酒糟纖維素降解菌的分離及其堆肥應(yīng)用

吳耀領(lǐng)，席曉黎，曾祥煉，呂錫斌，王和玉，王 莉

（貴州茅臺(tái)酒股份有限公司，貴州 遵義 563000）

酒糟是釀酒后產(chǎn)生的廢渣，主要成分纖維素含量高達(dá)34%[1]。酒糟pH 值介于3.4～4.0[2-3]，具有高酸的特點(diǎn)。據(jù)2016 年數(shù)據(jù)，我國每年酒糟產(chǎn)量超過1億t[4]，未經(jīng)處理的酒糟排放到環(huán)境中容易造成污染。利用酒糟生產(chǎn)有機(jī)肥，不僅可以變廢為寶，還有利于降低對(duì)環(huán)境的污染。酒糟堆肥過程中，纖維素降解緩慢一直是影響堆肥產(chǎn)品穩(wěn)定性的重要因素[5-7]。只依靠堆肥原料中原有的微生物很難有效降解堆肥物料中的纖維素，通過在堆肥過程中添加高效纖維素降解菌劑可以有效促進(jìn)纖維素降解，加快堆肥腐熟和穩(wěn)定[8]。然而，近年來關(guān)于酒糟纖維素微生物降解的研究較少，蘭小艷等[9]利用康寧木霉降解經(jīng)過降酸處理的白酒糟中的粗纖維，纖維素降解率為25.9%；何頌捷等[10]從酒糟中篩選得到1株貝萊斯芽孢桿菌，能夠使酒糟纖維素降解率達(dá)到22.1%；李永博等[11]從酒糟中篩選到1株枯草芽孢桿菌，纖維素酶活力達(dá)到25.84 U/mL。雖然上述菌株存在潛在應(yīng)用價(jià)值，但是并沒有關(guān)于其對(duì)酒糟高酸、高濃度乙醇等環(huán)境因素適應(yīng)性的報(bào)道，尚不足指導(dǎo)菌株的實(shí)際應(yīng)用。并且關(guān)于酒糟堆肥中的纖維素降解外源菌劑報(bào)道較少，且公開的微生物菌劑很難在較高酸度的酒糟中定植，酒糟堆肥的效果并不理想。

鑒于此，針對(duì)酒糟纖維素含量高、pH 值低等問題，擬從丟棄酒糟中篩選能夠高效降解纖維素且在酒糟堆肥中可快速定植生長的菌株。并將篩選出的菌株制備成復(fù)合菌劑，添加到酒糟中進(jìn)行纖維素降解和堆肥發(fā)酵試驗(yàn)，研究菌劑不同添加量的堆肥效果，為酒糟堆肥化生產(chǎn)提供菌種資源和理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 酒糟 酒糟：貴州茅臺(tái)酒股份有限公司釀酒后產(chǎn)生的廢棄酒糟（pH 值3.53、水分56.8%）；酒糟堆肥：將酒糟在開放式環(huán)境、人工翻堆條件下進(jìn)行高溫好氧發(fā)酵堆肥。

1.1.2 培養(yǎng)基 富集培養(yǎng)基：羧甲基纖維素鈉5 g、硝酸鈉1 g、十二水磷酸氫二鈉1.6 g、磷酸氫二鉀0.9 g、氯化鉀0.5 g、七水硫酸鎂0.5 g、酵母浸膏0.5 g、蛋白胨0.5 g，以去離子水補(bǔ)至1 L，pH值自然；LB 培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、氯化鈉5 g，以去離子水補(bǔ)至1 L，pH 值7.0；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：蛋白胨10 g、牛肉膏5 g、氯化鈉5 g，以去離子水補(bǔ)至1 L，pH值7.0；纖維素剛果紅培養(yǎng)基：羧甲基纖維素鈉2.0 g、七水硫酸鎂0.3 g、磷酸氫二鉀1.0 g、硫酸銨2.0 g、氯化鈉0.5 g、剛果紅0.4 g，以去離子補(bǔ)至水1 L，pH值7.0；赫奇遜噬纖維素培養(yǎng)基：硝酸鈉2.5 g、磷酸二氫鉀1 g、六水氯化鈣0.1 g、硫酸鎂0.3 g、氯化鈉0.1 g、氯化鐵0.01 g，以去離子水補(bǔ)至1 L，pH值自然；稻草發(fā)酵培養(yǎng)基：硝酸鈉2.5 g、磷酸二氫鉀1 g、六水氯化鈣0.1 g、硫酸鎂0.3 g、氯化鈉0.1 g、氯化鐵0.01 g、稻草15 g（1 cm），以去離子水補(bǔ)至1 L，pH 值自然；馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g，以去離子水補(bǔ)至1 L，pH值自然。上述培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基配方，其對(duì)應(yīng)的固體培養(yǎng)基添加2%的瓊脂粉制成。所有培養(yǎng)基均在121 ℃下高壓滅菌20 min。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 纖維素降解菌的初篩 取酒糟堆肥的中、高溫階段樣品各10 g，放入盛有90 mL 富集培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行富集培養(yǎng)。置于搖床上，120 r/min 振蕩培養(yǎng)48 h。用無菌水將菌液逐級(jí)稀釋，吸取0.1 mL稀釋后的菌液均勻涂布于LB固體培養(yǎng)基上，30 ℃培養(yǎng)3～7 d。挑取優(yōu)勢(shì)菌株，點(diǎn)接于纖維素剛果紅固體培養(yǎng)基上。將固體培養(yǎng)基置于電熱恒溫培養(yǎng)箱中30 ℃培養(yǎng)3～7 d，根據(jù)纖維素剛果紅固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明圈的情況以及透明圈與菌落直徑比，初步判斷其是否為纖維素降解菌。

1.2.2 纖維素降解菌的纖維素降解能力檢測(cè) 將分離的微生物分別接種到LB 液體培養(yǎng)基中活化12 h。按4%接種到200 mL 含有1%濾紙條（1 cm×2 cm）的赫奇遜噬纖維素培養(yǎng)基中，對(duì)照培養(yǎng)基中不添加纖維素降解菌，60 r/min 振蕩培養(yǎng)7 d。培養(yǎng)結(jié)束后80 ℃烘干至恒質(zhì)量，用減重法計(jì)算濾紙失重率[12]。

1.2.3 菌種鑒定 將篩選出的高效纖維素降解菌純化后，送往中國科學(xué)院微生物研究所進(jìn)行形態(tài)學(xué)特征分析和分子生物學(xué)鑒定。提取篩選菌株的基因組DNA，并將其作為模板擴(kuò)增16S rRNA 和ITS 基因片段。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果利用GenBank 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行BLAST 比對(duì)，并使用軟件MEGA 7.0構(gòu)建Neighbor-Joining系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.4 不同菌株組合的纖維素降解能力檢測(cè) 將篩選出的纖維素高效降解菌的單菌以及組合成的復(fù)合菌分別接種到LB液體培養(yǎng)基中活化12 h，再分別以10%添加量添加到以稻草為碳源的100 mL 培養(yǎng)基中，對(duì)照不添加纖維素高效降解菌。30 ℃、140 r/min 振蕩培養(yǎng)12 d，用減重法計(jì)算稻草的降解率[13]。

1.2.5 復(fù)合菌劑制備 將篩選的3株高效纖維素降解菌菌株分別劃線接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，28～32 ℃培養(yǎng)48 h。然后分別接入500 mL 三角瓶中，在30 ℃、135 r/min下，振蕩培養(yǎng)24 h。將上述各菌株的液體菌種以10%（v/w）接種量分別接入滅菌后的麩皮上，混勻，置于竹簍中，覆蓋4 層紗布，室溫培養(yǎng)。每天攪拌1次，培養(yǎng)6 d，使微生物數(shù)量達(dá)6×108cfu/g 以上。將培養(yǎng)所得的麩皮菌劑晾曬后按照1∶1∶1 混勻，得到復(fù)合菌劑。

1.2.6 復(fù)合菌劑堆肥試驗(yàn) 將復(fù)合菌劑分別以0.6%、0.8%和1.0%的接種量接種于含水56.8%的200 kg 鮮酒糟堆內(nèi)，對(duì)照不添加菌劑。堆體呈圓錐體，堆體高70 cm、直徑80 cm。發(fā)酵期間使用稻草對(duì)堆體加以適當(dāng)覆蓋，以防止空氣中微生物進(jìn)入。試驗(yàn)設(shè)置3次重復(fù)。其中，堆肥0.5 d時(shí)、1—11 d每天測(cè)定堆體溫度1次；堆肥0、3、7、9 d時(shí)分別測(cè)定堆體pH值1次；堆肥0、6、12、24、30 d時(shí)分別測(cè)定堆體纖維素降解率和T值各1次。

1.2.7 指標(biāo)測(cè)定 采用王和玉等[14]的方法測(cè)定溫度和pH值；采用灼燒法[15-16]測(cè)定總有機(jī)碳含量；采用凱氏定氮法[17]測(cè)定總氮含量；參照于慧娟[18]的方法測(cè)定纖維素降解率。碳氮比（C/N）為總有機(jī)碳和總氮的比值；T值為堆肥終點(diǎn)碳氮比/堆肥初始碳氮比。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 20.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，采用SigmaPlot 10.0繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 酒糟纖維素降解菌鑒定及菌株組合篩選

2.1.1 酒糟纖維素降解菌的篩選 從酒糟堆肥的中、高溫期分離出8株優(yōu)勢(shì)菌，分別點(diǎn)接到纖維素剛果紅固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。8 株菌中有6 株產(chǎn)生透明圈（圖1）。其中，菌株MX8 透明圈與菌落直徑比最大，為4.0；其次是菌株MX6、MX1、MM6、TX1；MM2的透明圈與菌落直徑比最小，為1.4。

圖1 菌株的透明圈與菌落直徑比Fig.1 Ratio of transparent circle diameter to colony diameter of strains

2.1.2 酒糟纖維素降解菌的濾紙降解能力篩選

將分離得到的8株菌在赫奇遜噬纖維素培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 d，濾紙條的失重率如圖2 所示。其中，菌株MM2、MM6、MX8 的濾紙條失重率較高，分別為21.3%、29.2%、31.8%，說明MM2、MM6、MX8 菌株的纖維素降解能力較強(qiáng)。

圖2 菌株作用下濾紙條的失重率Fig.2 Weight loss rate of filter paper strips under the action of strains

根據(jù)纖維素剛果紅培養(yǎng)基和赫奇遜噬纖維素培養(yǎng)基的篩選結(jié)果，最終選取MM2、MM6、MX8 共3株菌為酒糟纖維素高效降解菌進(jìn)行下一步試驗(yàn)。

2.1.3 酒糟纖維素降解菌鑒定 圖3 顯示，篩選的纖維素降解菌MM2、MM6 和MX8 菌株分別與宛氏擬青霉（Paecilomyces varioti）、煙曲霉（Aspergillus fumigatus）和地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）同源性最高，親緣關(guān)系最近。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征及分子生物學(xué)方法，菌株MM2 被鑒定為宛氏擬青霉，菌株MM6 被鑒定為煙曲霉，菌株MX8 被鑒定為地衣芽孢桿菌。

圖3 基于ITS基因序列（A）和16S rRNA基因序列（B）構(gòu)建的酒糟纖維素降解菌的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree of cellulose-degrading strains based on ITS gene sequences（A）and 16S rRNA gene sequences（B）

2.1.4 酒糟纖維素降解菌的稻草降解能力分析

稻草降解試驗(yàn)結(jié)果如圖4 所示。當(dāng)菌株MM2、MM6 和MX8 單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)，稻草的降解率分別為19.98%、40.98%、27.36%。其中，菌株MM6 對(duì)稻草的降解率顯著高于其他2個(gè)菌株。當(dāng)菌株兩兩混合時(shí)，混合菌株對(duì)稻草的降解率均高于其相應(yīng)單個(gè)株菌，MM2+MM6、MM2+MX8、MM6+MX8 對(duì)稻草的降解率分別為45.89%、36.22%、44.24%，表明MM2、MM6 和MX8 這3 株菌兩兩之間在稻草降解方面存在一定協(xié)同性。當(dāng)3 個(gè)菌株混合培養(yǎng)（MM2+MM6+MX8）時(shí)，稻草降解率為42.12%。上述結(jié)果表明，3個(gè)菌株混合后的協(xié)同性雖然沒有2個(gè)菌株的大，但未出現(xiàn)抑制效果。

圖4 酒糟纖維素降解菌及其復(fù)合菌劑的稻草降解率Fig.4 Degradation rate of straw under different strain combinations

2.2 復(fù)合菌劑不同添加量對(duì)酒糟堆肥化的影響

2.2.1 復(fù)合菌劑不同添加量對(duì)酒糟堆肥化過程中溫度的影響 圖5 顯示，復(fù)合菌劑接種量為0.8%和1.0%的堆體升溫速度最快，堆置0.5 d 后開始升溫，2 d后前者溫度達(dá)到48 ℃。0.6%復(fù)合菌劑接種量的堆體和對(duì)照堆體分別在堆肥3 d 和7 d 時(shí)開始升溫。堆肥至10 d，4 種處理堆體溫度均達(dá)到最高，并開始降溫，說明酒糟堆肥已經(jīng)達(dá)到了無害化處理。整個(gè)堆肥過程中，對(duì)照堆體的溫度低于0.6%復(fù)合菌劑接種量堆體的溫度，而0.6%復(fù)合菌劑接種量堆體的溫度低于0.8%和1.0%復(fù)合菌劑接種量堆體的溫度，說明0.8%和1.0%復(fù)合菌劑接種量的酒糟堆肥的腐熟效果優(yōu)于0.6%復(fù)合菌劑接種量和對(duì)照。0.8%和1.0%復(fù)合菌劑接種量堆體溫度變化基本一致。由此判斷，在酒糟堆肥過程中加入MM2、MM6、MX8的復(fù)合菌劑能夠顯著提高堆體的升溫速度，延長高溫期，有利于酒糟堆肥的腐熟，且以0.8%和1.0%復(fù)合菌劑接種量促腐效果為最好。

圖5 復(fù)合菌劑不同添加量酒糟堆肥化過程中溫度變化Fig.5 Variation of temperature during composting of distiller’s grains with different inoculation amount of complex microbial community

2.2.2 復(fù)合菌劑不同添加量對(duì)酒糟堆肥化過程中pH 值的影響 圖6 顯示，隨堆肥時(shí)間的延長，堆體的pH 值逐漸升高。堆肥開始時(shí)堆體的pH 值為3.53；堆肥3 d 時(shí)，對(duì)照和添加0.6%、0.8%和1.0%復(fù)合菌劑的堆體pH 值分別上升至3.63、4.02、5.23 和6.05。表明復(fù)合菌劑能夠在酒糟高酸環(huán)境中迅速定植并生長，具有較好的酸環(huán)境適應(yīng)性，且隨復(fù)合菌劑接種量的增加，酒糟堆肥pH值升高速度也表現(xiàn)為加快趨勢(shì)。堆肥9 d 時(shí)，添加0.6%、0.8%和1.0%復(fù)合菌劑堆體的pH值升至6.47、6.99和7.01，已經(jīng)達(dá)到堆肥腐熟的國家有機(jī)肥標(biāo)準(zhǔn)要求，即pH 值介于5.5～8.5[19]。0.8%和1.0%復(fù)合菌劑接種量降低酒糟堆肥酸度的效果優(yōu)于0.6%復(fù)合菌劑接種量和對(duì)照。

圖6 復(fù)合菌劑不同添加量酒糟堆肥化過程中pH值變化Fig.6 Variation of pH values during composting of distiller’s grains with different inoculation amount of complex microbial community

2.2.3 復(fù)合菌劑不同添加量對(duì)酒糟堆肥化過程中纖維素降解率的影響 圖7 顯示，酒糟堆肥過程中0～12 d 纖維素降解最快，12 d 后纖維素降解速度開始變緩，這與溫度變化趨勢(shì)相對(duì)應(yīng)。0.6%復(fù)合菌劑接種量堆體和對(duì)照堆體纖維素降解率低于0.8%和1.0%復(fù)合菌劑接種量堆體的纖維素降解率。至堆肥發(fā)酵30 d，對(duì)照及0.6%、0.8%和1.0%復(fù)合菌劑添加量堆體的酒糟纖維素分別降解了18.0%、28.6%、34.8%和37.0%。0.8%和1.0%復(fù)合菌劑添加量的酒糟纖維素降解率接近，二者顯著高于0.6%復(fù)合菌劑添加量和對(duì)照堆體的酒糟纖維素降解率。1.0%復(fù)合菌劑添加量堆體纖維素的降解率比對(duì)照高

圖7 復(fù)合菌劑不同添加量酒糟堆肥化過程中纖維素降解率變化Fig.7 Variation of degradation rate of cellulose during composting of distiller’s grains with different inoculation amount of complex microbial community

105.6%。

2.2.4 復(fù)合菌劑不同添加量對(duì)酒糟堆肥化過程中T

值的影響 圖8 表明，4 個(gè)處理在堆肥發(fā)酵前期的T值均呈現(xiàn)短暫上升趨勢(shì)，這可能與前期微生物的大量繁殖造成氮源消耗和氮素?fù)]發(fā)有關(guān)。隨著高溫期碳素大量分解，堆肥12 d 時(shí)，其T 值顯著降低，而后下降速度變緩。0.8%和1.0%復(fù)合菌劑添加量堆體的酒糟T 值降低速度快于對(duì)照和0.6%復(fù)合菌劑添加量堆體的酒糟T 值。堆肥30 d 時(shí)，對(duì)照以及0.6%、0.8%和1.0%復(fù)合菌劑添加量的酒糟堆體T值分別為0.76、0.67、0.62 和0.61，添加復(fù)合菌劑的堆肥T值小于0.7[20]，達(dá)到腐熟要求。

圖8 復(fù)合菌劑不同添加量酒糟堆肥發(fā)酵過程中T值變化Fig.8 Variation of T values during composting of distiller’s grains with different inoculation amount of complex microbial community

3 結(jié)論與討論

在好氧堆肥過程中，堆肥中添加高效纖維素降解菌劑能夠促進(jìn)纖維素的降解，加快堆肥腐熟和穩(wěn)定[21]。陽剛等[22]分離了1 株纖維素降解菌，混合發(fā)酵白酒酒糟后發(fā)現(xiàn)，酒糟粗纖維降低了15.23%。李國偉等[23]篩選出1 株香坊腸桿菌并發(fā)酵白酒酒糟，發(fā)現(xiàn)粗纖維降低37.06%，顯著降低了酒糟的纖維素含量。劉青海等[24]研究了高效纖維素降解菌株復(fù)合菌劑在油菜秸稈堆肥中的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)接入纖維素降解復(fù)合菌劑的纖維素降解率達(dá)到16.4%，平均C/N由28.18 下降至14.19。大部分篩選纖維素分解菌的研究強(qiáng)調(diào)菌劑在某一特定環(huán)境條件下的功能，并不特別關(guān)注其是否具有環(huán)境適應(yīng)性。但微生物菌劑在實(shí)際使用時(shí)，容易受周圍環(huán)境的影響，廢棄物降解效果不佳，這也是復(fù)合微生物在生物堆肥應(yīng)用中的巨大缺陷[25]。低pH 值是影響堆肥微生物菌體生長的重要因素，會(huì)嚴(yán)重抑制堆肥反應(yīng)的進(jìn)行，影響堆肥的效果[26]。樸哲等[27]發(fā)現(xiàn)，纖維素分解菌復(fù)合系MC1 的纖維素酶在pH 值介于4.5～10.5 時(shí)表現(xiàn)出較高的穩(wěn)定性，但超出此范圍，酶活性急劇下降直至喪失。另外，復(fù)合菌劑的環(huán)境穩(wěn)定性和耐受性比單一菌株更強(qiáng)，對(duì)復(fù)雜環(huán)境的堆肥更有利，而具有協(xié)同性的復(fù)合菌劑對(duì)纖維素降解效果明顯優(yōu)于單一菌株[28]。王元明[29]篩選了2 株存在協(xié)同性的鏈霉菌，混合培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，復(fù)合菌劑對(duì)濾紙降解效果明顯優(yōu)于單一菌株，對(duì)水稻和玉米秸稈的纖維素降解率比單一菌株高56.4%。因此，纖維素降解復(fù)合菌劑的篩選需要關(guān)注菌株的環(huán)境適應(yīng)性和菌株間的協(xié)同性。

本研究從酒糟中篩選出高效降解纖維素的菌株MM2、MM6、MX8，經(jīng)鑒定分別為宛氏擬青霉（Paecilomyces varioti）、煙曲霉（Aspergillus fumigatus）和地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis），3 株菌均表現(xiàn)出較高的纖維素降解能力。此外，菌株MM2呈現(xiàn)出在纖維素剛果紅培養(yǎng)基上纖維素降解能力較低、在赫奇遜噬纖維素培養(yǎng)基上纖維素降解能力較高的結(jié)果，這可能是因?yàn)? 種培養(yǎng)基中添加的纖維素不同所致。纖維素剛果紅培養(yǎng)基中所添加纖維素為羧甲基纖維素鈉，是天然纖維經(jīng)過堿處理得到的改性纖維素[30]，其分子質(zhì)量和交聯(lián)度較小，因此，具有單一組分的纖維素降解酶即可將其降解[31]；赫奇遜噬纖維素培養(yǎng)基中的濾紙纖維素是天然纖維素，分子質(zhì)量和交聯(lián)度較高，需要微生物產(chǎn)生的解鏈因子、內(nèi)切葡聚糖酶、外切纖維素酶和β-葡萄糖苷酶等多種因子和酶參與才能將其降解[32]。本研究中，3株菌兩兩之間存在一定協(xié)同性，且3 個(gè)菌株混合后未出現(xiàn)抑制效果。青格爾等[33]的研究表明，復(fù)合菌劑對(duì)環(huán)境的變化具有較強(qiáng)的緩沖調(diào)節(jié)能力。因此，為減少環(huán)境的影響，將3 個(gè)菌株組合成酒糟纖維素降解復(fù)合菌劑。

堆肥過程中溫度的變化反映堆體內(nèi)微生物活性的變化[34-37]，同時(shí)也是堆肥達(dá)到無害化和穩(wěn)定化的重要條件[38]。丁敬[39]認(rèn)為，堆體溫度的高低決定著堆肥速度的快慢，可將其作為判定堆肥產(chǎn)品是否腐熟的指標(biāo)之一。將3株菌混合制成復(fù)合菌劑用于酒糟的堆肥化試驗(yàn)，復(fù)合菌劑表現(xiàn)出較好的酸環(huán)境適應(yīng)性，能夠在較高酸度酒糟堆肥中快速增殖并啟動(dòng)堆肥發(fā)酵，顯著提高堆肥的升溫速度，延長高溫期。魏自民等[40]認(rèn)為，小分子有機(jī)酸主要存在于未腐熟的堆肥中，可以利用堆肥酸度變化來判斷堆肥的腐熟度。酒糟堆肥9 d 時(shí)，添加0.6%、0.8%和1.0%復(fù)合菌劑的堆體的pH 值升至6.47、6.99 和7.01，已經(jīng)達(dá)到國家有機(jī)肥標(biāo)準(zhǔn)中堆肥腐熟的酸度要求。C/N 可以反映堆肥物料的穩(wěn)定性。當(dāng)堆肥產(chǎn)品的C/N 小于20 時(shí)，即可判定堆肥產(chǎn)品已達(dá)腐熟[41]。但對(duì)于植物秸稈之類的固體廢棄物堆肥材料來說，堆肥初始C/N 值較低，此時(shí)C/N 不能作為堆肥腐熟的判定標(biāo)準(zhǔn)[42]。MOREL等[43]建議采用T值來評(píng)價(jià)堆肥的腐熟度。腐熟堆肥的T 值應(yīng)在0.53～0.70[44-45]。酒糟堆肥至發(fā)酵結(jié)束時(shí)，添加復(fù)合菌劑的堆體T值介于0.61～0.67，達(dá)到堆肥腐熟的T值要求，因此，在酒糟堆肥中加入復(fù)合菌劑有利于堆肥腐熟。此時(shí)，1.0%復(fù)合菌劑添加量酒糟堆肥纖維素的降解率比對(duì)照高105.6%。

綜上，本研究從廢棄酒糟中篩選制備的MM2（宛氏擬青霉）、MM6（煙曲霉）、MX8（地衣芽孢桿菌）復(fù)合菌劑對(duì)酒糟堆肥有顯著的促腐熟作用，適合用于酒糟堆肥的工業(yè)化生產(chǎn)。