腫瘤中組織駐留T細(xì)胞與三級淋巴結(jié)構(gòu)關(guān)系的研究進(jìn)展

賈晨昊，何雯婷，謝雯瑩，張大川

初始T細(xì)胞在引流淋巴結(jié)(draining lymph node, DLN)遇到同源抗原時，細(xì)胞被激活，啟動增殖程序，并分化為異質(zhì)效應(yīng)T細(xì)胞群，隨后這些效應(yīng)T細(xì)胞進(jìn)入感染部位并清除被病原體感染的細(xì)胞。大部分效應(yīng)T細(xì)胞在參與免疫反應(yīng)清除病原體后死亡，但仍有部分效應(yīng)T細(xì)胞接受免疫調(diào)控信息后轉(zhuǎn)化為記憶T細(xì)胞[1]。作為趨化因子受體，CCR7(CD197)可以調(diào)控淋巴細(xì)胞的遷移，根據(jù)CCR7表達(dá)情況將記憶T細(xì)胞分為兩個功能不同的亞群。CCR7+TM即中心記憶T細(xì)胞(central memory T cells, TCM)，分布于脾臟和淋巴結(jié)內(nèi)，在二次感染刺激下分化為CCR7-TM。CCR7-TM即效應(yīng)記憶T細(xì)胞(effector memory T cells, TEM)，主要存在于血液或非淋巴組織中，由抗原持續(xù)性刺激產(chǎn)生，向炎癥灶遷移并發(fā)揮效應(yīng)免疫反應(yīng)[2]。組織駐留記憶T細(xì)胞(tissue resident memory T cells, TRM)是近年來發(fā)現(xiàn)的第三個記憶T細(xì)胞亞群，是一種存在于淋巴組織和非淋巴組織的免疫細(xì)胞，不進(jìn)入血液循環(huán)。TRM組成了非淋巴組織(non-lymphoid tissue, NLT)中的大部分記憶T細(xì)胞，并能對組織提供即時保護(hù)免其受感染[1]。

1 組織駐留T細(xì)胞的類型

1.1 CD8+TRM活化的CD8+T細(xì)胞在免疫應(yīng)答過程中被招募到組織后，可以在原位發(fā)育為成熟的TRM[3]。在皮膚和腸道中，TRM由缺乏殺手細(xì)胞凝集素受體G1(killer cell lectin receptor G1, KLRG1)的記憶細(xì)胞前體發(fā)育而來[4-5]。TRM顯示了一種不同于TCM和TEM的表面分子模式，TRM缺乏淋巴結(jié)歸巢分子CCR7和CD62L，通常表達(dá)黏附和遷移分子，包括CD103、CD69和整合素CD49a非常晚期抗原-1(very late antigen-1, VLA-1)[6]。TRM表達(dá)低水平的鞘氨醇-1-磷酸受體-1(sphingosine-1-phosphate receptor-1, S1PR1)。轉(zhuǎn)錄因子KLF2的下調(diào)介導(dǎo)S1PR1水平下降。TRM的另一個非常重要的標(biāo)志物CD69，也是T細(xì)胞的早期激活標(biāo)志物，可以抑制S1PR1的活性，促進(jìn)TRM細(xì)胞在外周組織駐留[7]。CD49a作為特定標(biāo)志物可將TRM細(xì)胞分為兩個不同的亞群，CD49a+TRM亞群可產(chǎn)生干擾素-γ(interferon-γ, IFN-γ)，IFN-γ與活化后毒性能力顯著增強的TRM細(xì)胞協(xié)同參與感染后上皮細(xì)胞的免疫檢測，CD49a-TRM亞群主要產(chǎn)生白介素-17(interleukin-17, IL-17)，可促進(jìn)銀屑病的局部皮膚炎癥反應(yīng)[8]。整合素CD103與E-cadherin結(jié)合促進(jìn)了TRM在上皮組織中駐留[9]。上述標(biāo)志物在TRM細(xì)胞表達(dá)具有差異性，提示TRM細(xì)胞亞群的存在并可能發(fā)揮不同功能，促進(jìn)TRM細(xì)胞在不同組織中出現(xiàn)和長期駐留[10]。

1.2 其他類型TRM除CD8+T細(xì)胞之外，其他類型的TRM主要為CD4+T細(xì)胞、Treg細(xì)胞、NKT細(xì)胞、γδT細(xì)胞。主要由CD8記憶T細(xì)胞在組織中駐留，但已有相關(guān)文獻(xiàn)表明CD4記憶T細(xì)胞也可駐留在肺、生殖器官、唾液腺和皮膚中[3]。類似于CD8+TRM，CD4+TRM表達(dá)表面分子CD69和CD11a，而CD103的表達(dá)量較低或為陰性。CD4+T細(xì)胞比CD8+T細(xì)胞在組織內(nèi)駐留循環(huán)時間更長[11]。在相同的微環(huán)境中，CD4+TRM和CD8+TRM似乎也需要不同的誘導(dǎo)線索來實現(xiàn)駐留[3]。在腸道、皮膚、肺、內(nèi)臟脂肪組織(visceral adipose tissue， VAT)和肌肉等多種非淋巴組織中，已發(fā)現(xiàn)表型不同的Treg細(xì)胞群體。組織Treg細(xì)胞在抑制局部免疫反應(yīng)、促進(jìn)組織修復(fù)和維持免疫穩(wěn)態(tài)方面起著至關(guān)重要的作用[12]。組織Treg細(xì)胞多表達(dá)CD69和CD103[13]。幾種“初始”T細(xì)胞類型，包括T細(xì)胞受體(T cell receptor, TCR)、αβ及γδT細(xì)胞亞群和自然殺傷T(natural killer T, NKT)細(xì)胞，已被證明是組織駐留細(xì)胞[3]。γδT細(xì)胞來源于胸腺前體，在發(fā)育早期遷移到組織中，隨后作為組織駐留細(xì)胞持續(xù)存在[14-15]。皮膚γδT細(xì)胞表達(dá)組織駐留T細(xì)胞標(biāo)志物CD69和CD103，此外還表達(dá)皮膚歸巢受體，產(chǎn)生IL-17和IL-22[16]。NKT細(xì)胞是具有半不變TCRαβ的T細(xì)胞專門群體，在CD1d的背景下識別糖脂抗原，并在腫瘤監(jiān)測和控制某些病毒和細(xì)菌感染中發(fā)揮作用[17]。肝臟組織中NKT細(xì)胞CD69表達(dá)增加，CD69在多種T細(xì)胞群的組織駐留起重要作用，是TRM的標(biāo)志[18]。

2 組織駐留T細(xì)胞在抗腫瘤免疫中的作用

CD8+T細(xì)胞對抗腫瘤細(xì)胞的保護(hù)作用極為重要。幼稚的CD8+T細(xì)胞被成熟的遷移性樹突狀細(xì)胞激活，成熟的遷移性樹突狀細(xì)胞在MHC I類分子上呈遞腫瘤衍生的抗原?？乖禺愋訡D8+T細(xì)胞大量增殖并分化為細(xì)胞毒性效應(yīng)T(cytotoxic effector T cells, Teff)細(xì)胞，隨后可遷移至外周組織并通過其TCR識別癌細(xì)胞，激活CD103可直接使CD8+T細(xì)胞釋放穿孔素和顆粒酶B，增強抗腫瘤免疫應(yīng)答[19-20]。乳腺癌[21]、肺癌[22-23]、肝癌[24]和膀胱癌[25]中可見CD103+TRM細(xì)胞的高浸潤。并且，文獻(xiàn)報道肺鱗狀細(xì)胞癌[23]、肝細(xì)胞癌[24]、三陰型乳腺癌[26]中TRM細(xì)胞高浸潤與患者更好的預(yù)后有關(guān)。然而，有文獻(xiàn)報道黑色素瘤中TRM細(xì)胞高浸潤與患者的預(yù)后無關(guān)[27-28]。這表明TRM細(xì)胞在不同的惡性腫瘤中可能有不同的局部抗腫瘤反應(yīng)[9]。

3 三級淋巴結(jié)構(gòu)(tertiary lymphoid structure, TLS)的組成

腫瘤微環(huán)境是一個相互作用的細(xì)胞間室網(wǎng)絡(luò)，包括腫瘤細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和免疫細(xì)胞。TLS是在炎癥或腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)的異位淋巴樣結(jié)構(gòu)，參與構(gòu)成腫瘤微環(huán)境。它們表現(xiàn)出與淋巴結(jié)相似的結(jié)構(gòu)和功能：結(jié)構(gòu)上可見高內(nèi)皮微靜脈(high endothelial venules, HEV)、T細(xì)胞區(qū)[含樹突狀細(xì)胞(dendritic cells, DC)]和B細(xì)胞區(qū)[含濾泡樹突狀細(xì)胞(follicular dendritic cells, FDC)和生發(fā)中心][29]。HEV是一種特殊血管，表達(dá)外周淋巴結(jié)尋址蛋白(peripheral node addressin, PNAd)，并促進(jìn)淋巴細(xì)胞從血流外滲和TLS的形成。

4 TLS在抗腫瘤免疫中的作用

TLS是啟動和(或)維持局部及全身T細(xì)胞和B細(xì)胞抗腫瘤反應(yīng)的重要位點。目前，TLS幾乎已在所有實體癌中發(fā)現(xiàn)，在非小細(xì)胞肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、黑色素瘤、腎透明細(xì)胞癌中與癌癥患者良好的臨床結(jié)果相關(guān)。Goc等[30]發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌中TLS與CD8+T細(xì)胞密度之間存在因果關(guān)系，其中TLS是CD8+T細(xì)胞增殖的激活位點，可通過多種途徑增強CD8+T細(xì)胞的抗腫瘤反應(yīng)，而CD8+T細(xì)胞密度與改善臨床療效之間存在很強的相關(guān)性。結(jié)直腸癌相關(guān)淋巴反應(yīng)(colorectal cancer associated lymphoid reaction, CLR)的密度與瘤周和瘤內(nèi)CD83+成熟樹突狀細(xì)胞和T細(xì)胞密度呈正相關(guān)，且高CLR密度與更好的生存期有關(guān)，表明CLR有助于適應(yīng)性抗腫瘤免疫[31]。張大川等[32]對胃癌的研究結(jié)果提示，特征性的HEV具有招募淋巴細(xì)胞進(jìn)入腫瘤微環(huán)境的功能，TLS中含有FDC、B細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞，可以在腫瘤微環(huán)境內(nèi)活化腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(tumor infiltrating lymphocytes, TIL)，啟動抗腫瘤免疫反應(yīng)。Giraldo等[33]的研究發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌中CD8+T細(xì)胞高浸潤與患者預(yù)后不良相關(guān)。在原發(fā)性腎透明細(xì)胞癌的無瘤生存期研究中，腫瘤侵襲邊緣的CD8+T細(xì)胞大量浸潤和低密度的TLS-DC是最強的獨立的不良預(yù)后因素，而腫瘤中心的CD8+T細(xì)胞和TLS-DC密度與預(yù)后無關(guān)。

5 TRM與TLS在抗腫瘤中的聯(lián)系

目前，調(diào)控腫瘤微環(huán)境中淋巴新生的誘導(dǎo)和維持的確切機制尚不清楚。淋巴趨化因子(CCL19、CCL21和CXCL13)和細(xì)胞因子(如LTa、LTb、TNF-a)在腫瘤和非腫瘤炎癥組織中都有表達(dá)，提示良、惡性疾病中TLS的形成可能遵循一個共同的程序。HEV可招募外周血淋巴細(xì)胞直接進(jìn)入腫瘤相關(guān)的TLS。此外，成熟的DC、Th細(xì)胞和B細(xì)胞均參與TLS相關(guān)T細(xì)胞的激活與發(fā)育，從而增強其抗腫瘤效應(yīng)功能[29]。Workel等[34]研究提示，趨化因子CXCL13在幾乎所有CD103+CD8+T細(xì)胞中表達(dá)，其介導(dǎo)腫瘤微環(huán)境中B細(xì)胞的募集，對TLS的形成至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，外周血中轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)上調(diào)CD8+T細(xì)胞CD103表達(dá)并分泌CXCL13，抑制TGF-β受體信號可抑制CXCL13的產(chǎn)生。提示CXCL13+CD103+CD8+TILs在人體腫瘤中，對介導(dǎo)B細(xì)胞募集和TLS形成具有潛在的作用。通過HEV促進(jìn)CCR7+幼稚T細(xì)胞和CXCR5+B細(xì)胞直接進(jìn)入TLS，T細(xì)胞在與成熟的DC和B細(xì)胞接觸后分化為活化T細(xì)胞，于TLS內(nèi)形成生發(fā)中心，保護(hù)其不受腫瘤微環(huán)境免疫抑制環(huán)境的影響[35]。

6 總結(jié)

組織駐留T細(xì)胞依據(jù)其表達(dá)的趨化因子及細(xì)胞因子分為不同亞型，參與炎癥反應(yīng)、移植排斥反應(yīng)、自身免疫、腫瘤應(yīng)答等免疫反應(yīng)，并廣泛分布于周圍組織器官內(nèi)，參與維持機體穩(wěn)態(tài)。TLS是局部組織內(nèi)免疫反應(yīng)的激活位點。多種癌癥中TLS的存在都與患者的良好預(yù)后相關(guān)。趨化因子CXCL13的相關(guān)研究讓我們意識到組織駐留CD103+CD8+T細(xì)胞與TLS之間的聯(lián)系，提示組織駐留T細(xì)胞與TLS可能協(xié)同參與腫瘤的免疫調(diào)控。CD103+CD8+T細(xì)胞對TLS形成的潛在作用也為腫瘤免疫治療提供了新思路，兩者在抗腫瘤之間的聯(lián)系期待也會成為新的研究方向。