禽白血病的流行與種群凈化技術(shù)研究進(jìn)展

王慧

（湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南 長沙 410131)

禽白血病（Avian leukosis）是由禽白血病病毒（Avian leukosis vi-rus，ALV）引起的具有傳染性的多種白血病和腫瘤性疾病的統(tǒng)稱，在全球各地均有發(fā)生，感染后大多表現(xiàn)為亞臨床癥狀，比如免疫抑制、生長遲緩、生產(chǎn)性能降低等，少數(shù)表現(xiàn)為不同臟器和組織的腫瘤或血管瘤，嚴(yán)重制約了我國家禽產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。在國務(wù)院頒布的《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中，禽白血病已列入全國中長期動物疫病規(guī)劃防控中優(yōu)先防治的二類禽病之一。鑒于ALV的復(fù)雜性、亞群多樣性及病毒基因組的高變異性，至今仍缺乏有效治療藥物及疫苗，目前主要通過病原檢測淘汰陽性帶毒雞來實(shí)現(xiàn)種群凈化。最早在1988年就有育種公司開始開展禽白血病的凈化工作，但凈化工作進(jìn)展緩慢，隨著大家對凈化工作的重視以及科技進(jìn)步帶來完善的配套設(shè)備，到2000年左右開始有育種公司完成凈化工作。本文從AL的病原學(xué)、流行病學(xué)特征、傳播途徑、凈化方案研究等方面進(jìn)行綜述，以期為禽白血病的流行情況及凈化研究提供依據(jù)。

1 病原學(xué)

禽白血病的感染病原是禽白血病病毒(ALV)，該病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科甲型反轉(zhuǎn)錄病毒屬，為有脂囊膜的反轉(zhuǎn)錄RNA病毒。根據(jù)病毒囊膜糖蛋白序列以及宿主范圍、血清中和試驗(yàn)等，把ALV分為A～K 11個不同亞型，只有A、B、C、D、E和J 6個亞型能夠自然感染雞群，其中A、B、C、D、J、K亞型為外源性ALV，均有致癌性，但在致癌特性和病毒復(fù)制能力上不同，經(jīng)典禽白血病主要是由外源性的A、B和J亞群禽血病病毒引起，J亞群病毒有很強(qiáng)的致病性[1-2]。E、F、G、H和I屬于非致癌性內(nèi)源性病毒[3]，但產(chǎn)生重組后的內(nèi)源性病毒可具有較高的致癌性。2014年，在我國地方雞群體中發(fā)現(xiàn)了一個gp85序列明顯不同于已知現(xiàn)存的所有亞型的新ALV毒株，將其命名為K亞型[4]。歐洲國家流行最廣的亞群是A和B[5]，自從英國首次分離出J亞群ALV以來，其他一些國家也從患雞中分離到該病毒。我國在1999年首次從腫瘤病雞中分離檢出J亞型ALV[3]。近年，我國流行的ALV-J的囊膜基因出現(xiàn)了堿基突變和缺失等變異，但仍保留了與致瘤相關(guān)的E元件序列。不同亞群ALV的重組也時有發(fā)生，重組后的病毒毒力有所改變。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源與傳播途徑

禽白血病的發(fā)生無明顯季節(jié)性，且潛伏期較長，自然條件下主要感染雞，也可以感染火雞以及如野雞、竹雞、鵪鶉等鳥禽[6-7]，在水禽中發(fā)病和感染的報(bào)道比較少見。不同品系的雞對病毒的抵抗力差異明顯，且母雞的發(fā)病率比公雞要高[8]。病雞、帶毒雞和被感染的種蛋、凍精等都是本病的傳染源。病毒廣泛存在于病雞的泄殖腔排泄物、血液、胚胎以及羽毛囊中[9]，帶毒公雞精液里也可檢出。帶毒母雞產(chǎn)下的種蛋和孵化出的后代雛雞以及帶毒公雞的精液等都會帶毒，甚至在出雛時傳染整個雛雞群，導(dǎo)致雛雞的高發(fā)病率和死亡率，感染的蛋雞產(chǎn)蛋量會減少，死亡率高達(dá)20%以上，部分耐受過的雛雞不會產(chǎn)生病毒免疫抗體導(dǎo)致持續(xù)排毒持續(xù)感染[6,9,12]。

ALV主要通過以下兩種途徑進(jìn)行傳播：（1）垂直傳播或先天性傳播。經(jīng)由生殖道或蛋清發(fā)生的傳播以及種系遺傳性發(fā)生的傳播，此為最主要的傳播途徑[10-11]。（2）水平傳播，通過緊密接觸（分泌物、排泄物、血液）發(fā)生的橫向傳播。通常由橫向擴(kuò)散導(dǎo)致ALV感染的臨床癥狀并不會很嚴(yán)重，但這些帶毒雞所產(chǎn)的后代則發(fā)病幾率很大。

2.2 流行情況

20世紀(jì)50年代，我國在甘肅首次發(fā)現(xiàn)禽白血病，到1999年首次在肉種雞腫瘤病雞中分離到ALV-J病毒[13]。直至現(xiàn)在ALV-J仍是主要流行的ALV亞型，對我國家禽業(yè)的發(fā)展構(gòu)成了巨大威脅[14]。據(jù)調(diào)查，我國地方雞種普遍存在ALV感染，不同地方品種感染差異性較大，目前也未采取任何凈化措施[15]。2018年國內(nèi)6個省份幾乎同時暴發(fā)了AL，15～20周齡的繁殖肉雞表現(xiàn)出不同程度的臨床癥狀，有的病雞死亡率達(dá)到15%[16]。2019年～2020年在對山東省棗莊市雞場J亞群禽白血病病毒血清抗體監(jiān)測中顯示雞場普遍存在ALV-J感染，群體陽性率為高達(dá)69.2%[17]。在對福建省種雞J亞群禽白血病的流行調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，福建地區(qū)的種雞場均不同程度感染ALV，ALV-J抗體總陽性率為4.62%[8]。

3 禽白血病的凈化研究

由于ALV的特殊性以及引起的臨床癥狀的復(fù)雜性，至今沒有有效的商品化疫苗和特效治療藥物，控制AL流行的主要措施還是對雞群的完全覆蓋式檢測，及時淘汰陽性雞達(dá)到雞群的完全凈化。目前，在生產(chǎn)實(shí)踐中，AL的防控著重在種雞場的防控和凈化，做好種雞場白血病的凈化工作可以從源頭上切斷病原的傳播。從原種雞場核心群外源性AL凈化、祖代或父母代種雞場AL的防控、健全種雞場繁育與飼養(yǎng)管理制度等方面制定一套切實(shí)可行的凈化方案。

3.1 凈化原則

在AL凈化過程中，建議以這些原則為核心：（1）早期檢測，越早檢測越容易切斷病原傳播源頭，把凈化成本控制在最低；（2）全覆蓋多重復(fù)檢測，選擇多種檢測方式以增加檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；（3）病毒分離是確定陽性的金標(biāo)準(zhǔn)；（4）p27抗原的ELISA檢測是雞種群凈化的核心，因?yàn)樗械腁LV都具有相同的p27抗原，同時也注重血清A B及J抗體的檢測，這兩個指標(biāo)可直接反應(yīng)該雞群感染的禽白血病亞型及水平傳播情況。在范建華等對小群保種地方雞AL凈化措施研究中檢測發(fā)現(xiàn)ALV-J抗體高的地方雞種競達(dá)到59%，A LV-AB高達(dá)25%，蛋清P27抗原高達(dá)62.1%[18]。（5）嚴(yán)格做好陽性雞的淘汰和陰性雞的隔離管理以及雞場的生物安全措施。

3.2 凈化方案研究

近年來，有關(guān)AL的檢測和凈化方案研究報(bào)道很多，可借鑒的相關(guān)資料也很多。由于AL的主要傳播方式為垂直傳播，從母雞傳給小雞，一代一代傳，逐漸放大，因此AL凈化的重點(diǎn)是種禽核心群，是種源凈化，崔治中教授[19]提出根據(jù)中國目前的養(yǎng)殖現(xiàn)狀主要采取以下3種凈化方案，簡單概括為：（1）以病毒分離為主（金標(biāo)準(zhǔn)），主要針對原種雞場核心群；（2）抗原檢測為主，主要針對自繁自養(yǎng)的原種雞場核心群的凈化；（3）病毒分離和抗原檢測結(jié)合，主要針對祖代或父母代種雞場AL的凈化。在實(shí)際生產(chǎn)中，國內(nèi)的地方雞種凈化主要以第3種居多，但還需要結(jié)合禽白血病地區(qū)流行性及品種的差異來優(yōu)化凈化方案，達(dá)到更好的凈化效果。下面，主要參考現(xiàn)有報(bào)道[19-22]的凈化方案總結(jié)了一套針對原種雞場從孵化到留種過程的凈化操作程序。

3.2.1 公母雞核心群初篩

首先對生產(chǎn)性能較好的公母雞進(jìn)行核心群初篩，選擇母雞所產(chǎn)蛋清和公雞精液進(jìn)行p27抗原檢測，淘汰陽性雞。

3.2.2 出殼雛雞胎糞檢測和淘汰陽性雞

在出殼時，逐只采集1日齡雛雞胎糞進(jìn)行p27抗原、ALV-J抗體、ALV-A/B抗體及病毒分離等項(xiàng)目的檢測。同一只母雞所產(chǎn)雛雞中，一旦檢出陽性就應(yīng)該淘汰其他全部雛雞，同時淘汰相對應(yīng)的種母雞。對選留的陰性雛雞，以母雞為單位，將同一母雞的雛雞放于一個籠中隔離飼養(yǎng)，避免橫向傳播，同時也要避免外源性的ALV傳入。

3.2.3 育雛后期病毒分離鑒定和淘汰陽性雞

按育種規(guī)程，對后備雞進(jìn)行篩選后逐只采集泄殖腔棉拭子和全血，進(jìn)行p27抗原、ALV-J抗體、ALV-A/B抗體及病毒分離等項(xiàng)目的檢測，淘汰陽性后備雞。在同一飼養(yǎng)籠中，一旦檢出就應(yīng)淘汰同籠中的其他后備雞。對于選留的后備種雞，可適當(dāng)進(jìn)行合群，維持小群隔離飼養(yǎng)。

3.2.4 留種雞開產(chǎn)初期檢測和淘汰

初產(chǎn)期是雞群ALV排毒高峰期，應(yīng)逐只取初生蛋蛋清；公雞采集精液；其余雞隨即采集血漿。然后，進(jìn)行p27抗原、ALV-J抗體、ALV-A/B抗體及病毒分離等項(xiàng)目的檢測，淘汰陽性種雞。同一小群中，如有一只為陽性，嚴(yán)格上來講應(yīng)該淘汰該群所有雞。

3.2.5 留種前檢測和淘汰

與留種雞開產(chǎn)初檢方案一樣。

3.2.6 種蛋的選留和孵化

經(jīng)過以上五個階段的篩選與監(jiān)控，留下來的種母雞嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)，避免同場其他雞群的橫向傳染，同時每只母雞僅選用1只陰性公雞的精液進(jìn)行授精。按規(guī)定時間留足種蛋，標(biāo)號后置于出雛箱中出雛。

3.2.7 第二世代雞的檢測和淘汰

對經(jīng)以上六個步驟留下來的種雞所產(chǎn)蛋孵育的出殼雛雞，作為凈化后第二世代雞。繼續(xù)進(jìn)行檢測和凈化淘汰，如此往復(fù)循環(huán)進(jìn)行，直至種群達(dá)到完全凈化狀態(tài)。

3.2.8 凈化狀態(tài)的維持及管理

對種雞核心群進(jìn)行凈化后能夠持續(xù)3～4個世代都檢測不出ALV陽性感染雞后，便可轉(zhuǎn)入維持期。在進(jìn)入維持期后，可根據(jù)實(shí)際情況減少檢測頻率。在檢測方法上面，也可以采用比較簡單的檢測胎糞和蛋清的p27抗原，可以省去病毒分離鑒定等技術(shù)要求很高的方法。當(dāng)然，所有的凈化程序都不可硬搬照抄，還需根據(jù)每個地點(diǎn)的實(shí)際情況及經(jīng)驗(yàn)方法，逐漸摸索和成熟。

4 展望

近幾年來國家越來越重視禽白血病的防控工作，相繼出臺了《國家中長期動物疫病防治規(guī)（2012—2020年）》《全國肉雞遺傳改良計(jì)劃（2014—2025）》等計(jì)劃，均對禽白血病提出了凈化要求，目前已有部分大型禽育種公司的核心群基本實(shí)現(xiàn)了種群凈化。因此，我們可以借鑒參考這些成功案例，利用現(xiàn)代先進(jìn)的技術(shù)，制定出適合養(yǎng)殖場實(shí)際情況的凈化方案來實(shí)施凈化工作。但由于我國地方雞種種類繁多，分布面廣，仍然存在散發(fā)流行的現(xiàn)象，并且從未做過系統(tǒng)地凈化，我國種雞群禽白血病的凈化工作仍然任重而道遠(yuǎn)。