安順市煙草根結(jié)線蟲病防控藥劑室內(nèi)毒力測定

代 飛 代惠娟李沛柏 張 權(quán) 白茂軍 陳恩發(fā)

（1貴州省煙草公司安順市公司，貴州安順 561000；2河北中煙工業(yè)有限責任公司，河北石家莊 050000；3貴州省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所，貴州貴陽 550009）

煙草根結(jié)線蟲病作為世界性病害之一，在世界各煙區(qū)均有分布。煙草根結(jié)線蟲主要寄生于烤煙根系，造成根系吸收養(yǎng)分受阻，導致煙株葉片葉尖周圍產(chǎn)生焦尖焦邊，降低煙株對其他病害的抵抗力，形成復合感染，直至煙株死亡，降低煙草產(chǎn)量和質(zhì)量，對煙區(qū)種煙農(nóng)戶造成了重大經(jīng)濟損失，輕的損失30%左右，重的造成絕收。近年來，煙草根結(jié)線蟲病已逐漸上升為貴州煙區(qū)的主要病害之一。目前，在煙草根結(jié)線蟲病防控研究方面，大多以直接在田間采用化學藥劑防治的方式開展試驗，這些化學藥劑中有許多是高毒性、高殘留農(nóng)藥，施用后會對煙地及環(huán)境造成嚴重污染，長此以往，還會對人體產(chǎn)生負面影響[1-5]。在煙草根結(jié)線蟲病防治方面，目前雖然也有報道，但各種處理方式很不統(tǒng)一，毒力測定也主要是對田間防治的一種印證。本研究針對安順市實際，先在室內(nèi)對煙草根結(jié)線蟲病防控藥劑進行測定與篩選，主要目的是事前對高污染、高殘留、衰減期過長、對環(huán)境不友好的農(nóng)藥進行篩選，遴選適宜的藥劑用于病蟲害防治，避免此類污染再次發(fā)生，為大田用藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試線蟲為煙草根結(jié)線蟲，從安順市西秀區(qū)試驗地云煙85煙株根結(jié)樣品中分離而得。

供試藥劑有90%阿維菌素原粉（華北制藥愛諾股份有限公司生產(chǎn)）、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（華北制藥愛諾股份有限公司生產(chǎn)）、81.7%噻唑膦原油（壽光市申達化學工業(yè)有限公司生產(chǎn)）、90%丁硫克百威原油（冀州市凱明農(nóng)藥有限公司提供）、滅線磷（德國Dr公司生產(chǎn)）、硫線磷（FMC公司提供）。

試驗藥劑母液的配制方法：用90份99.5%丙酮溶解2份原藥，然后加8份Tween-20乳化。將25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、90%阿維菌素原粉、滅線磷、硫線磷分別配制成 25、50、100、200、400 mg/L 梯度，81.7%噻唑膦原油配制成 10、20、40、80、160 mg/L梯度，90%丁硫克百威原油配制成 100、200、400、800、1 600 mg/L梯度，備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 根結(jié)線蟲二齡幼蟲懸浮液的制備。取有大量根結(jié)的烤煙根系，用自來水輕輕沖洗干凈，將病根剪成5 cm小段，在1%次氯酸鈉溶液中漂洗約4 min，用竹片輕取煙根上表面組織，利用200目與500目線蟲篩收集線蟲卵，放入直徑8 cm的小培養(yǎng)皿內(nèi)，加入少量無菌水，在25℃恒溫箱中孵化3～4 d，收集二齡幼蟲，并加入無菌水將其配制成濃度500條/mL左右的懸浮液備用。

1.2.2 室內(nèi)毒力測定方法。取96孔細胞培養(yǎng)板，每孔加入0.15 mL線蟲懸浮液，每列為1個濃度處理，重復3次，使25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、90%阿維菌素原粉、滅線磷、硫線磷在孔板中的濃度均分別為 25、50、100、200、400 mg/L，81.7%噻唑膦原油濃度分別為 10、20、40、80、160 mg/L，90%丁硫克百威濃度分別為 100、200、400、800、1 600 mg/L。

1.3 調(diào)查統(tǒng)計

根結(jié)線蟲的死亡可從線蟲形態(tài)做出判斷，死亡的線蟲身體僵直或有呈角度的彎折，未死亡的根結(jié)線蟲蟲體有呈弧度的彎折。若從根結(jié)線蟲的形態(tài)無法明確判斷其死亡與否，48 h后可采用針刺法判斷。計算死亡率、校正死亡率、LC50及LC95，用DPS軟件計算出藥劑的毒力回歸方程、LC50和LC95置信限，用SPSS軟件計算差異顯著性[6-8]。計算公式如下：

死亡率（%）=死亡二齡線蟲數(shù)/處理二齡線蟲數(shù)×100；

校正死亡率（%）=（處理線蟲死亡率-對照線蟲死亡率）/（1-對照線蟲死亡率）×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 6種農(nóng)藥不同濃度處理對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲校正死亡率的影響

由表1可知，無論是24 h后還是48 h后，煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的校正死亡率均呈現(xiàn)出一定的規(guī)律，即隨著每種農(nóng)藥濃度的增加，校正死亡率均呈上升趨勢；不同濃度梯度處理間存在差距，最大濃度與最小濃度之間差異極顯著。24 h校正死亡率與48 h校正死亡率存在差異，總體表現(xiàn)為48 h校正死亡率略高于24 h校正死亡率，但基本無顯著性差異，其中25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和90%阿維菌素原粉出現(xiàn)48 h后25 mg/L和50 mg/L濃度的校正死亡率較24 h低的現(xiàn)象，原因是根結(jié)線蟲假死，于48 h后復蘇。從6種藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的抑制作用分析，81.7%噻唑膦原油以較低的濃度就能較好地抑制煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲，而90%丁硫克百威原油需要很大的濃度才能抑制，總體抑制活力大小表現(xiàn)為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。因此，用量少、成本低、效果佳、田間易操作成為首選方案之一。

表1 6種藥劑不同濃度對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的影響

2.2 6種農(nóng)藥不同濃度處理對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲毒力測定運算結(jié)果分析

由表2可知，6種藥劑對根結(jié)線蟲二齡幼蟲均有一定的毒力作用，藥后48 h對二齡幼蟲的毒力有所提高。對6種藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的毒力顯著性分析表明，各處理間均存在差異，81.7%噻唑膦原油24 h LC50為29.13 mg/L，對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲毒力最強；90%阿維菌素原粉、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽及硫線磷對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的毒力低于81.7%噻唑膦原油，優(yōu)于其他供試藥劑，三者LC50相差甚微，未達顯著水平；滅線磷及90%丁硫克百威原油毒力相對較低。24 h LC95毒力略有差異，但總體趨勢基本一致。81.7%噻唑膦原油的48 h LC50為21.34 mg/L，與24 h有少許差別，對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲毒力最強；48 h LC95毒力雖然略有差異，但是總體趨勢也基本與24 h LC50一致。從各處理的毒力分析得出，6種農(nóng)藥處理的毒力大小排序為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。

表2 6種藥劑對根結(jié)線蟲二齡幼蟲毒力測定運算結(jié)果分析

3 結(jié)論與討論

（1）通過對6種農(nóng)藥不同濃度處理對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的室內(nèi)毒力測定，各個藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲均有抑制作用，與張勝博等[9]、王 軍等[10]、黃 闊等[11]的研究相類似，并隨著每種農(nóng)藥濃度增加、時間的延長，煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲校正死亡率均呈現(xiàn)上升趨勢，與張映杰等[12]、王 軍等[13]、孔凡玉等[14]的結(jié)果略有不同，但24 h、48 h的校正死亡率之間未達顯著水平。6種農(nóng)藥對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲抑制活力大小表現(xiàn)為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。

（2）6種藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的毒力測定結(jié)果表明，部分藥劑的毒力在濃度及時段上達顯著或極顯著差異，總體毒力無顯著差異，其大小排序為81.7%噻唑膦原油＞90%阿維菌素原粉＞25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＞硫線磷＞滅線磷＞90%丁硫克百威原油。

（3）根據(jù)6種農(nóng)藥對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的抑制效果及毒力測定結(jié)果，結(jié)合成本、效應、安全等因素[15-17]，推薦表現(xiàn)較好的81.7%噻唑膦原油、90%阿維菌素原粉、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽用于煙田繼續(xù)試驗。建議在篩選出的農(nóng)藥中，輪換使用或復合使用，使其達到經(jīng)濟、安全的目的。

（4）由于煙草根結(jié)線蟲選取樣品材料中未進行種類詳細鑒別，可能存在一定誤差，測定結(jié)果僅作為農(nóng)藥使用的參考[18-20]。