缺氧缺血性腦病新生兒血清sLOX-1、VILIP-1的變化及臨床意義

陳曉玲，陳曉君，楊麗霞，邢舒旺，邱成英

新生兒缺氧缺血性腦?。╤ypoxie ischemic encephalopathy，HIE）是因窒息引起的新生兒腦組織缺氧缺血導(dǎo)致的腦部病變［1］。目前，臨床主要根據(jù)圍產(chǎn)期的缺氧病史、患兒的臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查等來診斷HIE，但部分患兒的臨床表現(xiàn)不明顯或缺乏特異性，而影像學(xué)檢查存在一定的滯后性，有漏診的可能，導(dǎo)致部分患兒錯(cuò)過最佳治療時(shí)間窗，進(jìn)而影響患兒預(yù)后［2］。近年研究顯示，鈣結(jié)合蛋白B 等血清生物標(biāo)志物可提示早期HIE 疾病，且其與腦損傷的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［3］?？扇苄阅貥友趸偷兔芏戎鞍资荏w1（soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1，sLOX-1）可在一定程度上反映機(jī)體的血管內(nèi)皮損傷和炎癥反應(yīng)狀態(tài)，是急性冠狀動(dòng)脈綜合征［4］、急性腦梗死［5］等多種缺血性心腦血管疾病的生物標(biāo)志物，但其與同樣由缺氧缺血引起的HIE 的關(guān)系尚不清楚。視椎蛋白樣蛋白（visininlike protein，VILIP）-1 是一種在神經(jīng)系統(tǒng)中高度表達(dá)的鈣離子結(jié)合蛋白，是新興的腦損傷生物標(biāo)志物，其表達(dá)水平與腦損傷程度關(guān)系密切［6］。目前，鮮有sLOX-1、VILIP-1 與HIE 關(guān)系的報(bào)道。本研究分析了HIE 患兒血清sLOX-1、VILIP-1 的變化及其對(duì)HIE 的診斷價(jià)值，以期為HIE 的臨床診斷提供新的思路。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2018 年1 月—2021 年3 月于四川大學(xué)華西三亞醫(yī)院住院治療的HIE患兒（HIE組）146例，男76例，女70例，平均胎齡（38.95±1.02）周，平均出生體質(zhì)量（3.04±0.51）kg；診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)［7］：（1）胎兒宮內(nèi)窘迫，或者在分娩時(shí)有明顯窒息史。（2）出生時(shí)有重度窒息。（3）新生兒出生后出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，且持續(xù)時(shí)間超過24 h。（4）排除電解質(zhì)紊亂等原因引起的抽搐以及宮內(nèi)感染等原因引起的腦損傷。排除標(biāo)準(zhǔn)：先天發(fā)育畸形、先天性心肺疾病患兒；先天性病毒或細(xì)菌感染者；染色體異?；純?；胎齡小于36周；自發(fā)性顱內(nèi)出血患兒；有遺傳代謝性疾病。將146例患兒分為輕度組（58例）、中度組（52例）和重度組（36例）。另外以同期在我院出生的正常新生兒50例作為對(duì)照組，男24例，女26例，平均胎齡（39.23±0.98）周，平均出生體質(zhì)量（3.11±0.65）kg。2組性別（χ2=0.245）、胎齡（t=1.692）及體質(zhì)量（t=0.779）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，新生兒家屬均簽署知情同意書。

1.2 觀察指標(biāo) 收集所有新生兒的性別、胎齡、出生體質(zhì)量、5 min Apgar評(píng)分，并于出生后24 h進(jìn)行新生兒行為神經(jīng)測(cè)定（neonatal behavioral neurological assessment，NBNA）［8］，該評(píng)分量表共包括行為能力、主動(dòng)肌張力、被動(dòng)肌張力、原始反射、一般反應(yīng)5個(gè)方面，滿分為40分，＜35分為異常。HIE組分別于出生后24 h（T1）、出生后48 h（T2）、出生后72 h（T3）抽取靜脈血3 mL，3 000 r∕min 離心10 min，提取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清sLOX-1、VILIP-1 的水平，試劑盒購(gòu)自上海信裕生物科技有限公司。對(duì)照組于出生后24 h（T1）抽取靜脈血3 mL，由于對(duì)照組新生兒不宜反復(fù)采血，因此以T1時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)代替48 h（T2）和72 h（T3）數(shù)據(jù)。

1.3 聯(lián)合診斷方法 取2 個(gè)指標(biāo)各自的診斷閾值，2 個(gè)指標(biāo)同為陽(yáng)性則為陽(yáng)性，同為陰性則為陰性，出現(xiàn)一陰一陽(yáng)則進(jìn)行復(fù)測(cè)。若復(fù)測(cè)結(jié)果不變，則結(jié)合專業(yè)實(shí)踐及醫(yī)師觀點(diǎn)進(jìn)行診斷并側(cè)重考慮：陽(yáng)性診斷參考敏感度較高指標(biāo)，陰性診斷參考特異度較高指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，2 組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多時(shí)點(diǎn)觀測(cè)資料行重復(fù)測(cè)量方差分析；計(jì)數(shù)資料以例或例（%）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)。采用受試者工作特征（ROC）曲線分析T1時(shí)間點(diǎn)血清sLOX-1、VILIP-1 對(duì)HIE 的診斷價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組5 min Apgar 評(píng)分、NBNA 評(píng)分比較 與對(duì)照組比較，HIE 組5 min Apgar 評(píng)分、NBNA 評(píng)分均降低（P＜0.01），見表1。

Tab.1 Comparison of 5 min Apgar score and NBNA score between the two groups表1 HIE組和對(duì)照組5 min Apgar評(píng)分和NBNA評(píng)分比較（分，±s）

Tab.1 Comparison of 5 min Apgar score and NBNA score between the two groups表1 HIE組和對(duì)照組5 min Apgar評(píng)分和NBNA評(píng)分比較（分，±s）

＊＊P＜0.01。

組別對(duì)照組HIE組t n 50 146 5 min Apgar評(píng)分8.79±1.02 3.83±1.56 20.980＊＊NBNA評(píng)分37.61±1.24 32.15±2.48 14.924＊＊

2.2 HIE 組和對(duì)照組血清sLOX-1、VILIP-1 水平比較 隨時(shí)間延續(xù)，HIE組血清sLOX-1、VILIP-1水平均降低（P＜0.05）；與對(duì)照組比較，HIE 組各時(shí)點(diǎn)VILIP-1水平及T1、T2時(shí)間點(diǎn)的血清sLOX-1均增高（P＜0.01），見表2。

2.3 不同疾病嚴(yán)重程度的HIE 患兒血清sLOX-1、VILIP-1 水平比較 不同疾病嚴(yán)重程度的HIE 與時(shí)間效應(yīng)對(duì)血清sLOX-1 存在交互作用（P＜0.05），對(duì)血清VILIP-1 水平無交互作用影響。隨時(shí)間延續(xù)，各組血清sLOX-1、VILIP-1 水平均降低，各時(shí)點(diǎn)輕、中及重度組血清sLOX-1、VILIP-1 水平依次升高，見表3。

2.4 HIE 患兒T1 時(shí)間點(diǎn)血清sLOX-1、VILIP-1 與5 min Apgar評(píng)分、NBNA評(píng)分的相關(guān)性分析 Pearson分析顯示，HIE 患兒血清sLOX-1 與5 min Apgar 評(píng)分、NBNA評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.308、-0.412，P＜0.05），VILIP-1 與5 min Apgar 評(píng)分、NBNA 評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)（r分別為-0.352、-0.424，P＜0.05）。

2.5 血清sLOX-1、VILIP-1（T1時(shí)間）對(duì)HIE的診斷價(jià)值分析 血清sLOX-1、VILIP-1 對(duì)HIE 均有較高的診斷價(jià)值，兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)HIE的診斷效能較優(yōu)，見表4、圖1。

3 討論

研究顯示，亞低溫治療可較好地改善HIE 患兒的預(yù)后，但治療時(shí)間窗較短，最適宜在生后6 h 內(nèi)進(jìn)行，且越早越好［9-10］。重度HIE在早期就有明顯的癥狀，易于診斷，但輕、中度HIE的早期癥狀不明顯，影像學(xué)檢查一般在72 h后才能發(fā)現(xiàn)腦水腫等顱腦病理改變，存在一定的滯后性［11］。HIE 患兒受損的腦組織可在短時(shí)間內(nèi)分泌特定的生物標(biāo)志物進(jìn)入腦脊液或血液，這些標(biāo)志物通常可在一定程度上反映腦損傷程度，并對(duì)疾病的診斷、治療及預(yù)后的評(píng)估有一定輔助作用［12］。

凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體1（lectinlike oxidized low density lipoprotein receptor-1，LOX-1）是氧化型低密度脂蛋白的特異性受體，兩者結(jié)合可引起血管內(nèi)皮功能障礙，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成［13］。LOX-1 位于胞外近膜區(qū)的結(jié)構(gòu)域可以被切割水解成sLOX-1 并釋放入血，血中的sLOX-1 水平可反映LOX-1 的表達(dá)情況［14］。VILIP-1 在小腦、前腦、尾狀核、海馬體等腦組織中廣泛表達(dá)，并參與調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞的凋亡及修復(fù)等［15］。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，T1、T2時(shí)間點(diǎn)的血清sLOX-1以及各時(shí)點(diǎn)的VILIP-1在HIE 中表達(dá)升高，提示sLOX-1和VILIP-1可能參與了疾病的發(fā)生、發(fā)展。另一方面，各時(shí)點(diǎn)輕、中及重度組血清sLOX-1、VILIP-1水平依次升高，提示sLOX-1和VILIP-1可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)，兩者有潛力成為HIE 的新型生物標(biāo)志物。HIE會(huì)導(dǎo)致氧自由基增多、氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，引起體內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平升高，進(jìn)而使得氧化型低密度脂蛋白大量產(chǎn)生［16］。Yao 等［17］研究顯示，氧化型低密度脂蛋白可促進(jìn)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶磷酸化，上調(diào)LOX-1的表達(dá)，此外，脂質(zhì)過氧化水平升高可促進(jìn)白細(xì)胞介素6等炎癥因子水平上升，而白細(xì)胞介素6濃度依賴性地使LOX-1 的表達(dá)上調(diào)，這可能是血清sLOX-1在HIE中表達(dá)升高的原因。VILIP-1在大腦組織中高度表達(dá)，當(dāng)腦部組織受到缺血缺氧性損傷時(shí)，表達(dá)VILIP-1 的細(xì)胞會(huì)因受損而釋放大量的VILIP-1到細(xì)胞外，進(jìn)而導(dǎo)致血中的VILIP-1水平上升［18］。相關(guān)研究也證實(shí)，VILIP-1 在HIE 大鼠模型中呈高表達(dá)［19］。本研究還顯示，隨時(shí)間延續(xù)，HIE組血清sLOX-1、VILIP-1水平呈降低趨勢(shì)，提示通過臨床干預(yù)使得腦組織的缺血、缺氧性損傷得到控制、改善，降低了血清sLOX-1、VILIP-1 水平，尤其是HIE組T3時(shí)間點(diǎn)的sLOX-1水平與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可見隨著臨床治療sLOX-1水平的下降速度較快。Apgar評(píng)分是反映新生兒窒息情況的評(píng)分，而NBNA評(píng)分則可反映新生兒行為神經(jīng)功能。本研究通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，HIE 患兒血清sLOX-1、VILIP-1 與5 min Apgar 評(píng)分、NBNA 評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)，這也從側(cè)面證實(shí)sLOX-1、VILIP-1的表達(dá)與新生兒窒息嚴(yán)重程度和神經(jīng)功能受損情況有關(guān)。

Tab.2 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the two groups表2 2組血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

Tab.2 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the two groups表2 2組血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

＊＊P＜0.01；A與T1比較，B與T2比較，P＜0.05。

組別對(duì)照組HIE組t n 50 146 sLOX-1（ng∕L）T1 398.38±106.82 846.51±252.85 12.150＊＊T2 398.38±106.82 484.56±148.22A 3.786＊＊T3 398.38±106.82 373.59±98.66AB 1.501 F-279.441＊＊VILIP-1（μg∕L）T1 0.36±0.12 0.88±0.19 18.136＊＊T2 0.36±0.12 0.74±0.15A 16.215＊＊T3 0.36±0.12 0.54±0.14AB 8.123＊＊F-166.951＊＊

Tab.3 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the three groups of HIE children表3 按臨床分度的3組HIE患兒血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

Tab.3 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the three groups of HIE children表3 按臨床分度的3組HIE患兒血清sLOX-1、VILIP-1比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與輕度組比較，b與中度組比較，A與T1比較，B與T2比較，P＜0.05。

組別輕度組中度組重度組F交互∕F組間∕F時(shí)間n 58 52 36 T1 465.74±136.53 912.08±353.60a 1 371.12±588.52ab 25.637＊＊∕135.434＊＊∕25.637＊＊sLOX-1（ng∕L）T2 355.32±98.24A 524.79±157.26aA 644.25±190.76abA T3 269.39±65.73AB 394.59±85.91aAB 510.77±91.10abAB T1 0.74±0.14 0.87±0.17a 1.12±0.24ab 1.629∕156.809＊＊∕173.922＊＊VILIP-1（μg∕L）T2 0.62±0.12A 0.71±0.13aA 0.97±0.20abA T3 0.44±0.11AB 0.52±0.14aAB 0.71±0.18abAB

Tab.4 ROC analysis of serum sLOX-1 and VILIP-1 in the diagnosis of HIE表4 血清sLOX-1、VILIP-1診斷HIE的ROC分析

Fig.1 ROC curves of serum sLOX-1 and VILIP-1 in the diagnosis of HIE圖1 血清sLOX-1、VILIP-1診斷HIE的ROC曲線

臨床上，新生兒出生24 h（T1）時(shí)是最重要的常規(guī)觀測(cè)時(shí)點(diǎn)，且HIE 患兒和正常新生兒血清sLOX-1、VILIP-1 兩個(gè)指標(biāo)數(shù)據(jù)差別明顯，故本研究采用T1 時(shí)點(diǎn)的sLOX-1、VILIP-1 資料。經(jīng)ROC 分析發(fā)現(xiàn)，血清sLOX-1、VILIP-1對(duì)HIE均有較高的診斷價(jià)值，均AUC＞0.75，兩者聯(lián)合診斷時(shí)敏感度和約登指數(shù)均有明顯提升，診斷價(jià)值有進(jìn)一步的提高。

綜上所述，HIE患者血清sLOX-1、VILIP-1表達(dá)水平升高，且其表達(dá)水平與病情嚴(yán)重程度和神經(jīng)功能受損情況有關(guān)，兩者聯(lián)合對(duì)HIE 有較高的診斷價(jià)值。監(jiān)測(cè)血清sLOX-1、VILIP-1 水平對(duì)HIE 的早期診斷、病情評(píng)估具有重要意義。