病原微生物檢驗(yàn)中分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用效果研究

關(guān)桂英

(山東省聊城市莘縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科 山東 聊城 252400)

當(dāng)下，隨科學(xué)技術(shù)水平的提升，生物科學(xué)技術(shù)得到大力發(fā)展，使得人們對(duì)微生物世界的認(rèn)知程度不斷加深，也逐漸了解到人體健康與微生物間的聯(lián)系，從而致使臨床醫(yī)學(xué)對(duì)微生物檢驗(yàn)工作越發(fā)重視。當(dāng)前，微生物檢驗(yàn)應(yīng)用越發(fā)廣泛，其在諸多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。病原微生物可是引發(fā)傳染性疾病的重要原因，快速、精準(zhǔn)的檢驗(yàn)出病原微生物可對(duì)傳染病防治工作提供有力支持。近些年，隨分子生物學(xué)技術(shù)得越發(fā)成熟，使得病原微生物檢驗(yàn)技術(shù)得到長(zhǎng)足發(fā)展，病原微生物檢驗(yàn)的效用也得以充分彰顯[1]。本次研究對(duì)病原微生物檢驗(yàn)過程中應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)的效果做對(duì)比分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取于本院接受病原微生物檢驗(yàn)的患者76例(2020年2月—2021年2月)，通過抽簽方式均分患者，對(duì)照組、觀察組各38例。對(duì)照組男女比例21：17，年齡范圍23-57(38.72±2.84)歲。觀察組男女比例22：16，年齡范圍24-56(39.03±3.15)歲。兩組一般資料基本相同(P>0.05)，可比較。本次研究已獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)知情并自愿配合本次研究，已簽署知情同意書；(2)無溝通障礙。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患有嚴(yán)重精神疾病者；(2)語言功能障礙者；(3)缺乏完整臨床資料者；(4)依從性低者；(5)拒絕配合本次研究者。

1.2 方法

對(duì)照組、觀察組分別運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄PCR檢驗(yàn)與熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢驗(yàn)，方法如下：將樣本肝素取出、抗凝，分離出樣本中的核細(xì)胞，制備RNA，使用TRIzo1一步法對(duì)總RNA進(jìn)行提取，對(duì)abL基因純化并將其克隆至PUCm-載體內(nèi)。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后，依次開展篩選-擴(kuò)增-提取-鑒定-純化-檢測(cè)-鑒定等環(huán)節(jié)，對(duì)重組質(zhì)粒展開定量，依據(jù)阿伏伽德羅常數(shù)與分子量轉(zhuǎn)化為分子拷貝數(shù)。稀釋10倍109copy/L，用其制定陽性模板，隨后將其放于溫度為-20℃左右的冰箱內(nèi)儲(chǔ)存?zhèn)溆茫褂肨aqMan探針于在QR-pcr儀上展開檢測(cè)。

能量循環(huán)條件：①預(yù)變形條件：95℃下15min；②変形條件：96℃下30s；③退火條件：52℃下1min，連續(xù)循環(huán)15次；④延伸條件：72℃下1min。隨后依據(jù)臨床樣本檢驗(yàn)試劑需求展開第二、三循環(huán)以及最后延伸，結(jié)束后，將其于4℃條件下儲(chǔ)存50min。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)記錄比較兩組病原微生物陽性檢驗(yàn)情況。

(2)向兩組患者分發(fā)本院自行設(shè)計(jì)的患者滿意度調(diào)查問卷，統(tǒng)計(jì)分析兩組患者病原微生物檢驗(yàn)滿意情況，問卷滿分100分，95分以上為非常滿意，80-89分為一般滿意，80分以下為不滿意。滿意率={非常滿意(例)+一般滿意(例)}/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS24.0，計(jì)數(shù)資料表示方式為數(shù)(n)和率(%)，組間比較利用X2檢驗(yàn)，P<0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較兩組病原微生物陽性檢驗(yàn)率

觀察組病原微生物陽性檢驗(yàn)率(76.32%)明顯高于對(duì)照組(52.63%)(P<0.05)。見表1。

表1 兩組病原微生物陽性檢驗(yàn)率比較[n(%)]

2.2 比較兩組患者病原微生物檢驗(yàn)滿意率

觀察組病原微生物檢驗(yàn)滿意率(97.37%)明顯高于對(duì)照組(81.58%)(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者病原微生物檢驗(yàn)滿意率比較[n(%)]

3 討論

從嚴(yán)格意義上而言，分子生物學(xué)技術(shù)是基礎(chǔ)性技術(shù)學(xué)科的一種，該學(xué)科主要研究?jī)?nèi)容為核糖核與脫氧核糖核酸，并且該學(xué)科還更深層次對(duì)生物大分子核酸以及相關(guān)表達(dá)物蛋白質(zhì)的功能、結(jié)構(gòu)及關(guān)系等展開探究，從微生物檢驗(yàn)層面而言，是，分子生物學(xué)技術(shù)是新型檢驗(yàn)方式的一種，使用此技術(shù)可進(jìn)一步擴(kuò)大微生物檢驗(yàn)范圍，并且可以有效提升微生物檢驗(yàn)的精確性。

近年來，經(jīng)大量研究、實(shí)踐證實(shí)，將分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用于微生物檢驗(yàn)發(fā)揮良好效果，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中備受關(guān)注。當(dāng)前，我國(guó)生命醫(yī)學(xué)技術(shù)得到長(zhǎng)足發(fā)展，而生物學(xué)技術(shù)就是其發(fā)展以及進(jìn)步的關(guān)鍵技術(shù)。當(dāng)前，臨床檢驗(yàn)對(duì)生物科學(xué)技術(shù)應(yīng)用越發(fā)廣泛，并在應(yīng)用、發(fā)展中產(chǎn)生一門全新學(xué)科—分子微生物學(xué)[2]。隨分子微生物學(xué)的發(fā)展以及在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用，使得人們對(duì)微生物的認(rèn)知程度不斷加深，其逐漸由以往研究微生物外部結(jié)構(gòu)向研究微生物內(nèi)部基因結(jié)構(gòu)方向發(fā)展，隨之微生物檢驗(yàn)也從以往的生化免疫檢驗(yàn)逐漸向基因水平發(fā)展。當(dāng)前，臨床病原微生物檢驗(yàn)中已廣泛對(duì)分子生物學(xué)技術(shù)予以應(yīng)用，充分改善了以往病原微生物檢驗(yàn)工作中存在的不足之處，大大提升檢驗(yàn)工作的精準(zhǔn)性，并且還是檢驗(yàn)效率得到有效提升[3]。當(dāng)前，分子生物學(xué)技術(shù)主要包含以下幾個(gè)類型，分別為聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、基因芯片技術(shù)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)結(jié)合、蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)以及生物傳感器技術(shù)。聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)：聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)指于同一聚合酶鏈反應(yīng)體系下，將多對(duì)特異性引物融入其中，從而在一定程度上促使相同模板不同區(qū)域或多個(gè)DNA模板將目的DNA片段予以擴(kuò)增。我國(guó)互聯(lián)網(wǎng)信息技術(shù)迅猛發(fā)展，使得臨床病原菌檢驗(yàn)也不斷朝向高度自動(dòng)化、便捷化方向發(fā)展，在自動(dòng)化儀器大力運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)上，在生物芯片技術(shù)中添加病原菌診斷、鑒定等方面，從而使臨床病原菌檢驗(yàn)工作得以有效優(yōu)化，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)病原微生物檢驗(yàn)工作高效、高質(zhì)、經(jīng)濟(jì)達(dá)到統(tǒng)一。通過多學(xué)科的融合、交叉，檢驗(yàn)技術(shù)越發(fā)豐富，特別隨生命科學(xué)的進(jìn)步，使得聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)得到充分發(fā)展，該技術(shù)的應(yīng)用也變得越發(fā)多元。在此環(huán)境背景下，以聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)為基礎(chǔ)，出現(xiàn)大量相關(guān)衍生技術(shù)，如多重PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)等，此類技術(shù)在病原微生物檢驗(yàn)工作得到廣泛運(yùn)用[4]?；蛐酒夹g(shù)：基因芯片技術(shù)包含的領(lǐng)域較多，此技術(shù)與眾多學(xué)科相交叉，基因芯片技術(shù)的出現(xiàn)及應(yīng)用為醫(yī)學(xué)發(fā)展帶來全新的方向與契機(jī)。目前，給予基因芯片技術(shù)的發(fā)展，使得人類基因組計(jì)劃得以有效推進(jìn)，基因芯片技術(shù)學(xué)科交叉性較強(qiáng)、綜合性較高，此技術(shù)也被稱為生物芯片技術(shù)與DNA芯片技術(shù)，在研究、發(fā)展此技術(shù)時(shí)，需不斷結(jié)合多種科學(xué)技術(shù)研究，從而推動(dòng)其發(fā)展。從當(dāng)前實(shí)際應(yīng)用角度而言，此技術(shù)在病原微生物檢驗(yàn)中發(fā)展出重要作用[5]。當(dāng)前，生物傳感器技術(shù)被應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域中，如生物工程、海洋探測(cè)、醫(yī)療診斷、宇宙開發(fā)、工業(yè)生產(chǎn)、環(huán)境保護(hù)等。近幾年，隨醫(yī)療診斷對(duì)生物傳感器技術(shù)應(yīng)用程度的加深，此技術(shù)本身具備的高、精、尖特性使病原微生物檢驗(yàn)得到長(zhǎng)足發(fā)展[7]。

綜上所述，在病原微生物檢驗(yàn)期間，應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)效果理想，可有效提升病原微生物陽性檢出率，增加精準(zhǔn)度，提高患者滿意度，值得進(jìn)一步推廣。