鹽酸安妥沙星片中右旋安妥沙星的測定*

陳 希，鄢雷娜，劉緒平，段和祥

（江西省藥品檢驗檢測研究院 國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術研究中心,江西 南昌 330029）

安妥沙星是通過對左氧氟沙星的分子結構優(yōu)化，在左氧氟沙星的8 位引入-NH2獲得的，是我國擁有自主開發(fā)的一類新藥，屬于手性喹諾酮類藥物[1,2]。結構改造后的安妥沙星抗菌作用不但優(yōu)于氧氟沙星、環(huán)丙沙星，且氨基的引入能使安妥沙星有效降低光敏毒性，心臟毒性甚至低于莫西沙星，有較高的安全性[3-5]。安妥沙星為單一左旋體，與右旋安妥沙星是一對對映體，為了控制藥品質(zhì)量，有必要對鹽酸安妥沙星片中右旋安妥沙星進行控制，但目前，關于左、右旋安妥沙星測定的論文較少，只有洪建文[6]等采用高效毛細管電泳法實現(xiàn)了左、右旋安妥沙星對映體的拆分，且左、右旋安妥沙星峰未達到基線分離，檢測精密度（RSD 大于2%）和檢出限均較低。

目前，手性喹諾酮藥物對映體的拆分多采用以硫酸銅-手性氨基酸為手性添加劑的方法，該方法用手性喹諾酮與手性氨基酸和Cu2+形成三元非對映體的配位化合物，在較短時間內(nèi)在C18色譜柱上實現(xiàn)對映體的拆分，已經(jīng)有文獻對莫西沙星、帕珠沙星、氧氟沙星、尤利沙星等手性喹諾酮藥物對映體進行了拆分測定[7-12]。本文采用L-苯丙氨酸和CuSO4為手性添加劑實現(xiàn)了左、右旋安妥沙星的拆分，并對鹽酸安妥沙星片中右旋安妥沙星進行了測定。

1 實驗部分

1.1 儀器

LC-6AD 型高效液相色譜儀，帶二極管陣列檢測器（日本島津公司）；METTLER MS205DU 電子天平。

1.2 試劑試藥

右旋安妥沙星對照品（批號：130466-201101，含量：90.0% 中國食品藥品檢定研究院）；左旋安妥沙星對照品（批號：130457-201101，含量：90.9% 中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，L-苯丙氨酸生化試劑，其余試劑均為分析純。鹽酸安妥沙星片（規(guī)格：0.1g，批號190117，平均片重0.181g 安徽環(huán)球藥業(yè)股份有限公司）。

1.3 色譜條件

流動相 L-苯丙氨酸-硫酸銅溶液（8mmol·L-1的L-苯丙氨酸和4 mmol·L-1的CuSO4，用NaOH 溶液調(diào)節(jié)pH 值至3.5）-甲醇（80∶20），流速：1.0mL·min-1，檢測波長：302nm，進樣量：10μL，柱溫40℃，色譜柱為Welch Ultimate XB-C18（4.6mm×250mm，5μm）。

1.4 溶液的制備

精密稱取左旋安妥沙星對照品和右旋安妥沙星對照品各約27mg，置于25mL 量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為左、右旋安妥沙星對照品儲備液（左、右旋安妥沙星各約1000μg·mL-1）。精密稱取右旋安妥沙星對照品約11mg，置于100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻（右旋安妥沙星約100μg·mL-1）。精密量取上述溶液5mL，置50mL 量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為右旋安妥沙星對照品溶液（含右旋安妥沙星約10μg·mL-1）。

取鹽酸安妥沙星片，研細，精密稱取細粉約18mg，置10mL 量瓶中，加流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液（左旋安妥沙星約1000μg·mL-1）。

2 結果與討論

2.1 系統(tǒng)適應性實驗

取對照品儲備液，按上文色譜條件測定，左、右旋安妥沙星峰保留時間分別為11.698 和14.827min，兩峰間的分離度為5.618，達到基線分離。

圖1 左、右旋安妥沙星對照品色譜圖Fig.1 Levorotatory antofloxacin and dextral antofloxacin reference chromatogram

2.2 線性范圍

取左、右旋安妥沙星對照品儲備液適量，分別加流動相稀釋成含左、右旋安妥沙星濃度分別約為500、200、100、50、20、10、2μg·mL-1的 標 準 系 列 溶液，分別按上述色譜條件測定。以左、右旋安妥沙星的濃度（x）為橫坐標，左、右旋安妥沙星的峰面積為縱坐標（y）進行線性回歸。安妥沙星兩對映體濃度在約2～500μg·mL-1之間與相應對映體峰面積呈良好線性關系。左旋安妥沙星回歸方程為y = 4.008×104x+6.723×103，R2=0.99991。左旋安妥沙星回歸方程為y = 4.036×104x+8.099×103，R2= 0.99994。

2.3 精密度

取左、右旋安妥沙星濃度約為500μg·mL-1的混合對照品溶液，按上述色譜條件進行測定。對照品溶液連續(xù)進樣6 針分析，左、右旋安妥沙星峰面積的RSD 為0.1%和0.2%，說明本方法精密度良好。

2.4 重復性

按“1.4”中供試品制備方法，平行制備6 份供試品溶液。取6 份供試品溶液和右旋安妥沙星對照品溶液（右旋安妥沙星約10μg·mL-1），分別按上述色譜條件測定，供試品典型色譜圖詳見圖2。

圖2 供試品色譜圖Fig.2 Chromatograms of sample

按外標法計算鹽酸安妥沙星片中右旋安妥沙星的量，結果為0.0633%、0.0618%、0.0627%、0.0607%、0.0601%、0.0615%，平均值為0.062%，RSD 為2.0%?！吨袊幍洹?020 年版中對待測成分含量約0.1%的重復性RSD 要求小于3%，本方法重復性RSD 為2.0%，說明本方法重復性良好。

2.5 定量限與檢出限

取左、右旋安妥沙星濃度約為2μg·mL-1，用流動相稀釋成含左、右旋安妥沙星濃度約1.0 和0.3μg·mL-1的溶液，分別按上述色譜條件測定，結果左、右旋安妥沙星峰信噪比均滿足10∶1 和3∶1。本方法左、右旋安妥沙星的檢出限和定量限分別為1.0μg·mL-1和0.3μg·mL-1。

2.6 準確度

精密稱取鹽酸安妥沙星片細粉約18mg（9 份），分別加右旋安妥沙星對照品溶液（含右旋安妥沙星約100μg·mL-1）0.5、1.0 和1.5mL（每個濃度平行制備3 份），加流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過后照上述色譜條件測定并計算回收率。回收率為98.96%～101.57%，平均回收率為100.0%，RSD 為0.9%，說明本方法準確度良好，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab.1 Results of recovery tests（n＝9）

3 結論

本研究采用以L-苯丙氨酸和CuSO4為手性流動相添加劑的流動相，使用C18色譜柱實現(xiàn)了左、右旋安妥沙星的拆分，并對鹽酸安妥沙星片中右旋體含量進行了測定。該測定方法前處理簡便，適用于鹽酸安妥沙星片中右旋體的控制，且具有極佳的精密度、重復性和準確度等特點，方法優(yōu)于高效毛細管電泳法。