六省茶葉樣品敵敵畏殘留情況及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

劉 軍，陳 鑫，劉 騫，程運(yùn)斌，沈 菁

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所/農(nóng)產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)與安全湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢 430064）

敵敵畏是一種廣譜性有機(jī)磷類殺蟲、殺螨劑，具備強(qiáng)烈的熏蒸、觸殺和胃毒作用。敵敵畏已在水稻、小麥、玉米、棉花、葉菜類蔬菜、十字花科蔬菜、葉菜類十字花科蔬菜、甘藍(lán)、青菜、白菜、菜豆、黃瓜、柑橘樹、蘋果樹、梨樹、桃樹、桑樹、茶樹等作物上登記使用［1］。中國(guó)在茶樹上登記使用的敵敵畏制劑多達(dá)56 種，但中國(guó)還未制定敵敵畏在茶葉中的殘留限量。本研究對(duì)浙江省、安徽省、湖北省、江西省、廣東省和貴州省茶葉主產(chǎn)區(qū)開展77.5%敵敵畏乳油在茶葉上的農(nóng)藥殘留試驗(yàn)，分析茶葉（干、鮮）中敵敵畏的殘留行為，并結(jié)合中國(guó)居民的膳食數(shù)據(jù)開展敵敵畏在茶葉上的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)，Waters公司）；CMVC MV 多功能渦旋器（德國(guó)，CMVC 公司）；QS60 全自動(dòng)QuEChERS 凈化儀（?？萍瘓F(tuán)股份有限公司）；TD5Z 離心機(jī)（上海赫田公司）；MS3 旋渦混合器（德國(guó)，IKA 公司）；電子天平（美國(guó)，MET?TLER TOLEDO 公司）；20、50、100、200 和1 000 μL精密移液槍（德國(guó)，Brand 公司）；Milli-Q 型超純水機(jī)（美國(guó)，Millipore 公司）及其他實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。

敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.9%，Dr.Ehrenstorfer 公司）；甲醇（色譜純，J.T.BAKER）；乙腈（色譜純，J.T.BAKER）；乙腈（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）；醋酸（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）；甲酸（色譜純，J.T.BAKER）；氨水（色譜純，上海阿拉?。?；高純水（Milli-Q 型超純水機(jī)制備）。

1.2 田間試驗(yàn)

按照《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》［2］和《農(nóng)藥登記殘留試驗(yàn)區(qū)域指南》［3］的要求，選擇浙江省、安徽省、湖北省、江西省、廣東省和貴州省六省開展77.5%敵敵畏乳油在茶葉上的殘留試驗(yàn)。設(shè)計(jì)2 個(gè)施藥劑量，即推薦施藥劑量813.75 ga.i./hm2和1.5 倍推薦施藥劑量1 220.63 ga.i./hm2，施藥次數(shù)設(shè)為2 次和3 次，施藥間隔7 d，每種處理設(shè)3 次重復(fù)，每個(gè)小區(qū)面積為30 m2。每種處理距離最后一次施藥5、7和10 d 后采集鮮茶葉和干茶葉樣本。每個(gè)小區(qū)內(nèi)隨機(jī)選取至少12 個(gè)點(diǎn)位采集生長(zhǎng)正常、無病害的鮮茶葉樣品2 份。其中，1 份樣品不少于1 kg，制作鮮茶葉樣品，另1 份樣品不少于2 kg，制作干茶葉樣品。同時(shí)開展空白對(duì)照試驗(yàn)。

1.3 殘留分析方法

1.3.1 樣品前處理 將茶葉樣品（鮮、干）用食物攪拌機(jī)加干冰打碎成粉狀，準(zhǔn)確稱量2 g 茶葉樣品（鮮、干）于50 mL 離心管。加入10 mL 水渦旋混勻，靜置30 min，再加入15 mL 乙腈-醋酸混合溶液（99∶1，體積比）及提取鹽包和陶瓷均質(zhì)子，劇烈振蕩1 min，以4 200 r/min 的速度離心5 min。吸取上清液1 mL 至QS60 全自動(dòng)QuEChERS 凈化儀過m-PFC CP 凈化柱，最后將凈化液過0.22 μm 濾膜于2 mL 進(jìn)樣小瓶中，待檢測(cè)［4］。

1.3.2 檢測(cè)條件 儀器為ACQUITY UPLC Xevo TQ高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀；色譜柱為ACQUI?TY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，粒徑1.7 μm）；柱溫為40 ℃；流動(dòng)相A 相為0.01%甲酸+0.05%氨水水溶液，B 相為甲醇；流速為0.3 mL/min；進(jìn)樣量為1 μL。梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

離子源為電噴霧（ESI）離子源；掃描方式為正離子掃描；檢測(cè)方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式；毛細(xì)管電壓為3.20 kV；離子源溫度為150 ℃；錐孔氣流速為20 L/h；脫溶劑氣溫度為350 ℃；脫溶劑氣流速為650 L/h。

1.4 膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法

根據(jù)原衛(wèi)生部2002 年發(fā)布的《中國(guó)不同人群消費(fèi)膳食分組食譜》和權(quán)威參考資料中的中國(guó)居民膳食結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，結(jié)合農(nóng)藥殘留試驗(yàn)評(píng)估獲取的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值和已制定公布的最大殘留限量（MRLs），計(jì)算敵敵畏的國(guó)家估算每日攝入量（NEDI，mg）［5-8］，計(jì)算公式如下。

式中，STMRi表示農(nóng)藥在某食品中的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值（mg/kg）；STMR-Pi表示加工因子校正的規(guī)范殘留試驗(yàn)中值（mg/kg）；Fi表示一般人群某食品的消費(fèi)量（kg）。

然后計(jì)算膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)概率（RQ）。

式中，ADI表示農(nóng)藥每日允許攝入量（mg/kg bw）；bw 表示一般人群平均體重（kg），中國(guó)一般人群平均體重按63 kg計(jì)算。

當(dāng)RQ≤100%時(shí)，表示長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)可以接受，RQ值越小表示風(fēng)險(xiǎn)越低；當(dāng)RQ>100%時(shí)，表示長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)不可接受，RQ值越大表示風(fēng)險(xiǎn)越高。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液分別用鮮茶葉空白基質(zhì)和干茶葉空白基質(zhì)稀釋配得0.001、0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200 mg/L 系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在上述儀器條件下測(cè)定，以敵敵畏基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度（c）與對(duì)應(yīng)定量離子對(duì)峰面積（A）作標(biāo)準(zhǔn)曲線。敵敵畏的鮮茶葉基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液曲線方程為，A=3.67×105c+16，相關(guān)系數(shù)為r= 0.999 6；敵敵畏的干茶葉基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液曲線方程為，A=3.35×105c+158，相關(guān)系數(shù)為r= 0.999 5。鮮茶葉和干茶葉中敵敵畏的最小檢出量分別為為2.0×10-4和2.1×10-4ng（3 倍信噪比計(jì)算）。

2.2 正確度與精密度

分別在空白鮮茶葉和干茶葉樣品中添加敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)溶液，使茶葉中敵敵畏的濃度分別為0.01、0.05、0.5 mg/kg，每個(gè)添加水平重復(fù)5 次。鮮茶葉和干茶葉樣品正確度和精密度結(jié)果見表2 和表3。鮮茶葉中敵敵畏的回收率（正確度）在63%～82%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，即精密度）在2%～10%，干茶葉中敵敵畏的回收率在67%～96%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2%～9%，鮮茶葉和干茶葉的結(jié)果無顯著差異，均符合NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》的要求。根據(jù)添加回收率試驗(yàn)結(jié)果，鮮茶葉和干茶葉中敵敵畏的方法定量限均為0.01 mg/kg，優(yōu)于已發(fā)布標(biāo)準(zhǔn)方法的定量限。

表2 方法的正確度和精密度（鮮茶葉）

表3 方法的正確度和精密度（干茶葉）

2.3 最終殘留量

鮮茶葉樣品的殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表4。由表4 可知，采收間隔期為5 d 的鮮茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.017 mg/kg；采收間隔期為7 d 的鮮茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.014 mg/kg；采收間隔期為10 d 的鮮茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.010 mg/kg。

表4 鮮茶葉樣品中敵敵畏殘留數(shù)據(jù)

干茶葉樣品的殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表5。由表5 可見，采收間隔期為5 d 的干茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.024 mg/kg；采收間隔期為7 d 的干茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.022 mg/kg；采收間隔期為10 d 的干茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.025 mg/kg。

表5 干茶葉樣品中敵敵畏殘留數(shù)據(jù)

不同采收間隔期采集的鮮茶葉和干茶葉樣品的殘留試驗(yàn)中值均不超過定量限（0.01 mg/kg）。鮮茶葉樣品中殘留最大值隨著采收間隔期的延長(zhǎng)呈降低趨勢(shì)，而干茶葉樣品中殘留最大值無顯著性差異。此外，鮮茶葉樣品中殘留最大值要低于干茶葉樣品中殘留最大值，說明干茶葉的制作過程對(duì)敵敵畏有一定的濃縮作用，需要引起關(guān)注。

2.4 膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果

根據(jù)查詢的MRL值及殘留試驗(yàn)中值，建立了敵敵畏在茶葉上殘留的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型，具體見表6。結(jié)合中國(guó)農(nóng)藥登記情況和中國(guó)居民的人均膳食結(jié)構(gòu)，普通人群敵敵畏的國(guó)家估算每日攝入量是0.177 7 mg，風(fēng)險(xiǎn)概率（RQ）為71.1%，通常不會(huì)對(duì)一般人群健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。

表6 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估計(jì)算

3 小結(jié)

本研究建立了適用于鮮茶葉和干茶葉中敵敵畏殘留分析的快速檢測(cè)方法，定量限為0.01 mg/kg，正確度和精密度也均能夠滿足農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留分析的要求。2019 年在浙江省紹興市、安徽省黃山市、湖北省武漢市、江西省九江市、廣東省湛江市、貴州省安順市6 地茶葉中敵敵畏殘留試驗(yàn)結(jié)果表明，不同采收間隔期采集的鮮茶葉和干茶葉樣品的殘留試驗(yàn)中值均不超過定量限，鮮茶葉樣品中的最大殘留量低于干茶葉樣品，茶葉加工中敵敵畏的殘留存在一定的濃縮效應(yīng)。結(jié)合茶葉上敵敵畏殘留試驗(yàn)數(shù)據(jù)和中國(guó)居民膳食數(shù)據(jù)開展的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果表明，茶葉中敵敵畏的膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)概率為71.1%，通常不會(huì)對(duì)一般人群健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。推薦77.5%敵敵畏乳油用于茶樹防治食葉害蟲時(shí)，最大施藥劑量為813.75 ga.i./hm2，最多施藥3 次，安全間隔期設(shè)為7 d。中國(guó)尚未制定茶葉中敵敵畏殘留的最大限量值。國(guó)際上，僅歐盟和日本規(guī)定了茶葉中敵敵畏的最大殘留限量值，分別為0.02、0.10 mg/kg。基于研究結(jié)果，建議推薦0.05 mg/kg 作為中國(guó)茶葉中敵敵畏殘留的最大限量值。