脂肪非典型鈣黏蛋白 4及 O型蛋白酪氨酸磷酸酶受體與胃癌預(yù)后的關(guān)系研究

劉真真，潘妍，胡輝歌

1西安市人民醫(yī)院（西安市第四醫(yī)院）胃腸內(nèi)鏡診療中心，西安 710000

2空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，西安 710032

3西安國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院消化內(nèi)科，西安 710000

近年來隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，胃癌發(fā)病率呈逐漸下降趨勢，但其病死率仍居高不下[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，胃癌的發(fā)生與遺傳學(xué)、表觀遺傳學(xué)的改變密切相關(guān)，而多種原癌基因激活、抑癌基因失活也與胃癌發(fā)生有直接的聯(lián)系[2]。脂肪非典型鈣黏蛋白4（FAT atypical cadherin 4，F(xiàn)AT4）是鈣黏蛋白中的一員，屬于重要的抑癌基因。有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AT4在乳腺癌中為重要的抑癌基因，通過檢測發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)性胃癌患者外顯子測序中，F(xiàn)AT4與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，F(xiàn)AT4表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移[3]。O型蛋白酪氨酸磷酸酶受體（protein tyrosine phosphatase receptor type O，PTPRO）屬于候選抑癌基因，與胃癌預(yù)后可能存在一定的聯(lián)系[4]。本研究通過對比分析FAT4及PTPRO在胃癌患者中的表達(dá)情況，了解其與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系，為臨床診療胃癌提供新思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年1月至2021年1月西安市第四醫(yī)院收治的胃癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)手術(shù)后病理檢查證實(shí)為胃癌；②臨床資料、病理資料完整；③年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①非首次治療；②合并其他部位腫瘤；③隨訪資料缺失。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入112例胃癌患者，其中男64例，女48例；年齡45～78歲，平均（56.61±3.24）歲。選擇距腫瘤≥5 cm處無癌變正常胃組織作為對照。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 FAT 4及PTPRO檢測方法將標(biāo)本使用常規(guī)石蠟包埋，行4 μm厚連續(xù)切片，癌旁組織進(jìn)行相同的處理，F(xiàn)AT4及PTPRO均使用免疫組化檢測。FAT4蛋白表達(dá)檢測試劑為美國No-vus Biologicals公司提供的兔多克隆FAT4抗體（1∶150稀釋）；PTPRO蛋白表達(dá)檢測試劑為Abcam公司提供的兔抗人PTPRO多克隆抗體（1∶500稀釋）；陰性對照采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替，已知陽性切片作為陽性對照。結(jié)果判定：FAT4以細(xì)胞質(zhì)為黃色或黃棕色為陽性；PTPRO以細(xì)胞質(zhì)為棕褐色為陽性。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為1分，10%～39%為2分，40%～75%為3分，≥76%為4分；1分為陰性，＞1分為陽性。

1.2.2 收集資料收集患者臨床資料，包括年齡、性別、TNM分期（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期）、分化程度（低分化、中～高分化）、分型（腸型、彌漫型）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大?。ā? cm、＞5 cm）等。

1.2.3 隨訪在患者治療后進(jìn)行為期6個(gè)月的隨訪以了解患者預(yù)后情況，根據(jù)有無復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移分為預(yù)后不良組與預(yù)后良好組。

1.3 觀察指標(biāo)

對比不同組織中FAT4及PTPRO表達(dá)情況，分析影響胃癌預(yù)后的危險(xiǎn)因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，影響因素分析采用多元Logistic回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FAT 4及PTPRO表達(dá)情況的比較

正常胃組織中FAT4及PTPRO陽性表達(dá)率均高于胃癌組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 胃癌組織與正常胃組織中FAT 4及PTPRO表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.2 胃癌預(yù)后影響因素的單因素分析

112例患者中，預(yù)后良好91例，預(yù)后不良21例。預(yù)后良好與預(yù)后不良患者TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、FAT4表達(dá)情況、PTPRO表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；預(yù)后良好與預(yù)后不良患者年齡、性別、分型、腫瘤大小比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 胃癌預(yù)后影響因素的單因素分析

2.3 胃癌預(yù)后影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量，胃癌預(yù)后作為因變量，經(jīng)非條件多因素Logistic回歸模型分析顯示，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FAT4陰性、PTPRO陰性均是胃癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表3）

表3 胃癌預(yù)后影響因素的多因素分析

3 討論

FAT鈣黏蛋白家族由32～34次的重復(fù)鈣黏蛋白組成，最早在果蠅中被發(fā)現(xiàn)[5]。FAT鈣黏蛋白家族中的各成員雖有著相似的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)，但其細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)有所不同，從而形成了每一個(gè)FAT鈣黏蛋白家族的獨(dú)特功能。FAT1是目前臨床研究最多的FAT鈣黏蛋白家族成員，在細(xì)胞黏附、神經(jīng)元功能、細(xì)胞遷移中均有重要的團(tuán)控作用。在以往研究中也發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AT1在多種疾病及多數(shù)惡性腫瘤中表達(dá)明顯下降[6]。但FAT1在惡性腫瘤中并不完全一致，在乳腺癌、口腔癌中其表達(dá)下調(diào)，但在肺癌、小腸癌、白血病中其表達(dá)上調(diào)，因此FAT1在不同的研究中可表現(xiàn)出抑癌基因和致癌基因的功能[7]。FAT4則是與FAT1序列最為相似的成員，在目前多數(shù)研究中均顯示，F(xiàn)AT4與多種惡性腫瘤之間存在明顯相關(guān)性。有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AT4表達(dá)下調(diào)對內(nèi)皮細(xì)胞的運(yùn)動及轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用，提示FAT4在腫瘤細(xì)胞的遷移中具有一定的作用[8]。此外，也有研究顯示，F(xiàn)AT4屬于細(xì)胞黏附性蛋白，可影響細(xì)胞的遷徙運(yùn)動。在魏東等[9]研究中，發(fā)現(xiàn)FAT4為影響胃癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要抑癌基因，其低表達(dá)可促進(jìn)胃癌轉(zhuǎn)移。在本研究中也發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AT4在正常胃組織中陽性表達(dá)率高于胃癌組織，與上述研究結(jié)果相符。

酪氨酸磷酸化對細(xì)胞的內(nèi)通訊、轉(zhuǎn)錄、存活、分化等有重要的作用，而此種變化與酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸酶之間的平衡密切相關(guān)[10]。PTPRO與酪氨酸磷酸酶作用相反，PTPRO具有抑癌因子的大部分特征[11]。在以往研究中通過建立肝細(xì)胞肝癌大鼠模型發(fā)現(xiàn)，在其癌前病變、腫瘤組織中PTPRO啟動因子出現(xiàn)甲基化改變，在肝癌細(xì)胞中也出現(xiàn)甲基化，但在正常的大鼠肝臟中并未出現(xiàn)甲基化[12]。PTPRO在大鼠原發(fā)性肝癌中表達(dá)明顯下調(diào)，通過DNA甲基化酶抑制劑脫氧5-氮雜胞苷使細(xì)胞中PTPRO去甲基化后，PTPRO表達(dá)上調(diào)，腫瘤也隨之縮小[13]。此外，在乳腺癌、白血病、肺癌等研究中，與正常組織相比，PTPRO在腫瘤組織中表達(dá)被抑制[14]。有研究通過使用基因表達(dá)譜芯片對胃腺癌患者相關(guān)基因進(jìn)行篩查，胃腺癌與正常胃黏膜間多種基因表達(dá)存在差異，表達(dá)下調(diào)的基因中PTPRO可抑制細(xì)胞增殖[15]。在本研究中通過免疫組化法發(fā)現(xiàn)PTPRO在正常胃組織中陽性表達(dá)率明顯高于胃癌組織。且通過影響因素分析發(fā)現(xiàn)，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FAT4陰性、PTPRO陰性均為影響胃癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，與以往研究結(jié)果相符[16]，提示FAT4、PTPRO下調(diào)可能預(yù)示著患者預(yù)后不良，兩者均可發(fā)揮抑制腫瘤的作用。

綜上所述，F(xiàn)AT4、PTPRO在胃癌組織中表達(dá)下調(diào)，與預(yù)后密切相關(guān)。在臨床中檢測胃癌患者FAT4、PTPRO表達(dá)可為患者預(yù)后評估及術(shù)后治療提供依據(jù)。