7-氨噻肟頭孢菌素的聚合物分析

胡昌勤 李進(jìn) 張夏

(中國食品藥品檢定研究院，北京 102629)

在藥物雜質(zhì)譜(impurity profile)控制中，對(duì)β-內(nèi)酰胺抗生素聚合物的控制是當(dāng)前國內(nèi)外關(guān)注的熱點(diǎn)之一[1]。β-內(nèi)酰胺抗生素主要包括青霉素和頭孢菌素兩大類，作者已經(jīng)對(duì)青霉素類抗生素聚合物分析的進(jìn)展進(jìn)行了綜述[2]。頭孢菌素作為臨床中最重要的一類抗菌藥物，是當(dāng)前國內(nèi)仿制藥一致性評(píng)價(jià)的熱點(diǎn)品種。7位側(cè)鏈具

有氨噻肟結(jié)構(gòu)的頭孢菌素(7-氨噻肟頭孢菌素)，在增強(qiáng)對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性、改善抗菌譜等方面具有獨(dú)特的功能[3]，是第三代頭孢菌素的典型代表，且已逐漸發(fā)展為一大家族(圖1)，根據(jù)其3位側(cè)鏈的特點(diǎn)可分為2組，第1組：主要為口服頭孢菌素，其3位的R2基團(tuán)不易解離；第2組：為注射用頭孢菌素，其3位的R2基團(tuán)易被水解。已知7-氨噻肟結(jié)構(gòu)中的自由氮基通過攻擊另一分子的β-內(nèi)酰胺環(huán)可形成聚合物[4-5]；此外，根據(jù)對(duì)青霉素聚合反應(yīng)機(jī)理的認(rèn)知[2]，頭孢菌素還可以通過羧基攻擊另一分子的β-內(nèi)酰胺環(huán)發(fā)生聚合反應(yīng)；而各國藥典中給出的頭孢噻肟二聚物結(jié)構(gòu)(圖2a)提示，氨噻肟結(jié)構(gòu)中的氨基還可以與3位側(cè)鏈發(fā)生聚合反應(yīng)。由于頭孢菌素的3位側(cè)鏈和6元環(huán)結(jié)構(gòu)較青霉素母核更不穩(wěn)定[6]，聚合物易發(fā)生多種降解反應(yīng)，使得對(duì)頭孢菌素聚合物結(jié)構(gòu)的分析較青霉素更加困難。伴隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，近年來人們對(duì)β-內(nèi)酰胺抗生素聚合物的聚合反應(yīng)機(jī)理、結(jié)構(gòu)等的認(rèn)知不斷完善，對(duì)7-氨噻肟頭孢菌素的聚合物分析也取得了較大的進(jìn)展[7-12]，但在利用LC-MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析中也遇到一些困惑。本文對(duì)近年來的工作進(jìn)行回顧性總結(jié)，希望形成相對(duì)系統(tǒng)地對(duì)該類抗生素聚合物分析及利用LC-MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析的策略與方法，進(jìn)而指導(dǎo)對(duì)其他頭孢菌素聚合物的分析。

1 7-氨噻肟頭孢菌素聚合物

頭孢唑肟鈉與頭孢噻肟鈉是氨噻肟頭孢菌素的典型代表結(jié)構(gòu)(圖1)，前者沒有3位側(cè)鏈，后者的3位側(cè)鏈易被水解。分別采用凝膠色譜-柱切換-質(zhì)譜分析技術(shù)[2]分析二者強(qiáng)制聚合溶液中的聚合物雜質(zhì)：在頭孢噻肟鈉的強(qiáng)制聚合溶液中，主要聚合物為氨基與3位側(cè)鏈反應(yīng)(聚合反應(yīng)I)形成的二聚體(圖2a)，沒有發(fā)現(xiàn)羧基與β-內(nèi)酰胺環(huán)聚合形成的二聚體[10]；在頭孢唑肟中僅發(fā)現(xiàn)氨基與β-內(nèi)酰胺環(huán)反應(yīng)(聚合反應(yīng)Ⅱ)形成的一對(duì)二聚體非對(duì)映異構(gòu)體(圖2b)，也沒能發(fā)現(xiàn)羧基與β-內(nèi)酰胺環(huán)的聚合反應(yīng)產(chǎn)物(圖2c)[13-14]。上述結(jié)果提示，在7-氨噻肟頭孢菌素的聚合反應(yīng)中，氨基是主要的聚合活性位點(diǎn)，羧基與β-內(nèi)酰胺環(huán)的聚合反應(yīng)不易發(fā)生。進(jìn)一步分析頭孢噻肟鈉中的各類聚合物(圖3A)，在按聚合反應(yīng)I形成的聚合物中，主要聚合產(chǎn)物為二聚體(簡稱二聚體I)，沒能發(fā)現(xiàn)聚合反應(yīng)Ⅱ形成的二聚體(簡稱二聚體Ⅱ)，但發(fā)現(xiàn)多個(gè)二聚體Ⅱ側(cè)鏈水解形成的水解產(chǎn)物。由頭孢菌素的降解反應(yīng)機(jī)理[15-16]可知，理論上二聚體Ⅱ的側(cè)鏈水解可形成4種不同的水解產(chǎn)物，將其分別命名為水解物I-Ⅳ(圖3B)；圖3A的結(jié)果提示，第2組頭孢菌素由于其3位具有易解離基團(tuán)，形成的二聚體Ⅱ不穩(wěn)定，在強(qiáng)制降解反應(yīng)中易被進(jìn)一步水解成不同的水解物。

2 7-氨噻肟頭孢菌素聚合物的特性

第2組氨噻肟頭孢菌素(圖1)中的聚合物主要為聚合反應(yīng)I的產(chǎn)物。以二聚體I為例，它們具有相似的二級(jí)質(zhì)譜圖(圖4A)，共性裂解途徑產(chǎn)生m/z791、m/z636和m/z396的碎片離子，其中b裂解是重要的特征裂解片途徑(圖4B)。由于二聚體I分子呈線性構(gòu)型(圖5A)，該特性不僅使其易形成高聚合度的多聚體，如在頭孢噻肟鈉中已發(fā)現(xiàn)三聚體、四聚體[10]，且使得多聚體具有與二聚體相似的質(zhì)譜裂解途徑(圖5B)，對(duì)二聚體I特征裂解途徑的認(rèn)知，對(duì)三聚體、四聚體的解析具有重要的意義(圖5C)。

分析聚合反應(yīng)Ⅱ產(chǎn)物的質(zhì)譜裂解特性。以頭孢唑肟二聚體為例(圖6A)，其共性裂解途徑可產(chǎn)生m/z624、m/z481、m/z449和m/z383的特征離子，并易產(chǎn)生脫羥基、羧基等碎片離子，其中a裂解產(chǎn)生的頭孢唑肟[M+H]+峰是重要的特征裂解片途徑(圖6B)，是判斷二聚體Ⅱ水解物的重要依據(jù)；脫羧基反應(yīng)(d裂解)與脫羥基反應(yīng)同時(shí)存在，是判斷二聚體3位側(cè)鏈?zhǔn)欠裥纬蓛?nèi)酯結(jié)構(gòu)的重要依據(jù)。

3 7-氨噻肟頭孢菌素聚合物的衍生物/降解物

3.1 3位側(cè)鏈水解物

第2組頭孢菌素的3位側(cè)鏈易發(fā)生水解反應(yīng)，如何判斷聚合物中側(cè)鏈的水解位置是推測水解物結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵。質(zhì)譜裂解途徑結(jié)合RP-HPLC保留值分析是較好的分析策略。

比較頭孢曲松二聚體Ⅱ不同側(cè)鏈水解物的空間構(gòu)型(圖7A)，水解物Ⅲ和水解物Ⅳ的空間構(gòu)型較對(duì)應(yīng)的水解物Ⅰ和水解物Ⅱ更松散，使其保留值較水解物Ⅰ和水解物Ⅱ大；水解物Ⅱ和水解物Ⅳ分別較水解物Ⅰ和水解物Ⅲ的空間構(gòu)型更緊湊，故水解物Ⅱ/水解物Ⅳ中至少一個(gè)異構(gòu)體的保留值較水解物Ⅰ/水解物Ⅲ更小。即利用RP-HPLC的保留值可幫助判斷聚合物水解物的水解位點(diǎn)。頭孢噻肟聚合物的RPHPLC分析較好地驗(yàn)證了上述規(guī)律(圖3A)。

以對(duì)頭孢噻肟二聚體水解物(MW850)的分析為例說明質(zhì)譜解析二聚體水解物的過程。雖然二聚體Ⅱ側(cè)鏈水解形成的羥基體或內(nèi)酯結(jié)構(gòu)(圖3)的分子量均可為850 Da，但二級(jí)質(zhì)譜圖(圖7B)中僅見脫羧基碎片，未見脫羥基碎片，提示其可能為內(nèi)酯結(jié)構(gòu)；結(jié)合頭孢噻肟鈉的質(zhì)譜裂解規(guī)律[17]，質(zhì)譜圖中m/z456的碎片峰及可由頭孢噻肟分子裂解產(chǎn)生的m/z396、m/z353、m/z324和m/z227特征離子，提示m/z456的碎片峰為頭孢噻肟的[M+H]+加合離子峰；再結(jié)合保留值推測其為頭孢噻肟二聚體Ⅱ水解物Ⅳ(圖7C)。

3.2 3位丙烯基異構(gòu)化產(chǎn)物

第1組7-氨噻肟頭孢菌素中3位具有丙烯基結(jié)構(gòu)的頭孢菌素(圖1)如頭孢丙烯、頭孢克肟，主要通過聚合反應(yīng)Ⅱ應(yīng)形成聚合物，R1結(jié)構(gòu)的差異對(duì)聚合反應(yīng)沒有明顯影響，但聚合過程中β-內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)易形成γ-內(nèi)酯并發(fā)生異構(gòu)化，使得聚合物呈多種異構(gòu)體。如頭孢地尼的3位的丙烯基結(jié)構(gòu)在酸性及中性條件下異構(gòu)化，理論上可形成8種異構(gòu)體(具有3個(gè)手性位點(diǎn))[18-19]，提示頭孢地尼二聚體(二聚體Ⅱ)也可能在聚合中形成多種具有相同分子量的二聚體γ-內(nèi)酯。如在分析頭孢地尼聚合物時(shí)[12]，雜質(zhì)Unk-7-10四個(gè)雜質(zhì)峰的一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖完全一致，它們的相對(duì)分子質(zhì)量均為790 Da；結(jié)合頭孢地尼的質(zhì)譜裂解規(guī)律[17]分析其可能的裂解途徑：二級(jí)質(zhì)譜圖中僅發(fā)現(xiàn)m/z744的脫羧基碎片，m/z773的脫羥基碎片不明顯，且發(fā)現(xiàn)m/z158的特征碎片，提示3位側(cè)鏈為內(nèi)酯結(jié)構(gòu)；而特征的m/z396和m/z242離子碎片，提示形成了頭孢地尼[M+H]+加合離子峰，進(jìn)而推測出二聚體γ-內(nèi)酯的異構(gòu)化位點(diǎn)(圖8)。

比較頭孢地尼、頭孢克肟二聚體和其γ-內(nèi)酯在RP-HPLC中的保留值，二者γ-內(nèi)酯的保留值均大于二聚體，該結(jié)果也可用于對(duì)聚合物結(jié)構(gòu)的驗(yàn)證。

3.3 7位側(cè)鏈衍生物

采用凝膠色譜-柱切換-質(zhì)譜技術(shù)分析頭孢他啶中的聚合物[8]，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)分子量為1159 Da的聚合物雜質(zhì)(HPSEC-2a 和HPSEC-2c)，比頭孢他啶二聚體Ⅰ的分子量多146 Da，命名為頭孢他啶二聚體衍生物I；同時(shí)，發(fā)現(xiàn)2個(gè)為692 Da的雜質(zhì)(HPSEC-4a和HPSEC-4b)，比頭孢他啶的分子量多146 Da；此外，還發(fā)現(xiàn)兩個(gè)分子量為1115 Da的聚合物雜質(zhì)(HPSEC-3c和HPSEC-3f)，比頭孢他啶二聚體衍生物I的分子量少44 Da，命名為頭孢他啶二聚體衍生物Ⅱ；依據(jù)質(zhì)譜分析結(jié)果，推測他們的取代位點(diǎn)均為7位側(cè)鏈。雖然文獻(xiàn)[8]對(duì)他們的可能結(jié)構(gòu)進(jìn)行了推斷，但無法合理解釋在強(qiáng)制聚合溶液中他們的形成機(jī)制。由于HPSEC-2a和HPSEC-2c的二級(jí)質(zhì)譜圖基本相同，HPSEC-4a和HPSEC-4b的二級(jí)質(zhì)譜圖基本相同，推測他們的產(chǎn)生途徑相似，因此，對(duì)分子量為692的雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析，將有助于推測頭孢他啶二聚體衍生物Ⅰ的結(jié)構(gòu)。

由頭孢菌素的降解反應(yīng)機(jī)理可知，伴隨著β-內(nèi)酰胺環(huán)的開環(huán)，可發(fā)生系列重排、降解反應(yīng)[15-16]。依據(jù)該降解反應(yīng)機(jī)理，頭孢他啶二聚體Ⅰ水解可以形成分子量為692的頭孢他啶降解物，該衍生物為順反異構(gòu)體(圖9A)，這可以較好地解釋頭孢他啶二聚體衍生物I的來源，即由頭孢他啶7位側(cè)鏈的氨基與該降解物的3位側(cè)鏈聚合產(chǎn)生(圖9B)。而頭孢他啶二聚體衍生物Ⅱ則可能是分子量為692的頭孢他啶降解物進(jìn)一步脫羧，形成分子量為648的降解物(圖9A)，該降解物與另一分子頭孢他啶按聚合反應(yīng)Ⅱ途徑聚合，同時(shí)3位側(cè)鏈水解形成內(nèi)酯，產(chǎn)生分子量為1115 Da的二聚體衍生物Ⅱ，對(duì)其質(zhì)譜裂解途徑的分析(沒有發(fā)現(xiàn)頭孢他啶的分子離子峰，證明其為水解物Ⅲ)支持所推測結(jié)構(gòu)的正確性(圖9C)。

3.4 氨基與羧基?；磻?yīng)脫水物

在對(duì)頭孢噻肟、頭孢克肟和頭孢他啶的聚合物分析中，分別發(fā)現(xiàn)分子量為832 Da(HPSEC-4)、分子量為888 Da(HPSEC-3h)和分子量為1541 Da(HPSEC-3g, 3h)的聚合物雜質(zhì)，他們均被認(rèn)為由氨基與羧基的?；磻?yīng)產(chǎn)生，但HPSEC-4被認(rèn)為是頭孢噻肟二聚體I的分子內(nèi)脫水產(chǎn)物[10]，HPSEC-3h被認(rèn)為是頭孢克肟分子間脫水形成的二聚體[11]，HPSEC-3g, 3h被認(rèn)為是頭孢他啶分子間脫水形成的三聚體[8]。雖然對(duì)青霉素分子聚合反應(yīng)的理論計(jì)算表明，藥物分子側(cè)鏈的氨基與另一分子2位羧基的反應(yīng)較其他聚合反應(yīng)途徑較難發(fā)生[20]，但上述結(jié)果提示，在強(qiáng)制聚合過程中7-氨噻肟頭孢菌素中的氨基與母核羧基的?；磻?yīng)確已發(fā)生，但究竟更易發(fā)生分子內(nèi)?；磻?yīng)還是分子間?；磻?yīng)尚不能給出明確的答案。

頭孢噻肟二聚體I整個(gè)分子呈線性構(gòu)型(圖5A)，氨基與羧基在分子的兩端，不利于發(fā)生分子內(nèi)的?；磻?yīng)；對(duì)頭孢克肟二聚體差向異構(gòu)體的空間構(gòu)型分析同樣得出其不利于發(fā)生分子內(nèi)的?；磻?yīng)的結(jié)論(圖10A)；故認(rèn)為理論上7-氨噻肟頭孢菌素的氨基與羧基的分子間?；磻?yīng)更容易發(fā)生。重新推測頭孢噻肟中HPSEC-4雜質(zhì)(MW832)的可能結(jié)構(gòu)，認(rèn)為其更可能為頭孢噻肟分子間脫水形成的二聚體水解物，質(zhì)譜裂解途徑分析支持新推測結(jié)構(gòu)的合理性(圖10B)。同理，頭孢他啶三聚體的空間構(gòu)型也不利于氨基與羧基發(fā)生分子內(nèi)的?；磻?yīng)。重新推測HPSEC-3g,3h(分子量為1541 Da的頭孢他啶三聚體脫水物)的可能結(jié)構(gòu)：由于二者的二級(jí)質(zhì)譜圖相似，提示二者為同分異構(gòu)體，可能為聚合反應(yīng)Ⅱ的產(chǎn)物；未發(fā)現(xiàn)特征的m/z547碎片，提示質(zhì)譜分析中未產(chǎn)生特征的頭孢他啶[M+1]+峰；結(jié)合已知的頭孢菌素質(zhì)譜裂解規(guī)律，對(duì)其質(zhì)譜圖中的碎片峰進(jìn)行歸屬，認(rèn)為其最可能結(jié)構(gòu)是頭孢他啶二聚體Ⅱ的羧基與另一分子頭孢他啶的氨基發(fā)生的分子間酰化產(chǎn)物的水解物(圖10C)。

3.5 二聚體脫氫物

采用LC-MS法分析頭孢克肟中的雜質(zhì)unk-6和unk-7，二者的分子量均為904 Da，較頭孢克肟二聚體少2 Da，提示發(fā)生了脫氫反應(yīng)；二者的二級(jí)質(zhì)譜圖差異明顯(圖11A)，在RP-HPLC中的保留值相差也較大，提示二者的結(jié)構(gòu)可能不完全不同。文獻(xiàn)[11]認(rèn)為二者的結(jié)構(gòu)相同，且所推測的結(jié)構(gòu)無法從機(jī)理上解釋在強(qiáng)制聚合溶液(偏堿性水溶液)中他們的產(chǎn)生過程。由頭孢地尼的異構(gòu)化機(jī)理[18-19]可知，β-內(nèi)酰胺開環(huán)可導(dǎo)致3位側(cè)鏈的雙鍵轉(zhuǎn)移，使得氫化噻嗪環(huán)中的電子云分布發(fā)生變化，進(jìn)而發(fā)生雙鍵的重排，形成脫氫反應(yīng)(圖11B)。分子量為904 Da的頭孢克肟脫氫二聚體，可以先按氨基與β-內(nèi)酰胺環(huán)聚合(聚合反應(yīng)Ⅱ)途徑形成二聚體，再脫氫形成頭孢克肟脫氫二聚體Ⅰ(圖11C)，也可以先按羧基與β-內(nèi)酰胺環(huán)聚合形成二聚體(不含氨基頭孢菌素的常見聚合反應(yīng)途徑)，再脫氫形成頭孢克肟脫氫二聚體Ⅱ(圖11D)。從聚合反應(yīng)機(jī)理的角度，脫氫二聚體Ⅰ較脫氫二聚體Ⅱ更易產(chǎn)生；LogP值的計(jì)算提示脫氫二聚體Ⅱ的極性更大，在RP-HPLC中的保留值應(yīng)較??；強(qiáng)制聚合溶液分析顯示，Unk-7的保留值較Unk-6大，其產(chǎn)生量也較Unk-6大，因此推測Unk-7可能為脫氫二聚體I，Unk-6可能為脫氫二聚體Ⅱ。結(jié)合頭孢菌素的質(zhì)譜裂解規(guī)律，分別對(duì)二者質(zhì)譜圖中的碎片峰進(jìn)行歸屬：Unk-7中m/z736和m/z768的特征裂解碎片，提示分子中存在完整的β-內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)構(gòu)，裂解途徑分析支持Unk-7可能為脫氫二聚體I(圖11C)； Unk-6的質(zhì)譜裂解途徑分析支持其可能為脫氫二聚體Ⅱ(圖11D)。

3.6 氫化噻嗪環(huán)降解物

按聚合反應(yīng)Ⅱ等途徑形成的頭孢菌素聚合物分子中通常含有β-內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)結(jié)構(gòu)，開環(huán)分子中的氫化噻嗪環(huán)可進(jìn)一步水解形成巰基，繼而再發(fā)生重排、水解等降解反應(yīng)[15-16]。如頭孢克肟強(qiáng)制降解溶液中的雜質(zhì)Unk-5(MW828)、HPSEC-3i(MW797)等。

對(duì)頭孢克肟雜質(zhì)Unk-5進(jìn)行解析。雖然分子量為828 Da的降解物可能由氨基與β-內(nèi)酰胺環(huán)形成的二聚體降解產(chǎn)生，也可能由羧基與β-內(nèi)酰胺環(huán)形成的二聚體降解產(chǎn)生，但其質(zhì)譜圖中m/z811、m/z783、m/z739的特征碎片峰提示分子中存在完整的β-酰胺環(huán)，未發(fā)現(xiàn)m/z454的頭孢克肟[M+H]+峰，僅出現(xiàn)特征的m/z545碎片(β-內(nèi)酰胺環(huán)裂解產(chǎn)生)；進(jìn)而推測其可能為羧基與β-內(nèi)酰胺環(huán)形成的頭孢克肟二聚體的降解產(chǎn)物，對(duì)其可能的質(zhì)譜裂解途徑分析見圖12A。而對(duì)雜質(zhì)HPSEC-3i(MW797)的解析，提示其是由氨基與β-內(nèi)酰胺環(huán)形成的頭孢克肟二聚體降解產(chǎn)生(圖12B)。

4 總結(jié)

7-氨噻肟頭孢菌素的聚合反應(yīng)主要與7位側(cè)鏈的氨基有關(guān)。對(duì)3位不含可解離基團(tuán)的第1組頭孢菌素，聚合反應(yīng)主要由氨基攻擊另一分子的β-內(nèi)酰胺環(huán)發(fā)生，聚合物為一對(duì)差向異構(gòu)體；對(duì)3位具有可解離基團(tuán)的第2組頭孢菌素，聚合反應(yīng)既可通過氨基攻擊另一分子的3位側(cè)鏈(聚合反應(yīng)Ⅰ)發(fā)生，也可以通過氨基攻擊另一分子的β-內(nèi)酰胺環(huán)(聚合反應(yīng)Ⅱ)發(fā)生。

由頭孢菌素的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)可知，其聚合物結(jié)構(gòu)具有不穩(wěn)定性，進(jìn)而導(dǎo)致了聚合物結(jié)構(gòu)的多樣性。如第1組具有丙烯基結(jié)構(gòu)的頭孢菌素，其易形成γ-內(nèi)酯并發(fā)生差向異構(gòu)化，理論上二聚體可以形成8種γ-內(nèi)酯；第2組頭孢菌素，其3位側(cè)鏈易水解形成羥基體、內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，理論上每一種由聚合反應(yīng)Ⅱ形成的二聚體水解可形成8種異構(gòu)體。此外，氨噻肟頭孢菌素聚合物中還發(fā)現(xiàn)一些偶見的特殊衍生物/降解物，包括：7位氨基衍生物，如頭孢他啶、頭孢甲肟中發(fā)現(xiàn)較二聚體I多146 Da的二聚體衍生物等；氫化噻嗪環(huán)水降解物，如分子量為828 Da的頭孢克肟二聚體降解物等；3位丙烯基結(jié)構(gòu)脫氫物，如頭孢克肟脫氫二聚體等。而7-氨噻肟頭孢菌素中的偶見聚合反應(yīng)途徑，如側(cè)鏈的氨基與另一分子母核羧基的?；磻?yīng)，母核的羧基攻擊另一分子β-酰胺環(huán)的聚合反應(yīng)，更使得7-氨噻肟頭孢菌素的聚合物具有高度的復(fù)雜性。

針對(duì)頭孢菌素聚合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，采用LC-MS技術(shù)推測聚合物的結(jié)構(gòu)時(shí)，首先應(yīng)根據(jù)具體頭孢菌素的結(jié)構(gòu)確定其最可能的聚合反應(yīng)途徑；其次根據(jù)LC-MS給出的分子量信息及對(duì)頭孢菌素降解反應(yīng)的認(rèn)知，推測出各種可能的結(jié)構(gòu)；第三，基于對(duì)頭孢菌素及聚合物質(zhì)譜裂解規(guī)律的認(rèn)知，對(duì)聚合物二級(jí)質(zhì)譜中的主要碎片峰進(jìn)行歸屬，確認(rèn)最可能的結(jié)構(gòu)；最后利用RP-HPLC的保留值驗(yàn)證所確認(rèn)結(jié)構(gòu)的正確性。

雖然頭孢菌素聚合物的結(jié)構(gòu)具有多樣性，然而在對(duì)實(shí)際樣品的分析時(shí)發(fā)現(xiàn)通常存在明顯的指針性聚合物，如第1組頭孢菌素的二聚體，第2組頭孢菌素的二聚體I，他們的含量可基本表征產(chǎn)品中總聚合物的水平，使得利用更專屬的RP-HPLC方法控制產(chǎn)品中的聚合物含量成為可能。