藥用真菌桑黃抗氧化物質(zhì)及其活性研究

宋吉玲，王偉科，閆 靜，陸 娜，周祖法，袁衛(wèi)東

(杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024)

桑黃是一類傳統(tǒng)藥用真菌的統(tǒng)稱，隸屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、銹革孔菌目(Hymenochaetales)、銹革孔菌科(Hymenochaetaceae)、桑黃孔菌屬(Sanghuangporus)[1]。在《藥性論》、《本草綱目》和《神農(nóng)本草經(jīng)》等著作中均有桑黃及其藥效的明確記載，也被現(xiàn)代人稱為“森林黃金”[2-4]?，F(xiàn)代研究表明，桑黃提取物在提高免疫力、抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和增強(qiáng)抗腫瘤活性方面具有顯著效果，是目前公認(rèn)的抗癌效果較好的一種珍稀藥用真菌，已成為藥用真菌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)[5]。

桑黃除了具有備受矚目的抗腫瘤功效外，較好的抗氧化活性也是其特色之一[6-7]。研究表明，抗氧化作用過程是預(yù)防諸多慢性疾病和衰老的關(guān)鍵步驟，因?yàn)闄C(jī)體在正常生長發(fā)育過程中所產(chǎn)生的自由基或某些氧化劑對細(xì)胞和組織有分解、破壞作用，進(jìn)而影響代謝功能，并引起不同的健康問題[8-10]。因此，消除人體內(nèi)過多的氧化自由基，進(jìn)而會對許多氧化自由基所引起的相關(guān)疾病起到一定的預(yù)防作用，如某些癌癥[11]、心血管病[12]、糖尿病[13]、老年癡呆[14]、關(guān)節(jié)炎[15]等常見的老年疾病[16-17]。近年來，隨著桑黃孔菌屬(Sanghuangporus)屬名與分類的進(jìn)一步明確[1,18]，桑黃受到越來越多的關(guān)注，而有關(guān)桑黃抗氧化活性的研究主要圍繞少數(shù)幾個種類展開，如王一菲等[19]發(fā)現(xiàn)，忍冬桑黃(S.lonicericola(Parmasto)L.W.Zhou & Y.C.Dai)和櫟生桑黃(S.quercicolaLin Zhu & B.K.Cui)均具有較強(qiáng)的抗氧化能力；鄭飛等[20]的研究結(jié)果表明，桑黃(S.sanghuangSheng H.Wu, L.W.Zhou & Y.C.Dai)在清除羥自由基、超氧陰離子、DPPH自由基和ABTS自由基方面表現(xiàn)出較強(qiáng)的能力，是一種較好的清除自由基的天然原料。桑黃抗氧化活性強(qiáng)弱與活性成分的種類和含量有密切的關(guān)聯(lián)，且不同品種之間亦有所差異[21]。因此本研究在種質(zhì)資源收集、鑒定和篩選工作的基礎(chǔ)上[3,22-23]，進(jìn)一步對市場上流通較多并可栽培的楊樹桑黃(S.vaninii(Ljub.) L.W. Zhou & Y.C. Dai)、鮑姆桑黃(S.baumii(Pilát) L.W. Zhou & Y.C. Dai)和桑樹桑黃(S.sanghuang)進(jìn)行研究，測定發(fā)酵液多糖、多酚、黃酮和抗壞血酸含量，以及DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力、總抗氧化能力和超氧化物歧化酶(SOD)活性，分析不同桑黃品種抗氧化活性與抗氧化物質(zhì)含量的關(guān)系，旨在為桑黃種質(zhì)資源的開發(fā)與應(yīng)用提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌 株 供試菌株為楊樹桑黃(S.vaninii)、鮑姆桑黃(S.baumii)和桑樹桑黃(S.sanghuang)，保藏于杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院。

1.1.2 試 劑 苯酚、硫酸、乙醇、齊墩果酸、甲醇、葡萄糖、瓊脂、KH2PO4、ZnSO4、MgSO4·7H2O、酵母浸粉、冰醋酸和高氯酸，均為分析純試劑；多酚、黃酮、抗壞血酸、DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力、總抗氧化能力、超氧陰離子清除能力、羥自由基清除能力和SOD活性等試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 培養(yǎng)基 PDA固體培養(yǎng)基組成為：土豆200 g/L(煮水，過濾)、葡萄糖20.0 g/L、酵母浸粉5.0 g/L、瓊脂粉15.0 g/L、KH2PO41.0 g/L，pH自然，121 ℃ 高壓蒸汽滅菌30 min，取出置于室溫冷卻，備用。PDA液體培養(yǎng)基中，除不加瓊脂粉外，其余成分與PDA固體培養(yǎng)基相同。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計

從活化的PDA固體培養(yǎng)基中各取5個1 cm大小菌塊，接種于裝有100 mL液體培養(yǎng)基的三角瓶(250 mL)中，28 ℃、140 r/min振蕩培養(yǎng)6～8 d，使用勻漿機(jī)將其制成懸液，充分振蕩，以5.0%(體積分?jǐn)?shù))的接種量接種到裝有100 mL PDA液體培養(yǎng)基的三角瓶(250 mL)中，28 ℃、140 r/min振蕩培養(yǎng)，設(shè)3個重復(fù)[18]。每隔3 d取樣1次，共測定7次。發(fā)酵液經(jīng)4 ℃ 冷凍離心(12 000 r/min，10 min)后，于-80 ℃ 冰箱保存，用于測定抗氧化物質(zhì)含量及抗氧化活性。pH計測量溶液pH值。

每隔3 d取50 mL液體培養(yǎng)混合物，經(jīng)3層紗布過濾后，蒸餾水沖洗多次，于50 ℃烘箱烘至恒質(zhì)量，稱質(zhì)量并統(tǒng)計生物量，同步觀察發(fā)酵液顏色的變化。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 抗氧化物質(zhì)的測定 多糖含量采用苯酚-硫酸法[16,23-24]測定；多酚、黃酮、抗壞血酸含量和SOD活性的測定按照試劑盒說明書的步驟進(jìn)行，以標(biāo)準(zhǔn)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算相應(yīng)的回歸方程，分別為y=182.395 8x+2.214 3(R2=0.998 1)，y=28.277 2x+0.067 1(R2=0.998 3)，y=2 205.652 2x+10.013 6(R2=0.998 0)，y=5.476 4x+0.072 7(R2=0.998 0)，測定樣品的吸光度(測定波長均為450 nm)，計算樣品中的多糖、多酚、黃酮、抗壞血酸含量和SOD活性。

1.3.2 抗氧化物質(zhì)活性的測定 (1) DPPH自由基清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，先吸取100 μL發(fā)酵液，然后加入900 μL提取液，旋渦振蕩混勻，室溫10 000 r/min離心10 min，取上清，置冰上待測。取配制好的發(fā)酵液溶液10 μL，加入190 μL工作液，混勻后室溫避光靜置30 min，測定515 nm 處的吸光度，計算發(fā)酵液對DPPH自由基的清除能力[16]。

(2)ABTS自由基清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，測定734 nm處的吸光度，計算發(fā)酵液對ABTS自由基的清除能力[25]。

(3)羥自由基清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，在200 μL發(fā)酵液中依次加入各試劑，充分混勻，37 ℃保溫20 min，吸取200 μL混勻后的樣品溶液于96孔板中，測定510 nm處的吸光度，計算發(fā)酵液的羥自由基清除能力[25]。

(4)超氧陰離子清除能力。按照試劑盒說明書的步驟，取50 μL發(fā)酵液依次加入各試劑，充分混勻，室溫避光靜置5 min使之充分反應(yīng)，于560 nm處采用酶標(biāo)儀測定吸光度。發(fā)酵液處理完成后立即進(jìn)行測定，或者低溫保存不超過24 h，計算樣品的超氧陰離子清除能力[16]。

(5)亞鐵離子螯合能力。按照試劑盒說明書的步驟，移取發(fā)酵液50 μL，加入150 μL工作液，充分混勻后，于562 nm處測定吸光度，計算發(fā)酵液的亞鐵離子螯合能力[16]。

上述指標(biāo)的計算公式為：

清除能力或螯合能力=[1-(標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值-發(fā)酵液OD值)/標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值]×100%。

(6)總抗氧化能力。按照試劑盒說明書的步驟，取10 μL發(fā)酵液，加入20 μL應(yīng)用液和170 μL ABTS工作液，充分混勻，室溫反應(yīng)6 min，波長405 nm，酶標(biāo)儀讀取各孔OD值，計算發(fā)酵液的總抗氧化能力[25]。

總抗氧化能力=樣品OD值/標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值×標(biāo)準(zhǔn)溶液的抗氧化能力(8 U/mL)×V。

式中：V為提取液體積。

(7)鐵離子還原能力。按照試劑盒說明書的步驟，取40 μL發(fā)酵液，先后依次加入工作液共計340 μL，充分混勻，10 min內(nèi)于700 nm處測定吸光度，計算發(fā)酵液的鐵離子還原能力[16]。

鐵離子還原能力=樣品OD值/標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值×標(biāo)準(zhǔn)溶液的鐵離子還原能力(12 U/mL)×V。

式中：V為提取液體積。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，利用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)、t檢驗(yàn)和LSD檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)性分析法，以3個菌株各指標(biāo)的平均值為基準(zhǔn)，分析抗氧化物質(zhì)含量與其抗氧化活性間的相關(guān)性[23]。運(yùn)用Qrigin 8.0軟件制圖[25]。

2 結(jié)果與分析

2.1 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中菌絲體生物量和pH的變化

由圖1和圖2可見，在液體培養(yǎng)過程中，3個桑黃菌株的菌絲生物量均呈先上升后下降的趨勢，并隨著培養(yǎng)時間的延長逐漸由淺黃色變?yōu)辄S褐色，直至黑褐色。培養(yǎng)后3～6 d，菌絲生物量均呈緩慢增長模式；6～12 d則呈現(xiàn)快速增長模式，其中楊樹桑黃菌株由0.127 g增加至0.337 g，鮑姆桑黃由0.132 g增加至0.369 g，桑樹桑黃由0.158 g增加至0.396 g；培養(yǎng)18 d時，菌絲生物量均達(dá)到最大，此時楊樹桑黃菌絲生物量略低于其余2個菌株；之后伴隨著菌絲自溶，菌株生物量均有所下降。

圖1 3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中的菌絲體生物量變化Fig.1 Changes in mycelial biomass of three Sanghuangporus strains during culture

圖2 3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中顏色的變化Fig.2 Changes in colour of three Sanghuangporus strains during liquid culture

3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中pH的變化(圖3)顯示，3個桑黃菌株液體培養(yǎng)基隨時間推移逐漸轉(zhuǎn)酸，接種初期pH為6.03～6.08，隨著培養(yǎng)時間的延長，至21 d時pH下降至4.52～4.80，這可能是由于菌株分泌的次級代謝產(chǎn)物逐漸增加，使得培養(yǎng)液pH逐漸下降。

圖3 3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基pH的變化Fig.3 Changes in pH of medium in liquid culture of threeSanghuangporus strains

2.2 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中多糖的變化

多糖是一類由多個醛糖或酮糖通過糖苷鍵聚合而成的高分子化合物，也是目前研究最為深入的活性成分[26-27]。由圖4可知，3個桑黃菌株發(fā)酵液中的多糖含量均呈先上升后下降的趨勢，其中楊樹桑黃和鮑姆桑黃的多糖含量略高于桑樹桑黃，變化趨勢與課題組前期研究結(jié)果[23]相近，培養(yǎng)15 d時，3個桑黃菌株發(fā)酵液中的多糖含量均達(dá)到最高，其中楊樹桑黃為0.370 mg/mL、鮑姆桑黃為0.371 mg/mL，桑樹桑黃為0.321 mg/mL。

2.3 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中多酚的變化

多酚是廣泛存在于植物和高等真菌體內(nèi)的芳香族羥基衍生物的總稱，其在抗腫瘤、抑菌、消炎和抗氧化方面具有較好的生理活性[16,19-20]。3個桑黃菌株液體培養(yǎng)過程中多酚含量的變化見圖5。由圖5可見，楊樹桑黃和桑樹桑黃的多酚含量在培養(yǎng)18 d時達(dá)到最高，均為0.416 μg/L；但二者變化趨勢有別，楊樹桑黃在培養(yǎng)開始后的前9天多酚含量逐漸降低，隨后快速上升，而桑樹桑黃在培養(yǎng)12 d后多酚含量才開始逐漸增加；鮑姆桑黃多酚含量在培養(yǎng)前9天時快速上升，隨后有所下降并在18 d時達(dá)到最大(0.396 μg/L)。培養(yǎng)18 d后，3個桑黃菌株多酚含量均有所下降。在整個培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃的多酚含量幾乎一直高于鮑姆桑黃和桑樹桑黃(9 d除外)，說明該菌株多酚分泌能力較強(qiáng)。

圖5 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中多酚的變化Fig.5 Changes in polyphenol contents of three Sanghuangporus strains during culture

2.4 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中黃酮的變化

黃酮類物質(zhì)是一類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物和真菌的次級代謝產(chǎn)物中，具有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血壓、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等諸多功能[20,28-29]。由圖6可見，隨著培養(yǎng)時間的延長，3個桑黃菌株的黃酮含量均呈不斷上升趨勢。楊樹桑黃在培養(yǎng)后的3～15 d，黃酮含量由40.63 ng/L上升至52.837 ng/L，于培養(yǎng)21 d時達(dá)到最大值，為53.543 ng/L。培養(yǎng)3～9 d時，鮑姆桑黃和桑樹桑黃的黃酮含量分別由41.667，48.357 ng/L上升至49.257，51.187 ng/L；12 d時有所下降，分別在15和18 d達(dá)最大值，為56.467和57.503 ng/L。綜合來看，桑樹桑黃黃酮含量明顯優(yōu)于其他2個菌株，而楊樹桑黃和鮑姆桑黃在培養(yǎng)初期差異不明顯，培養(yǎng)后期鮑姆桑黃明顯優(yōu)于楊樹桑黃。

2.5 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中抗壞血酸的變化

圖7顯示，在整個培養(yǎng)過程中，3個桑黃菌株的抗壞血酸含量整體均呈現(xiàn)先緩慢上升再下降又上升的趨勢，其中楊樹桑黃的抗壞血酸含量一直高于其他2個菌株，并在培養(yǎng)的第15天時達(dá)到最大值，為28.899 μmol/L；鮑姆桑黃和桑樹桑黃均于21 d時達(dá)到最大值，分別為25.328和26.435 μmol/L。

圖7 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中抗壞血酸的變化Fig.7 Changes in ascorbic acid contents of threeSanghuangporus strains during culture

2.6 3個桑黃菌株的DPPH自由基清除能力

抗氧化能力是指對機(jī)體內(nèi)ROS等氧化物質(zhì)的清除能力[16]。由圖8可見，在21 d的液體培養(yǎng)過程中，3個桑黃菌株的DPPH自由基清除能力整體均呈先上升后下降趨勢，其中楊樹桑黃在培養(yǎng)3～15 d時緩慢增大，并在培養(yǎng)15 d時達(dá)到最大，為87.71%；鮑姆桑黃除在培養(yǎng)的前6天有所下降外，其余時間一直呈穩(wěn)定增長趨勢，于18 d達(dá)到最大值，為95.83%；桑樹桑黃在培養(yǎng)的3～9 d時，DPPH自由基清除能力顯著提高，9～12 d又快速下降，隨后又緩慢升高，至18 d達(dá)到最大值，為81.92%。綜合分析來看，楊樹桑黃的DPPH自由基清除能力整體優(yōu)于桑樹桑黃和鮑姆桑黃，但在培養(yǎng)18 d時，以鮑姆桑黃的DPPH自由基清除能力最高。

2.7 3個桑黃菌株的ABTS自由基清除能力

ABTS是一種水溶性自由基引發(fā)劑，氧化后生成藍(lán)綠色的ABTS+陽離子自由基，在抗氧化劑作用下，ABTS+還原成無色的ABTS，且抗氧化能力越強(qiáng)，顏色越淡[16]。圖9顯示，在21 d液體培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃和桑樹桑黃的ABTS自由基清除能力總體均呈先上升后下降的趨勢，分別于18和15 d達(dá)到最大，為88.22%，78.61%；鮑姆桑黃的ABTS自由基清除能力總體也呈先上升后下降的趨勢，于12 d時達(dá)到最大，為75.09%。從整個培養(yǎng)過程來看，楊樹桑黃的ABTS自由基清除能力明顯優(yōu)于鮑姆桑黃和桑樹桑黃。

圖9 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中ABTS自由基清除能力的變化 Fig.9 Changes in ABTS free radical scavenging ability ofthree Sanghuangporus strains during culture

2.8 3個桑黃菌株的羥自由基清除能力

羥自由基是人體新陳代謝過程中產(chǎn)生的毒性最強(qiáng)、危害最大的一種自由基，其可以使組織中的糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)遭受氧化性損傷和破壞，導(dǎo)致細(xì)胞壞死或突變[30]。圖10顯示，整個培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃菌株的羥自由基清除能力在培養(yǎng)3～6 d變化不大，隨著培養(yǎng)時間的延長，其清除能力呈逐漸上升趨勢，于15 d時達(dá)到最大，為87.61%；鮑姆桑黃的羥自由基清除能力呈現(xiàn)階梯式上漲趨勢，于21 d時達(dá)到最大，為90.08%；桑樹桑黃的羥自由基清除能力在培養(yǎng)6～9 d急劇下降，隨后又呈快速上升趨勢，并在15 d達(dá)到最大，為94.06%。綜合分析來看，桑樹桑黃的羥自由基清除能力整體優(yōu)于楊樹桑黃和鮑姆桑黃。

2.9 3個桑黃菌株的超氧陰離子清除能力

超氧陰離子作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，與機(jī)體衰老和病變密切相關(guān)[31-32]。圖11顯示，3個桑黃菌株的超氧陽離子清除能力整體均呈先上升后下降趨勢，且均于15 d時達(dá)到最大，其中楊樹桑黃的超氧陰離子清除能力最大，為84.30%；鮑姆桑黃菌株的超氧陰離子清除能力整體低于楊樹桑黃和桑樹桑黃，為76.07%；桑樹桑黃的超氧陰離子清除能力則隨著時間延長而呈階梯式上漲，達(dá)到最大時為83.38%。綜合分析來看，楊樹桑黃的超氧陰離子清除能力整體優(yōu)于桑樹桑黃和鮑姆桑黃。

圖11 桑黃菌株培養(yǎng)過程中超氧陰離子清除能力的變化Fig.11 Changes in superoxide anion scavenging ability of three Sanghuangporus strains during culture

2.10 3個桑黃菌株的總抗氧化能力

總抗氧化能力是指對機(jī)體內(nèi)ROS的清除能力，過多的ROS會導(dǎo)致大量的細(xì)胞損傷并產(chǎn)生毒性，因此，消除過多的ROS對于生物體的健康十分重要[19,33]。由圖12可見，楊樹桑黃在培養(yǎng)3～9 d時保持穩(wěn)定增長，之后快速提升，于18 d達(dá)到最強(qiáng)，為6.61 U/mL；鮑姆桑黃培養(yǎng)9 d后的總抗氧化能力穩(wěn)定增強(qiáng)，于21 d時達(dá)到最大，為6.47 U/mL；桑樹桑黃的總抗氧化能力整體呈先上升后下降再上升的趨勢，于15 d時最低，在21 d時達(dá)到最大，為6.85 U/mL。綜合分析來看，桑樹桑黃在總抗氧化能力方面明顯優(yōu)于楊樹桑黃和鮑姆桑黃。

2.11 3個桑黃菌株的鐵離子還原能力

鐵離子還原能力是Fe3+被抗氧化物質(zhì)還原成Fe2+，以供機(jī)體正常生長發(fā)育的能力[34-35]。由圖13可見，楊樹桑黃的鐵離子還原能力隨培養(yǎng)時間延長呈先增強(qiáng)后減弱的趨勢，于15 d達(dá)到最大值，為8.89 U/mL；鮑姆桑黃的鐵離子還原能力在培養(yǎng)9 d前明顯高于桑樹桑黃和楊樹桑黃，于18 d時達(dá)到最大值，為9.77 U/mL；桑樹桑黃的鐵離子還原能力在培養(yǎng)12 d后明顯提升，并在18 d達(dá)到最大值，為9.45 U/mL。綜合分析來看，鮑姆桑黃的鐵離子還原能力整體優(yōu)于桑樹桑黃和楊樹桑黃。

圖13 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中鐵離子還原能力的變化Fig.13 Changes in iron reduction ability of threeSanghuangporus strains during culture

2.12 3個桑黃菌株的亞鐵離子螯合能力

由圖14可知，在整個培養(yǎng)過程中，楊樹桑黃和鮑姆桑黃的亞鐵離子螯合能力整體優(yōu)于桑樹桑黃(18 d除外)，整體均表現(xiàn)出先上升后下降的趨勢。培養(yǎng)3～9 d時3個菌株處于平穩(wěn)狀態(tài)，均于12 d時均達(dá)到最大值，此時楊樹桑黃、桑樹桑黃和鮑姆桑黃的亞鐵離子螯合能力分別為82.53%，79.73%和80.1%，之后均有所下降。

2.13 3個桑黃菌株的超氧化物歧化酶(SOD)活性

SOD是催化去除ROS的重要酶類，在生物體的生長、代謝、抗氧化和氧化還原調(diào)節(jié)中起主要作用[19,33]。由圖15可見，楊樹桑黃的SOD活性在培養(yǎng)的3～6 d有所下降，之后增長迅速，于18 d時達(dá)到最大值，為12.75 U/mL；桑樹桑黃和鮑姆桑黃SOD活性在培養(yǎng)3～12 d呈浮動增長(先升后降)，之后均迅速增強(qiáng)，均在18 d達(dá)到最強(qiáng)，分別為12.34和11.43 U/mL。綜合分析來看，楊樹桑黃的SOD活性整體優(yōu)于鮑姆桑黃和桑樹桑黃。

圖15 3個桑黃菌株培養(yǎng)過程中超氧化物歧化酶活性的變化Fig.15 Changes in activity of superoxide dismutase of three Sanghuangporus strains during culture

2.14 3個桑黃菌株抗氧化物質(zhì)與抗氧化活性的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果(表1)表明，桑黃真菌活性成分與其抗氧化活性有一定的相關(guān)性，其中多糖含量與DPPH自由基清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力呈極顯著正相關(guān)，與ABTS自由基清除能力、超氧陰離子清除能力呈顯著正相關(guān)；多酚含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、鐵離子還原能力、超氧陰離子清除能力、亞鐵離子螯合能力和SOD活性呈極顯著正相關(guān)；黃酮含量與鐵離子還原能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和總抗氧化能力呈極顯著正相關(guān)，與ABTS自由基清除能力和SOD活性呈顯著正相關(guān)；抗壞血酸含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和SOD活性呈極顯著正相關(guān)，與鐵離子還原能力呈顯著正相關(guān)。

表1 桑黃真菌抗氧化物質(zhì)與其抗氧化活性的相關(guān)性Table 1 Correlations between antioxidants and their antioxidant activity of Sanghuangporus strains

桑黃菌株活性成分中與ABTS自由基清除能力和超氧陰離子清除能力相關(guān)性最強(qiáng)的為抗壞血酸含量，相關(guān)系數(shù)分別為0.819和0.855；與鐵離子還原能力和超氧化物歧化酶活性相關(guān)性最強(qiáng)的為多酚含量，相關(guān)系數(shù)分別為0.642和0.759；與羥自由基清除能力和總抗氧化能力相關(guān)性最強(qiáng)的為黃酮含量，相關(guān)系數(shù)分別為0.790和0.765；與亞鐵離子螯合能力相關(guān)性最強(qiáng)的為多糖含量，相關(guān)系數(shù)為0.606。

3 討 論

桑黃作為一類具有重要藥用價值的大型真菌，因其具有多種生理活性且無毒副作用而受到廣泛的關(guān)注。本研究發(fā)現(xiàn)，楊樹桑黃、鮑姆桑黃和桑樹桑黃3個桑黃菌株均具有較強(qiáng)的抗氧化能力，但在不同抗氧化能力指標(biāo)及強(qiáng)度上的表現(xiàn)不盡相同。隨著培養(yǎng)時間的延長，其抗氧化能力總體呈現(xiàn)階梯上升趨勢，各抗氧化指標(biāo)多在培養(yǎng)12～18 d時達(dá)到峰值。3個桑黃菌株亞鐵離子螯合能力均于培養(yǎng)12 d時達(dá)到最強(qiáng)；培養(yǎng)15 d時，楊樹桑黃清除羥自由基和超氧陰離子的能力達(dá)到最強(qiáng)；培養(yǎng)18 d時，楊樹桑黃ABTS自由基清除能力和SOD活性達(dá)到最大，鮑姆桑黃的鐵離子還原能力和DPPH自由基清除能力也達(dá)到最強(qiáng)，與此同時桑樹桑黃和楊樹桑黃的總抗氧化能力亦達(dá)到峰值。綜合分析可知，桑黃菌株在培養(yǎng)12～18 d時抗氧化能力最強(qiáng)，這與鄭飛等[20]“桑黃清除DPPH自由基能力在培養(yǎng)初期(第2天)最強(qiáng)”的研究結(jié)果不同，可能與菌株來源差異或培養(yǎng)條件不同有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究。

桑黃的次級代謝產(chǎn)物含量與抗氧化能力具有一定的相關(guān)性[27]。本研究發(fā)現(xiàn)，楊樹桑黃的多酚和抗壞血酸含量較高，鮑姆桑黃菌株的多糖含量較高，桑樹桑黃的黃酮含量較高。相關(guān)分析結(jié)果表明，多酚含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、鐵離子還原能力、超氧陰離子清除能力、亞鐵離子螯合能力和SOD活性呈極顯著正相關(guān)；而黃酮含量與鐵離子還原能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和總抗氧化能力呈極顯著正相關(guān)；抗壞血酸含量與DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羥自由基清除能力、超氧陰離子清除能力和SOD活性呈極顯著正相關(guān)；多糖含量與DPPH自由基清除能力、鐵離子還原能力、亞鐵離子螯合能力呈極顯著正相關(guān)。綜合分析來看，多酚、黃酮和抗壞血酸為抗氧化能力的主要活性物質(zhì)，多糖次之，這與應(yīng)瑞峰等[36]、崔詩遙等[37]、錢驊等[38]及王偉科等[39]對桑黃子實(shí)體的研究結(jié)果相一致。與桑黃(S.sanghuang)[20]、櫟生桑黃(S.quercicola)[19]和忍冬桑黃(S.lonicericol)[19]3個菌株的活性物質(zhì)含量相比，本研究3個桑黃菌株的多糖含量相對較高，多酚、黃酮和抗壞血酸含量相對較低，可能是由于供試菌株生長狀況差異導(dǎo)致不同代謝產(chǎn)物的合成有所偏差。