• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    單心室心臟病相關(guān)miRNAs的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)及分析

    2022-04-06 07:48:22李鐘鳴李巖松劉先玲丁胤彰
    關(guān)鍵詞:心室氧化應(yīng)激重構(gòu)

    王 凱,李鐘鳴,李巖松,劉先玲,丁胤彰,孫 燕,許 迪

    單心室心臟病(single ventricle heart disease, SVHD)是一種由于胎兒時(shí)期心臟發(fā)育不全,只有一個(gè)功能性心室的先天性心臟病[1]。盡管當(dāng)前內(nèi)科和外科治療都取得了長(zhǎng)足的發(fā)展,但SVHD仍是嬰兒期心血管死亡的主要病因,也是小兒先天性心臟病人群發(fā)病的重要原因[2]。一項(xiàng)包括584例SVHD的臨床隨訪結(jié)果顯示,患者1歲時(shí)存活或不需心臟移植的發(fā)生率僅68.7%[3]。SVHD易引起充血性心力衰竭,約50%合并心力衰竭的SVHD患者在出生后1個(gè)月內(nèi)死亡,74%合并心力衰竭的SVHD患者在出生后6個(gè)月內(nèi)死亡[4]。因此,了解SVHD的發(fā)病機(jī)制,尋找其潛在的治療靶點(diǎn)具有重要意義。MicroRNAs(miRNAs)是一類非編碼、高度保守的RNA分子,可降解mRNA或與其靶基因的3′非編碼區(qū)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)[5-6]。近來(lái)研究表明,miRNA與SVHD的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[4,7]。然而,目前SVHD的發(fā)病機(jī)制仍然不明,并且有很多miRNA還未被發(fā)現(xiàn)。本研究通過(guò)檢索GEO數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出SVHD差異表達(dá)的miRNA,并對(duì)其進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),從而構(gòu)建miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò),通過(guò)對(duì)靶基因進(jìn)行GO及KEGG富集分析,以期尋找SVHD分子水平的發(fā)病機(jī)制及新的可能的治療靶點(diǎn)。

    1 材料與方法

    1.1 基因芯片信息通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)獲得基于GPL25134平臺(tái)的GSE136547的芯片數(shù)據(jù)。GSE136547數(shù)據(jù)集包括48例SVHD患者和32例健康人。

    1.2 SVHD中差異表達(dá)miRNA的篩選48例SVHD患者和32例健康對(duì)照中差異表達(dá)miRNA通過(guò)R語(yǔ)言的limma程序確定。篩選條件:P<0.05,|log fold change>1|。使用R語(yǔ)言繪制差異表達(dá)miRNA的火山圖和熱圖。

    1.3 miRNA靶基因預(yù)測(cè)通過(guò)miRWalk 3.0(http: //mirwalk.umm.uni-heidelberg.de/)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),其中預(yù)測(cè)結(jié)點(diǎn)為3′UTR,預(yù)測(cè)評(píng)分0.95。選取miRDB、TargetScan以及miRTarBase三個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的交集作為差異表達(dá)miRNA的靶基因。

    1.4 miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建使用Cytoscape構(gòu)建miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[8]。miRNA和靶基因作為結(jié)點(diǎn),兩者之間的相互關(guān)系為連線。三角形代表miRNA,圓形代表靶基因。

    1.5 miRNA靶基因GO和KEGG分析利用R語(yǔ)言的clusterprofiler對(duì)miRNA的靶基因進(jìn)行GO生物學(xué)功能富集分析和KEGG信號(hào)通路富集分析[9]。GO生物學(xué)功能富集分析包括生物學(xué)過(guò)程(biological process, BP)、細(xì)胞組成(cellular component, CC)、分子功能(molecular function, MF)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    1.6 miRNA靶基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(protein protein interaction network, PPI)分析及核心基因篩選通過(guò)string11.5(https: //www.string-db.org/)預(yù)測(cè)靶基因編碼的蛋白質(zhì)之間的關(guān)系并構(gòu)建PPI,PPI評(píng)分設(shè)置為0.4。使用Cytoscape軟件編輯PPI網(wǎng)絡(luò),并且通過(guò)CytoHubba插件根據(jù)結(jié)點(diǎn)數(shù)篩選出前10個(gè)基因?yàn)殛P(guān)鍵基因[10]。

    2 結(jié)果

    2.1 SVHD中差異表達(dá)miRNA的篩選SVHD組和正常組共篩選出9個(gè)差異表達(dá)的miRNA,其中8個(gè)miRNA上調(diào),1個(gè)miRNA下調(diào)(表1)。R語(yǔ)言的pheatmap繪制差異表達(dá)miRNA的聚類分析熱圖,R語(yǔ)言繪制差異表達(dá)miRNA的火山圖(圖1)。

    圖1 A.SVHD中差異表達(dá)miRNA的火山圖;B.SVHD中差異miRNA的熱圖:紅色代表上調(diào)的miRNAs,綠色代表下調(diào)的miRNAs

    表1 SVHD中差異表達(dá)的miRNA

    2.2 miRNA靶基因的預(yù)測(cè)通過(guò)miRWalk 3.0預(yù)測(cè)差異表達(dá)miRNA的靶基因,取同時(shí)出現(xiàn)在miRDB、TargetScan以及miRTarBase三個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中的基因?yàn)榘谢颍差A(yù)測(cè)到129個(gè)靶基因(表2)。

    表2 SVHD中差異表達(dá)miRNA的靶基因

    2.3 miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)通過(guò)Cytoscape軟件構(gòu)建miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的miRNA包括hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-18b-5p、hsa-miR-96-5p;靶基因主要有TP53INP1、ATXN1、NHLRC3、VMA21、ESR1、PDE4D(圖2)。

    圖2 SVHD的miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò):三角形代表miRNAs;圓形代表靶基因

    2.4 miRNA靶基因GO和KEGG分析GO富集分析包括CC、BP以及MF三個(gè)部分。GO富集分析在BP中主要為DNA損傷檢查點(diǎn)、對(duì)β淀粉樣蛋白的細(xì)胞反應(yīng)、對(duì)β淀粉樣蛋白的反應(yīng)、有絲分裂G1期DNA損傷檢查點(diǎn)以及G1期DNA損傷檢查點(diǎn);在CC中主要有轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物以及RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物;在MF中主要有DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子活性、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子活性和特異性RNA聚合酶Ⅱ、磷蛋白結(jié)合、磷酸化酪氨酸結(jié)合殘基以及胰島素樣生長(zhǎng)因子受體結(jié)合(圖3)。KEGG富集分析顯示靶基因主要富集在MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、人T細(xì)胞白血病病毒1感染、人類巨細(xì)胞病毒感染以及癌癥中的miRNA(圖4)。

    圖3 SVHD中差異表達(dá)miRNA靶基因的GO富集分析:BP.生物學(xué)過(guò)程;CC.細(xì)胞組成;MF.分子功能

    圖4 SVHD中差異表達(dá)miRNA靶基因的KEGG通路分析

    2.5 miRNA靶基因的PPI分析及核心基因篩選去除不相關(guān)的蛋白節(jié)點(diǎn)后,進(jìn)行靶基因的PPI構(gòu)建,PPI中共有67個(gè)節(jié)點(diǎn),143條連線(圖5A)。通過(guò)CytoHubba插件根據(jù)結(jié)點(diǎn)數(shù)篩選出前10個(gè)關(guān)鍵基因,依次為MAPK1、CREB1、VEGFA、ESR1、SMAD2、IGF1R、IGF1、IRS1、APP、CRK(圖5B)。

    圖5 A.SVHD中差異表達(dá)miRNA靶基因的PPI分析;B.篩選出的前10個(gè)關(guān)鍵基因

    3 討論

    SVHD是一種較為復(fù)雜及罕見(jiàn)的先天性心臟病,miRNA在SVHD的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[7]。然而,SVHD發(fā)病的分子機(jī)制尚不明確,并且有很多與SVHD發(fā)病相關(guān)的miRNA尚未可知。因此,本組通過(guò)檢索GEO數(shù)據(jù)庫(kù),篩選出SVHD差異表達(dá)的miRNA,構(gòu)建miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及PPI網(wǎng)絡(luò),發(fā)現(xiàn)了與SVHD發(fā)生相關(guān)的關(guān)鍵miRNA及其靶基因。

    本研究選取了人的血液miRNA芯片,其中包括48例SVHD患者和32例健康人全血中的miRNA表達(dá)數(shù)據(jù),結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)通過(guò)比較兩組miRNA的表達(dá)水平,共篩選出9個(gè)差異表達(dá)的miRNA,其中有8個(gè)miRNA上調(diào),1個(gè)miRNA下調(diào);(2)miRNA-靶基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中miRNA包括hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-18b-5p、hsa-miR-96-5p;(3)PPI中的關(guān)鍵基因?yàn)镸APK1、CREB1、VEGFA、ESR1、SMAD2、IGF1R、IGF1、IRS1、APP、CRK;(4)靶基因富集的通路主要是MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、人T細(xì)胞白血病病毒1感染、人類巨細(xì)胞病毒感染以及癌癥中的miRNA。

    近年研究顯示miR-20a過(guò)表達(dá)可以改善擴(kuò)張型心肌病的左室收縮功能,主要表現(xiàn)為改善左室射血分?jǐn)?shù)[11]。此外,hsa-miR-20a-5p亦與左室重構(gòu)有關(guān)[12]。SVHD通常表現(xiàn)為左心室致密化不全,并伴有左室重構(gòu)的發(fā)生[13]。hsa-miR-20a-5p可能參與SVHD心室重構(gòu)的發(fā)展。SVHD的常見(jiàn)并發(fā)癥為心功能不全[14],而心肌纖維化、氧化應(yīng)激與心功能不全的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[15]。hsa-miR-18a-5p可通過(guò)Notch2通路抑制心臟纖維化[16]。hsa-miR-96-5p與氧化應(yīng)激相關(guān)[17]。hsa-miR-18a-5p與hsa-miR-20a-5p可能分別通過(guò)纖維化途徑及氧化應(yīng)激途徑參與SVHD導(dǎo)致的心功能不全的發(fā)生。SVHD的疾病進(jìn)程伴隨心肌缺血、缺氧導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大,最終引起心功能不全,而hsa-miR-18a能夠抑制心肌細(xì)胞肥大[18]。本研究中hsa-miR-18a表達(dá)上調(diào),過(guò)表達(dá)的hsa-miR-18a可能抑制SVHD引起的心肌細(xì)胞肥大。

    SVHD會(huì)引起心室容量負(fù)荷過(guò)重,長(zhǎng)期心室容量負(fù)荷過(guò)重可導(dǎo)致心功能低下。研究顯示,MAPK1是心肌收縮的關(guān)鍵因子,與心力衰竭發(fā)生相關(guān)[19-20],故SVHD容量負(fù)荷過(guò)重可能首先引起MAPK1表達(dá)變化,MAPK1表達(dá)異常導(dǎo)致SVHD心力衰竭的發(fā)生。SVHD的常見(jiàn)病理生理為缺血缺氧,而缺血缺氧會(huì)引起心肌細(xì)胞增殖。CREB是一種細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子,可與cAMP反應(yīng)元件的特定DNA序列結(jié)合以增加或減少靶基因的轉(zhuǎn)錄,并且增殖的心肌細(xì)胞中CREB1表達(dá)增加[21]。因此,CREB1可能參與SVHD發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的細(xì)胞增殖。2016年,Sandeep等[22]發(fā)現(xiàn)SVHD中VEGF的表達(dá)較正常人升高,表明VEGFA在疾病發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。已有研究顯示ESR1、SMAD2、IGF1R、IGF1及IRS1與左心室重構(gòu)相關(guān)[23-26],表明這些基因可能參與單心室心肌病的心室重構(gòu)。目前尚無(wú)研究顯示APP和CRK與SVHD或心室重構(gòu)的關(guān)系,它們可能是潛在的靶點(diǎn),需要進(jìn)一步研究來(lái)明確其相關(guān)性。

    KEGG功能富集顯示靶基因主要富集在MAPK信號(hào)通路和PI3K-Akt信號(hào)通路。最近的研究顯示,抑制MAPK信號(hào)通路磷酸化可改善氧化應(yīng)激[27],而SVHD的發(fā)生過(guò)程中伴隨氧自由基的產(chǎn)生[28]。MAPK信號(hào)通路磷酸化激活氧化應(yīng)激,從而導(dǎo)致SVHD的發(fā)生、發(fā)展。先前的研究表明MAPK信號(hào)通路及PI3K-Akt信號(hào)通路共同參與心室重構(gòu)的發(fā)生、發(fā)展[29]。因此,MAPK與PI3K-Akt信號(hào)通路可能與SVHD的心室重構(gòu)相關(guān)。

    綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)SVHD中差異表達(dá)的miRNA及關(guān)鍵靶基因,并初步分析了其相關(guān)信號(hào)通路,后續(xù)將收集病例進(jìn)一步分析,為SVHD的診治提供了新的研究思路及理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    心室氧化應(yīng)激重構(gòu)
    長(zhǎng)城敘事的重構(gòu)
    攝影世界(2022年1期)2022-01-21 10:50:14
    基于炎癥-氧化應(yīng)激角度探討中藥對(duì)新型冠狀病毒肺炎的干預(yù)作用
    北方大陸 重構(gòu)未來(lái)
    北京的重構(gòu)與再造
    商周刊(2017年6期)2017-08-22 03:42:36
    論中止行為及其對(duì)中止犯的重構(gòu)
    氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變
    房阻伴特長(zhǎng)心室停搏1例
    冠心病伴心力衰竭合并心房顫動(dòng)的心室率控制研究
    氧化應(yīng)激與結(jié)直腸癌的關(guān)系
    『孫爺爺』談心室為孩子上網(wǎng)撐起『保護(hù)傘』
    精品人妻视频免费看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 久久人妻熟女aⅴ| 街头女战士在线观看网站| 色哟哟·www| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品一二三区在线看| a级一级毛片免费在线观看| 日本免费在线观看一区| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲va在线va天堂va国产| 狂野欧美激情性bbbbbb| 赤兔流量卡办理| 三级国产精品欧美在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 美女国产视频在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲成人一二三区av| 18+在线观看网站| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲自偷自拍三级| 乱系列少妇在线播放| 亚洲第一av免费看| 久久久久久九九精品二区国产| 亚州av有码| 丰满少妇做爰视频| 在线观看一区二区三区激情| 日韩成人伦理影院| 只有这里有精品99| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 人妻系列 视频| 国产av一区二区精品久久 | 中文字幕制服av| av专区在线播放| 午夜福利网站1000一区二区三区| 大码成人一级视频| 精品人妻熟女av久视频| 人妻 亚洲 视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 国产在视频线精品| 成人美女网站在线观看视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品人妻久久久影院| 最近手机中文字幕大全| 免费黄频网站在线观看国产| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 九九爱精品视频在线观看| 老熟女久久久| 国产午夜精品一二区理论片| 国产av一区二区精品久久 | 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 老女人水多毛片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产av码专区亚洲av| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久99热这里只有精品18| 2018国产大陆天天弄谢| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产成人91sexporn| 亚洲伊人久久精品综合| 成人国产麻豆网| 七月丁香在线播放| 精品午夜福利在线看| 久久韩国三级中文字幕| 一本一本综合久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产一级毛片在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 联通29元200g的流量卡| 伦理电影大哥的女人| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久6这里有精品| 亚洲av不卡在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 精品亚洲成a人片在线观看 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 高清视频免费观看一区二区| 亚洲欧洲国产日韩| 一区二区三区免费毛片| 日韩视频在线欧美| 国产黄频视频在线观看| 大片免费播放器 马上看| 国产深夜福利视频在线观看| 免费观看av网站的网址| 男女国产视频网站| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲最大成人中文| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 人妻一区二区av| 最黄视频免费看| 美女福利国产在线 | av免费观看日本| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产日韩欧美亚洲二区| 男女啪啪激烈高潮av片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 新久久久久国产一级毛片| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲精品国产成人久久av| 国产视频内射| 国产在线视频一区二区| 一级毛片 在线播放| 大香蕉97超碰在线| 国产精品不卡视频一区二区| 精品久久久久久久久亚洲| 国产免费一区二区三区四区乱码| 一个人免费看片子| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产综合精华液| 如何舔出高潮| 男女免费视频国产| 超碰av人人做人人爽久久| 18禁动态无遮挡网站| 成人亚洲精品一区在线观看 | 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av不卡在线播放| 久久久精品免费免费高清| 只有这里有精品99| 国产免费一区二区三区四区乱码| 美女中出高潮动态图| 男人舔奶头视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 国产精品偷伦视频观看了| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产免费福利视频在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品免费大片| 中文字幕亚洲精品专区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一级a做视频免费观看| 日韩一区二区三区影片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久青草综合色| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美高清成人免费视频www| 中文资源天堂在线| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品国产三级国产专区5o| av在线播放精品| 在线免费十八禁| 高清毛片免费看| 久久久久国产网址| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品无大码| 九色成人免费人妻av| 一区二区三区乱码不卡18| 丝瓜视频免费看黄片| 99国产精品免费福利视频| 在线观看免费日韩欧美大片 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久国产一区二区| 亚洲精品国产av成人精品| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产伦理片在线播放av一区| av播播在线观看一区| 一级二级三级毛片免费看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 我的老师免费观看完整版| 天堂8中文在线网| 中文在线观看免费www的网站| 久久久亚洲精品成人影院| 精品少妇久久久久久888优播| 老女人水多毛片| 2022亚洲国产成人精品| 婷婷色综合www| 免费看不卡的av| 日本wwww免费看| 在线免费十八禁| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产免费福利视频在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 国产精品不卡视频一区二区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久精品久久久久久久性| 夫妻性生交免费视频一级片| 天堂8中文在线网| av在线老鸭窝| 少妇被粗大猛烈的视频| 一级黄片播放器| 看十八女毛片水多多多| 激情 狠狠 欧美| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日本-黄色视频高清免费观看| 99热网站在线观看| 精品午夜福利在线看| 久久热精品热| 26uuu在线亚洲综合色| 欧美zozozo另类| 99热这里只有精品一区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 十分钟在线观看高清视频www | 亚洲美女搞黄在线观看| 一区二区三区精品91| 亚洲va在线va天堂va国产| 熟女av电影| 一级毛片 在线播放| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲国产日韩一区二区| 欧美另类一区| 夜夜爽夜夜爽视频| www.色视频.com| 免费在线观看成人毛片| av在线蜜桃| 亚洲色图综合在线观看| 精品一区二区三卡| av免费在线看不卡| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 春色校园在线视频观看| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲欧洲日产国产| 日日啪夜夜爽| 最黄视频免费看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 三级经典国产精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 一级毛片 在线播放| 美女高潮的动态| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久97久久精品| 久久婷婷青草| 草草在线视频免费看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国精品久久久久久国模美| 秋霞伦理黄片| 五月玫瑰六月丁香| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲电影在线观看av| 偷拍熟女少妇极品色| 日韩视频在线欧美| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 99久久精品国产国产毛片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久久精品94久久精品| 在线观看免费视频网站a站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 性色av一级| 在线看a的网站| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲最大成人中文| 我要看日韩黄色一级片| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲av男天堂| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 精品久久久久久久久亚洲| 国产中年淑女户外野战色| 插逼视频在线观看| 亚洲成人手机| 久久久久国产网址| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产男人的电影天堂91| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久久久久国产电影| 国产精品偷伦视频观看了| 久久久久精品性色| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲四区av| 女人久久www免费人成看片| 在线观看国产h片| 成人一区二区视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 内地一区二区视频在线| 少妇丰满av| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 人妻夜夜爽99麻豆av| 97热精品久久久久久| www.av在线官网国产| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 少妇人妻 视频| 妹子高潮喷水视频| 国产精品福利在线免费观看| 国产亚洲一区二区精品| 久久久a久久爽久久v久久| av免费观看日本| 三级国产精品片| 久久久久久九九精品二区国产| 春色校园在线视频观看| 日本免费在线观看一区| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品一区二区在线不卡| 久久久欧美国产精品| 啦啦啦在线观看免费高清www| 精品亚洲成国产av| av免费在线看不卡| 一个人免费看片子| 国产精品人妻久久久影院| 又爽又黄a免费视频| 26uuu在线亚洲综合色| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 免费观看的影片在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产成人一区二区在线| 一级二级三级毛片免费看| av视频免费观看在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 一级爰片在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 免费少妇av软件| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产深夜福利视频在线观看| 久久99热这里只有精品18| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲欧美日韩无卡精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产亚洲欧美精品永久| 在线观看免费视频网站a站| 欧美精品国产亚洲| 精品一品国产午夜福利视频| 多毛熟女@视频| 精品一品国产午夜福利视频| 激情五月婷婷亚洲| 人人妻人人看人人澡| 丰满乱子伦码专区| 人人妻人人看人人澡| 一级毛片电影观看| 欧美日本视频| 18禁在线播放成人免费| 十八禁网站网址无遮挡 | 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品无大码| 热re99久久精品国产66热6| 在线观看免费日韩欧美大片 | 乱系列少妇在线播放| 边亲边吃奶的免费视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产乱来视频区| 午夜日本视频在线| 妹子高潮喷水视频| 26uuu在线亚洲综合色| 久久久久久久国产电影| 亚洲伊人久久精品综合| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 免费黄频网站在线观看国产| 国产成人精品婷婷| 国产精品国产av在线观看| 日韩强制内射视频| 亚洲,欧美,日韩| 视频中文字幕在线观看| www.av在线官网国产| 久久 成人 亚洲| 性高湖久久久久久久久免费观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99久久精品国产国产毛片| 制服丝袜香蕉在线| 国产黄色视频一区二区在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日本黄色片子视频| av国产免费在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲欧洲国产日韩| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品人妻久久久影院| 精品一区二区三卡| 国产高清国产精品国产三级 | 性色avwww在线观看| 欧美区成人在线视频| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 啦啦啦啦在线视频资源| 黄片wwwwww| 久热久热在线精品观看| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲av福利一区| 联通29元200g的流量卡| 在线观看国产h片| 亚洲久久久国产精品| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲经典国产精华液单| 国内精品宾馆在线| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 免费黄色在线免费观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲国产av新网站| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日日摸夜夜添夜夜爱| 老司机影院毛片| 国产亚洲精品久久久com| 国产成人精品久久久久久| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲美女黄色视频免费看| 午夜精品国产一区二区电影| 成人国产av品久久久| 久久精品久久久久久久性| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产亚洲欧美精品永久| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| av天堂中文字幕网| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费在线观看成人毛片| 99热国产这里只有精品6| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲国产欧美在线一区| 国产在线男女| 综合色丁香网| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品嫩草影院av在线观看| 午夜福利高清视频| 干丝袜人妻中文字幕| 成人国产麻豆网| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 精品久久久久久久久av| 国产精品不卡视频一区二区| 91久久精品国产一区二区成人| 久久国产精品大桥未久av | 亚洲丝袜综合中文字幕| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩人妻高清精品专区| 晚上一个人看的免费电影| www.av在线官网国产| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产在线免费精品| 久久久色成人| av在线观看视频网站免费| 免费看日本二区| 亚洲综合色惰| av视频免费观看在线观看| 久久久久久久精品精品| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久久午夜欧美精品| 婷婷色av中文字幕| 色婷婷av一区二区三区视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 日本av手机在线免费观看| 国产av精品麻豆| 精品人妻熟女av久视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 六月丁香七月| 全区人妻精品视频| 国产乱来视频区| 日韩精品有码人妻一区| 免费人成在线观看视频色| 天堂8中文在线网| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产色婷婷99| 天美传媒精品一区二区| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美xxxx性猛交bbbb| 最黄视频免费看| 99热这里只有是精品50| 国产高清国产精品国产三级 | 简卡轻食公司| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产成人a区在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 精品亚洲成国产av| 亚洲精品国产成人久久av| 国产欧美亚洲国产| 99久国产av精品国产电影| 国产精品国产三级专区第一集| 午夜精品国产一区二区电影| 一级片'在线观看视频| 内射极品少妇av片p| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品成人在线| 免费黄频网站在线观看国产| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产黄片美女视频| 久久久久精品性色| 日韩伦理黄色片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 午夜免费鲁丝| 亚洲电影在线观看av| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 免费观看无遮挡的男女| 我的老师免费观看完整版| 国产精品伦人一区二区| 亚洲国产欧美在线一区| 日本黄色日本黄色录像| 女性被躁到高潮视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲人成网站高清观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 最近中文字幕2019免费版| 秋霞在线观看毛片| 七月丁香在线播放| 亚洲国产精品999| 国产在视频线精品| 中文欧美无线码| tube8黄色片| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 在线天堂最新版资源| 韩国高清视频一区二区三区| 成人国产av品久久久| 欧美97在线视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲av综合色区一区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 色5月婷婷丁香| 日韩欧美精品免费久久| 国产黄频视频在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲欧美精品自产自拍| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产亚洲欧美精品永久| 成人免费观看视频高清| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 午夜精品国产一区二区电影| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产精品一区二区在线观看99| 少妇熟女欧美另类| 丰满人妻一区二区三区视频av| 高清视频免费观看一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| av免费观看日本| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 一区二区三区四区激情视频| 日韩欧美 国产精品| 内地一区二区视频在线| 激情 狠狠 欧美| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲av综合色区一区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 大香蕉久久网| 少妇熟女欧美另类| 久久久久视频综合| 日韩国内少妇激情av| 国产人妻一区二区三区在| 日本wwww免费看| 欧美日本视频| 99久国产av精品国产电影| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩欧美精品免费久久| 深夜a级毛片| 黄色欧美视频在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 中文欧美无线码| 国产高清有码在线观看视频| 日韩成人伦理影院| 嫩草影院新地址| h日本视频在线播放| 一本一本综合久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 极品教师在线视频| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲丝袜综合中文字幕| 18禁在线播放成人免费| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产精品蜜桃在线观看| 欧美精品国产亚洲| 亚洲国产精品国产精品| 黑人猛操日本美女一级片| 国产成人精品福利久久| 老司机影院成人| 国产黄频视频在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 免费看光身美女| 国产精品嫩草影院av在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 观看免费一级毛片| 青春草亚洲视频在线观看| 网址你懂的国产日韩在线| 欧美成人a在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 日韩视频在线欧美| 国产精品精品国产色婷婷| 91精品一卡2卡3卡4卡| 综合色丁香网|