化療對大鼠肺癌模型凝血功能及血管內(nèi)皮功能的影響與作用原理分析

周亮，武鐵軍，張民峰，楊璞，畢榮欣

1.邢臺(tái)市第三醫(yī)院胸外科，河北邢臺(tái) 054000；2.邢臺(tái)市第一醫(yī)院胸外科，河北邢臺(tái) 054001；3.邢臺(tái)市第三醫(yī)院肝膽外科，河北邢臺(tái) 054000

肺癌作為一種發(fā)生于人體肺部的惡性腫瘤，近年來，發(fā)病率與病死率呈現(xiàn)大幅度升高趨勢，患者會(huì)表現(xiàn)出各種不適癥狀，對于人們健康有著較大的危害性。當(dāng)前認(rèn)為引發(fā)這種疾病的原因主要為遺傳、吸煙以及不良環(huán)境等原因。該疾病主要可以通過X 線、支氣管鏡、細(xì)胞學(xué)、ECT 等檢查診斷出。當(dāng)前許多針對該疾病的治療方法出現(xiàn)在人們的視野當(dāng)中，可分為手術(shù)治療與非手術(shù)治療，手術(shù)治療有肺葉切除術(shù)、肺段切除術(shù)或電視胸腔鏡輔助性手術(shù)，非手術(shù)治療有放療、化療等，目前，化療為肺癌患者的首要治療措施，在臨床上得到了廣泛認(rèn)可和使用，且能對患者的臨床癥狀帶來明顯的改善作用，但很多患者在接受化療后會(huì)出現(xiàn)一些不良反應(yīng)，比如，血管內(nèi)皮損傷、凝血功能障礙等，將會(huì)對患者造成一定程度影響。為了探究化療對于血管內(nèi)皮以及凝血功能的影響，本文于2020 年1—12 月選取60 只大鼠，對其進(jìn)行深入探究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇大鼠60 只作為實(shí)驗(yàn)樣本，隨機(jī)分為甲組、乙組與丙組，均20 只，性別選擇均為雄性，7 周齡,由上海市西普爾有限公司進(jìn)行提供，體質(zhì)量為210～260 g，將所有大鼠皆放置于干凈籠子中進(jìn)行養(yǎng)殖，保持室內(nèi)溫度在(22.0±1.9)℃，室內(nèi)濕度為35%～40%，光照時(shí)長為12 h/d，飲水采用純凈水，避免因水資源影響實(shí)驗(yàn)效果。

1.2 方法

乙組與丙組采取肺癌建模，對其使用致癌碘油液。在建模前3 d，對各組大鼠實(shí)施青霉素和鏈霉素避免發(fā)生感染，前者為2 萬單位，后者為45 mg，保障建模成功率。乙組與丙組注射3%的戊巴比妥鈉麻醉，使其仰臥在手術(shù)臺(tái)上，對其氣管點(diǎn)滴0.1 mL 致癌碘油液，甲組僅實(shí)施碘油液。建模后每間隔1 周對大鼠進(jìn)行X 線胸片，確保建模成功，丙組大鼠建模成功后則對其開始注射0.5 mL/kg 的環(huán)磷酰胺（國藥準(zhǔn)字H32020856）方法化療。

1.3 觀察指標(biāo)

①對比3 組凝血功能：血漿纖維蛋白原（fibrinogen, FIB）、活化部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time, APTT）、凝血 酶 原 時(shí)間（prothrombin time, PT）、凝血酶時(shí)間（thrombin time, TT）。

②對比3 組血管內(nèi)皮（vascularendothlialgrowthfactor, VEGF）指標(biāo)。

③對比兩組Toll 樣受體4（toll-like receptor 4, TLR4）和細(xì)胞核因子-κBp65 （nuclear factor-κBp65, NF-κBp65）蛋白表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 28.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以(±s)表示，多組間差異比較采用F值檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組大鼠凝血功能對比

甲組APTT、PT、TT 比乙組更高，F(xiàn)IB 低于乙組，丙組APTT、PT、TT 均比其他兩組更低，F(xiàn)IB 高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3 組大鼠凝血功能比較(±s)

表1 3 組大鼠凝血功能比較(±s)

2.2 3 組大鼠血管內(nèi)皮功能對比

乙組大鼠血漿中VEGF 比甲組更高，丙組血漿中VEGF 高于乙組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 3 組大鼠血管內(nèi)皮功能對比[(±s),mg/mL]

表2 3 組大鼠血管內(nèi)皮功能對比[(±s),mg/mL]

2.3 3 組大鼠血管組織中TLR4 和NF-κBp65 蛋白表達(dá)水平對比

丙組TLR4 和NF-κB p65 蛋白表達(dá)水平高于甲組及乙組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 3 組大鼠血管組織中TLR4 和NF-κBp65 蛋白表達(dá)水平對比(±s)

表3 3 組大鼠血管組織中TLR4 和NF-κBp65 蛋白表達(dá)水平對比(±s)

3 討論

隨著當(dāng)前社會(huì)不斷發(fā)展，人們的生活水平得到了提高，生活習(xí)慣以及環(huán)境也發(fā)生了相應(yīng)的變化。各種癌癥發(fā)生率逐漸升高，肺癌作為一種發(fā)生于肺部支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤，發(fā)病率以及病死率在近年內(nèi)呈現(xiàn)持續(xù)上漲的趨勢，而非小細(xì)胞肺癌占據(jù)肺癌的比例已經(jīng)超過80%，大部分患者在發(fā)現(xiàn)患病時(shí)通常已經(jīng)處于中晚期，生存率較低，對人們的健康具有較大的危害[1-3]。目前認(rèn)為引發(fā)此疾病的原因主要為吸煙、遺傳因素、所處環(huán)境等，煙草中含有大量的化學(xué)物質(zhì)，總含量超過3 000 種，其中多種化學(xué)物質(zhì)都具有較強(qiáng)的致癌特性，據(jù)調(diào)查，大概有12%的患者患病原因都與長期接觸各類化學(xué)物質(zhì)有關(guān)，比如，焦炭爐、石棉等。臨床癥狀表現(xiàn)為胸部異常隱痛、咳嗽，到了晚期還可能會(huì)出現(xiàn)咯血、呼吸異常、食欲降低、疲乏無力等反應(yīng)[4-5]。

化療作為肺癌的有效治療手段之一，主要是通過化學(xué)藥物抑制機(jī)體腫瘤細(xì)胞的增長，且將患者機(jī)體異常增生的細(xì)胞殺滅，能夠有效地控制病情發(fā)展，防止癌細(xì)胞擴(kuò)散，延長患者壽命，大部分癌癥患者在治療期間均需要化療，效果良好，但是在治療期間不僅會(huì)損傷腫瘤細(xì)胞，這類患者在經(jīng)過治療后極有可能會(huì)存在凝血功能異常情況，且化療后還有可能對周圍組織以及正常細(xì)胞造成一定的傷害，影響到免疫系統(tǒng)，表現(xiàn)出多種不良反應(yīng)[6-8]。以腹腔腫瘤患者舉例，其可能會(huì)因?yàn)橄莱溲?、水腫或消化酶分泌降低，影響到胃腸道功能，造成不利影響，患者會(huì)表現(xiàn)出現(xiàn)惡心、嘔吐以及腹瀉等癥狀，患者極有可能因此產(chǎn)生營養(yǎng)不良，食欲減退。并且對還會(huì)器官以及血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷，從而導(dǎo)致血液表現(xiàn)為高凝狀態(tài)，并且不斷加重，導(dǎo)致患者預(yù)后效果不佳[9-11]。

人體中的血管內(nèi)皮具有保證血液流動(dòng)功能，保證凝血系統(tǒng)順利的功能，如若患者發(fā)生心腦血管疾病、感染或藥物等相關(guān)危險(xiǎn)因素影響，將會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生異常、受損，還會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞異常激活，從而使得凝血系統(tǒng)障礙[12-14]。根據(jù)不完全調(diào)查表明，TLR4/NF-κB 信號(hào)通路與血管內(nèi)皮損傷存在密切聯(lián)系，控制這個(gè)信號(hào)通路可以降低血管內(nèi)皮功能異常情況，從而保證機(jī)體正常功能。當(dāng)前，關(guān)于化療對于肺癌患者的血管內(nèi)皮功能影響的文獻(xiàn)不多，還需要進(jìn)一步研究其發(fā)生機(jī)制?；诖?，本進(jìn)行深入研究，選擇多例大鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，對部分大鼠實(shí)施肺癌建模，以TLR4/NF-κB信號(hào)通路作為一個(gè)重要切入點(diǎn)，分析作用機(jī)制，探究控制該信號(hào)通路是否可以避免血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生凋零[15-16]。

為了分析TLR4/NF-κB 信號(hào)通路在肺癌患者當(dāng)中的凝血功能以及血管內(nèi)皮損傷的作用，對此進(jìn)行研究，本文對經(jīng)過化療的大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮TLR4/NF-κBp65 地表達(dá)水平進(jìn)行檢測，結(jié)果表示，甲組TLR4、NF-κBp65 分別為（0.50±0.05）、（0.07±0.25），丙組TLR4、NF-κBp65 分別為（1.31±0.47）、（1.55±0.61），說明化療極有可能導(dǎo)致大鼠血管內(nèi)皮TLR4、NF-κB 信號(hào)通路發(fā)生活化，TLR4、NF-κB信號(hào)通路以往研究表示，惡性腫瘤患者自身就存在一定的血液高凝情況，化療后將會(huì)使這種情況進(jìn)一步加重，從上述試驗(yàn)中也可以看出，APTT、PT、TT 和FIB 屬于臨床中比較常用于凝血功能的指標(biāo)，APTT、PT、TT 縮短，F(xiàn)IB 含量增加說明患者的血液當(dāng)前正處于一個(gè)高凝狀態(tài)，以上指標(biāo)與患者預(yù)后以及血栓、腫瘤高凝狀態(tài)有著一定的相關(guān)性[17-18]。

本文研究結(jié)果表示，甲組APTT、PT、TT 比乙組更高，F(xiàn)IB 比乙組更低，丙組APTT、PT、TT 均比其他兩組更低，而FIB 高于其他兩組（P＜0.05）。說明化療對于大鼠的凝血功能肯定會(huì)造成紊亂，表現(xiàn)出高凝狀態(tài)。VEGF 可以提升患者血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生增殖、遷移以及血管新生，增加血管通透性，保障細(xì)胞增殖條件，為其創(chuàng)造一個(gè)舒適的環(huán)境，使其迅速增殖。根據(jù)結(jié)構(gòu)后的試劑盒檢測結(jié)果顯示，乙組大鼠血漿中VEGF 比甲組更高，丙組相比于乙組血漿中VEGF 明顯更高（P＜0.05）。這表現(xiàn)出化療肯定會(huì)讓大鼠血管內(nèi)皮功能發(fā)生損傷，極有可能會(huì)導(dǎo)致肺癌進(jìn)一步發(fā)展，影響患者預(yù)后。依據(jù)上述研究可以看出，丙組大鼠的血管內(nèi)皮功能與凝血功能損害程度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他兩組，說明化療的確可以對患者機(jī)體造成一定的傷害，可以據(jù)此進(jìn)行后續(xù)研究，找出一種恰當(dāng)?shù)母深A(yù)方法，減少機(jī)體損傷程度，幫助肺癌患者早日恢復(fù)健康。本次研究階段，還存在一些不足之處，由于各種因素，所以本次研究所選病例較少，同時(shí)研究時(shí)間較短，因此研究結(jié)果與實(shí)際結(jié)果會(huì)有少量偏差，但是對整體結(jié)果不會(huì)產(chǎn)生影響。在未來實(shí)驗(yàn)過程中，將會(huì)避免上述因素，將會(huì)延長研究時(shí)間，提升研究病例，提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果精準(zhǔn)度，為醫(yī)學(xué)發(fā)展獻(xiàn)上一份綿薄之力。

綜上所述，化療將會(huì)導(dǎo)致大鼠肺癌模型的凝血功能發(fā)生異常，進(jìn)一步影響到血管內(nèi)皮功能，使其受到損害，推測可能與大鼠體內(nèi)VEGF 含量被激活增加有關(guān)，可以據(jù)此進(jìn)行后續(xù)治療干預(yù)的研究，從而幫助更多的化療患者，不僅關(guān)注肺癌患者，還應(yīng)擴(kuò)大范圍，將更多接收化療的惡性腫瘤患者均納入試驗(yàn)中。本研究具有較高的借鑒意義，為后續(xù)這方面的發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。