fā)票的統(tǒng)一性。

行政問責制起源于西方，是西方國家在完善政黨制度和議會制度的過程中逐漸形成的。行政問責制對政府制定和執(zhí)行政策、行使職權過程中的權責規(guī)劃具有重要指導意義，完善的行政問責制可以有效地減少行政人員濫用職權、權不為民的行為發(fā)生，這對當代中國的行政體制改革具有深遠意義。行政問責制的定義可以從廣義和狹義兩個角度進行解釋。

輕度顱腦外傷后良性陣發(fā)性位置性眩暈與特發(fā)性良性陣發(fā)性位置性眩暈的臨床特點比較 ………………………………………………………… 談毅，鄭云華，聶德新，等 189

牙本質酸蝕脫礦的深度大于粘接樹脂的滲透深度，混合層底部未被粘接樹脂包裹而暴露的膠原纖維區(qū)域即納米滲漏區(qū)域。該區(qū)域機械性能較弱，且存在游離水分子能促進混合層水解作用，是影響粘接耐久性的因素之一。納米滲漏是評估粘接界面封閉性的重要指標，本實驗使用氨化硝酸銀進行試件銀染，使用掃描電子顯微鏡觀察和EDX 能譜分析兩種方法結合可以減少假陽性和假陰性成像，提高結果可信度

。結果顯示2%氯己定組、白藜蘆醇組的即刻納米滲漏程度低于對照組，對照組和2%氯己定組老化后納米滲漏程度顯著增加，白藜蘆醇組納米滲漏程度在老化前后無顯著差異，老化后白藜蘆醇組納米滲漏程度最低，這證實了氯己定和白藜蘆醇預處理可不同程度降低乳牙牙本質納米滲漏情況，維持粘接界面穩(wěn)定。

本研究發(fā)現(xiàn)，當光照強度為0 ～ 380 μmol·m-2·s-1時，外施鉀肥可使降香黃檀葉片的凈光合速率Pn迅速升高。當光強為380 ～ 800 μmol·m-2·s-1時，各處理Pn值上升平緩，之后逐漸趨于穩(wěn)定(圖3)。Pnmax隨鉀肥用量的增加而增加，最大值為K2處理，分別比K1和CK處理增加了56.49%和132.35%；此外，K2處理下的LSP值最大， 但LCP、Rd 值均在CK處理時達到最大值，K2次之，K1最小(表3)。

本實驗中對照組、2%氯己定組的斷裂模式主要為混合斷裂，白藜蘆醇組主要為復合樹脂內聚斷裂，掃描電子顯微鏡觀察白藜蘆醇組的樹脂突長且致密，進一步證明白藜蘆醇預處理后粘接界面的混合層完整性更高。

6.3.1 抽獎方式與領獎方式。薦書抽獎：將讀者薦購的圖書與微信號同時放入抽獎池，主持人隨意邀請X名讀者(領導專家)上臺抽獎，抽獎者背對銀幕點擊鼠標，微信號停止?jié)L動，屏幕上則左側彈出中獎讀者的微信號，右邊彈出該讀者薦購的書籍，由此產生獲獎名單。讀者憑借中獎信息與后臺工作人員核對領獎(或中獎讀者舉手示意，由工作人員送至讀者手中)。

綜上所述，氯己定和白藜蘆醇均可以保護粘接界面膠原纖維降解，維持粘接強度，在一定程度上改善乳牙牙本質粘接耐久性，且白藜蘆醇對改善乳牙牙本質的粘接效果優(yōu)于氯己定。

Liu ED designed the study, performed the experiments, analyzed the data and wrote the article. Lv J performed the experiments, analyzed the data and wrote the article. Liu YQ and Jin XA revised the article. All authors read approved the final manuscript as submitted.

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