基于《中華人民共和國藥典》的奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香的質(zhì)量分析與評價△

馮劍，侯文成，陳蘭，陳細欽，楊云，劉洋洋*，魏建和，2*

1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所海南分所/海南省南藥資源保護與開發(fā)重點實驗室/國家中醫(yī)藥管理局沉香可持續(xù)利用重點研究室，海南 ?？?570311；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所/中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點實驗室/瀕危藥材繁育國家工程實驗室，北京 100193

國產(chǎn)藥用沉香為瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg含有樹脂的木材，作為藥材始載于漢魏時期《名醫(yī)別錄》，列為上品[1]，是我國名貴藥材和香料?！吨腥A人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版（一部）記載沉香具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效[2]。通常健康的白木香樹自然情況下不產(chǎn)沉香，只有受到真菌侵染、物理或化學(xué)等外界傷害誘導(dǎo)其發(fā)生防御反應(yīng)而產(chǎn)生防御性物質(zhì)，如倍半萜和2?（2?苯乙基）色酮類化合物，這些防御性物質(zhì)參與形成樹脂以抵御外界傷害對白木香的進一步損傷，最終形成沉香[3?4]。

“奇楠”名稱最早見于明代《星槎勝覽》[5]，又名伽?、棋楠、奇南等。據(jù)記載，“奇楠”沉香的外觀性狀呈蟠結(jié)，屑成團，主產(chǎn)于東南亞國家[6]，因其獨特的氣味和性狀可與普通沉香進行區(qū)分。近年來，香農(nóng)們在中國廣東和海南等地發(fā)現(xiàn)了一類奇楠沉香的種質(zhì)，將其芽條嫁接在普通白木香樹上4 年后，采用鉆孔法處理1～2 年即可結(jié)出高樹脂含量的沉香。因所結(jié)沉香香味和性狀與記載的“奇楠”沉香相似，該奇楠種質(zhì)所產(chǎn)沉香在中國沉香界被認為即是“奇楠”沉香，已在廣東和海南等地大量種植。

已有研究發(fā)現(xiàn)，奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香的化學(xué)成分與普通沉香存在顯著差異[7?8]。但截至目前，奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香是否能作為藥用沉香尚無研究報道。為此，基于《中國藥典》2020 年版沉香標(biāo)準(zhǔn)，本研究對廣東和海南采集得到的10 批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香開展性狀檢查，顯微鑒別，薄層色譜鑒別，理化顯色反應(yīng)鑒別，浸出物、沉香四醇含量測定及特征圖譜分析。旨在驗證市售奇楠種質(zhì)所產(chǎn)沉香是否符合藥用沉香標(biāo)準(zhǔn)，以及為其能否作為藥材在臨床上使用提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 樣品

10 批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品，4 批采自海南，6 批采自廣東。同時取3 批普通白木香種質(zhì)產(chǎn)沉香（簡稱普通沉香）樣品作為對比，見表1。10 批次奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所劉洋洋研究員鑒定，均為含有樹脂的木材，且課題組采用DNA 條形碼技術(shù)鑒定其基原植物是白木香Aquilaria sinensis（Lour.）Gilg。憑證標(biāo)本保存于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所沉香鑒定中心標(biāo)本館；沉香對照藥材（批號：121222?201203）購自中國食品藥品檢定研究院。

表1 沉香樣品信息

1.2 試劑

對照品沉香四醇（批號：111980?201601，純度：96.8%）購自中國食品藥品檢定研究院；GF254薄層色譜板（德國Merck 公司）；乙腈為色譜級（美國Fisher 公司）；香草醛、鹽酸、甲酸、水合氯醛、三氯甲烷、乙醚、無水乙醇和95%乙醇等均為國產(chǎn)分析級。

1.3 儀器

1525 型高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；Eclipse 型生物顯微鏡（日本Nikon 公司）；LE104E型電子天平（瑞士Mettler?Toledo公司）；JY02S型紫外分析儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）。

2 方法與結(jié)果

參照《中國藥典》2020 版（一部）沉香標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法[2]，分別對13 批沉香樣品開展性狀檢查，顯微鑒別，薄層色譜鑒別，理化顯色反應(yīng)鑒別，浸出物、沉香四醇含量測定及特征圖譜分析。

2.1 性狀檢查

奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香和普通沉香外觀性狀見圖1。10 批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品外觀形態(tài)基本一致，均呈不規(guī)則的條、片塊狀，表面呈淺黃褐色至黑褐色，凹凸不平，可見縱向黑褐色、棕褐色、黃褐色或棕黃色條紋交替排列，偶見黃綠色，致密，密布有黑褐色、棕褐色或黃褐色樹脂斑紋；側(cè)邊有孔洞，對稱分布，色較深；斷面樹脂明顯，質(zhì)地較堅硬，易切割，刀切頓感明顯，糯軟，有光澤，油性足或顯油性；氣清香濃郁，味苦、辣或微辣，嚼之有麻舌感。奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香與普通沉香的性狀“孔洞、凹窩表面多呈腐木狀、質(zhì)地堅實、氣芳香、味苦”相比不一致。可見，奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香性狀與《中國藥典》2020 年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的沉香性狀不完全一致。

圖1 奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香和普通沉香外觀性狀

2.2 顯微鑒別

沉香樣品經(jīng)水浸泡軟化，用刀片切成薄片，置于載玻片上，滴加水合氯醛，蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察，奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香和普通沉香顯微結(jié)構(gòu)特征見圖2。13 批樣品均可觀察到射線、導(dǎo)管和木間韌皮部等顯微結(jié)構(gòu)。木間韌皮部扁長橢圓狀、條帶狀或“島”狀，數(shù)量多，細胞壁薄，內(nèi)填充有棕色或黃棕色樹脂。射線寬至1～2 列細胞，充滿樹脂，常與木間韌皮部相交。導(dǎo)管類圓形或多角形，單個散在或多個復(fù)合聚集。奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香的顯微結(jié)構(gòu)特征與《中國藥典》2020 年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的沉香顯微結(jié)構(gòu)特征一致。

2.3 薄層色譜鑒別

取沉香樣品粉末0.5 g，加乙醚30 mL，超聲處理60 min，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲烷2 mL使其溶解，作為供試品溶液。另取沉香對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。分別吸取樣品溶液和沉香對照藥材溶液各10 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層色譜板上，以三氯甲烷?乙醚（10∶1）為展開劑展開，取出，晾干，在紫外燈365、254 nm下檢視，結(jié)果見圖3。3 批普通沉香和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上的熒光斑點一致，但10 批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品色譜斑點與3 批普通沉香和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上的熒光斑點不一致。

2.4 理化顯色反應(yīng)鑒別

取奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品和普通沉香醇溶性浸出物進行微量升華，所有樣品均得到黃褐色油狀物，較多，香氣濃郁。于油狀物上加鹽酸1滴與香草醛少量，再滴加乙醇1～2滴，顯色反應(yīng)后所有樣品的顏色逐漸顯櫻紅色，久置后顏色加深，結(jié)果見表2?？梢姡骈N質(zhì)產(chǎn)沉香和普通沉香的理化顯色反應(yīng)與《中國藥典》2020年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的顯色反應(yīng)結(jié)果一致。

2.5 浸出物

精確稱取沉香樣品粉末2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入95%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，冷卻后再稱定質(zhì)量，用95%乙醇補足減失質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取濾液25 mL，置恒重的蒸發(fā)皿中，水浴干燥，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量，結(jié)果見表2。10批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品醇溶性浸出物質(zhì)量分數(shù)均顯著高于3 批普通沉香，且遠高于《中國藥典》2020 年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的浸出物不低于10%的規(guī)定。

表2 奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香和普通沉香醇溶性浸出物、沉香四醇質(zhì)量分數(shù)及理化顯色反應(yīng)現(xiàn)象（n=3） %

2.6 沉香四醇含量及特征圖譜測定

精密稱取沉香樣品粉末0.2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入95%乙醇10 mL，稱定質(zhì)量，浸泡30 min，超聲處理1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用95%乙醇補足減失質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液濾過，作為供試品溶液。取沉香對照藥材約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入95%乙醇10 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用95%乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液濾過，作為對照藥材參照物溶液。取沉香四醇對照品適量，精密稱定，加95%乙醇制成60 μg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。10 批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品沉香四醇質(zhì)量分數(shù)為0.01%～0.03%，3 批普通沉香樣品沉香四醇質(zhì)量分數(shù)分別為0.62%、0.17%和0.53%（表2）?？梢?，奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品中沉香四醇含量均顯著低于《中國藥典》2020 年版中沉香四醇含量（不低于0.1%）標(biāo)準(zhǔn)，而3 批普通沉香樣品中沉香四醇質(zhì)量分數(shù)均高于0.1%。此外，奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品特征圖譜中僅峰4 與普通沉香和對照藥材色譜一致，其余峰不一致，3 批普通沉香樣品特征圖譜均與對照藥材色譜圖的6 個特征峰一致，見圖4。

圖4 奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香和普通沉香特征圖譜

3 討論

本研究基于《中國藥典》2020年版對采集于廣東和海南的10批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品的質(zhì)量進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香顯微結(jié)構(gòu)特征和理化顯色反應(yīng)符合規(guī)定，醇溶性浸出物質(zhì)量分數(shù)為32.94%～56.69%，均顯著高于《中國藥典》2020年版標(biāo)準(zhǔn)要求；但其性狀、薄層色譜鑒別、特征圖譜均與普通沉香和對照藥材不相同，且沉香四醇質(zhì)量分數(shù)僅為0.01%～0.03%，顯著低于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的沉香四醇含量要求?？梢姡骈N質(zhì)產(chǎn)沉香的質(zhì)量不符合《中國藥典》2020 年版標(biāo)準(zhǔn)，但3 批普通沉香均符合標(biāo)準(zhǔn)，因此，目前奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香尚不能作為沉香藥材在臨床上使用。

從奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香樣品的性狀、顯微和浸出物可以看出，其油脂豐富，搓之粘手，無朽木狀，氣味獨特。本研究中10 批奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香的醇溶性浸出物質(zhì)量分數(shù)均超過30%，可能與其富含2?[2?(4?甲氧基苯)乙基]色酮和2?(2?苯乙基)色酮有關(guān)[8?10]，而香味獨特可能歸因于其含有豐富的與香味相關(guān)的愈創(chuàng)木烷型和桉烷型倍半萜類化合物[8]。此外，《增訂偽藥條辨》記載：“削之自卷，咀之柔韌者，謂之黃蠟沉香，尤難得，此即伽楠香也”[11]，謝宗萬[6]在《中藥材品種論述》中通過考證沉香也認為黃蠟沉就是伽?香。但本研究中奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香是否為古之黃蠟沉還有待深入研究。

綜上，近年在中國廣東和海南等地發(fā)現(xiàn)的奇楠種質(zhì)產(chǎn)沉香質(zhì)量不符合《中國藥典》2020 年版沉香的要求，但因其香味獨特、樹脂含量高等品質(zhì)特點，還有待對其應(yīng)用及來源開展深入研究與挖掘。

致謝：部分實驗樣品由覃武業(yè)、溫鎮(zhèn)先先生提供。