SGK3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及意義

鄭亞洲，楊澤宇，劉夢夢，李苗，黃禮年

（蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，安徽 蚌埠 233004）

肺癌是臨床最常見的腫瘤之一，也是惡性腫瘤患者死亡的主要原因之一。近年來，肺癌的發(fā)病率及死亡率逐年上升，肺癌包括小細(xì)胞肺癌及非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC），其中NSCLC 約占肺癌的80%以上［1-2］，NSCLC 包括鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌等。血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶3（serum and glucocorticoid-regulated protein kinase 3，SGK3）屬于SGK家族，是一種普遍表達(dá)的絲氨酸/蘇氨酸激酶，研究表明SGK3在功能上與AKT 平行，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、生長、存活、遷移參與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化［3］。研究表明，SGK3 在前列腺癌、乳腺癌等腫瘤組織中表達(dá)［4-6］，但是在肺癌組織中的表達(dá)的文獻(xiàn)較少。本研究回顧性分析2014年1月至2018年12月于我院經(jīng)病理組織學(xué)確診的134 例NSCLC 患者的臨床資料，分析SGK3在癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2014年1月至2018年12 月于我院經(jīng)病理組織學(xué)確診的134 例NSCLC 患者的臨床資料，其中男90例，女44例；年齡36～85 歲，平均（61.68±9.55）歲；鱗癌51 例，腺癌83 例。記錄134 例NSCLC 患者的性別、年齡等臨床資料，病理類型、分化程度、腫瘤直徑、TNM分期等病理資料。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并經(jīng)患者知情同意。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)確診，術(shù)前未接受放療或化療或靶向藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除合并肺部其他感染性疾病、其他惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病及代謝性疾病者。

1.3 試劑來源 兔抗人SGK3 抗體（ab218251）購于美國Abcam公司，通用免疫組織化學(xué)SP試劑盒購于南京沐寶生物技術(shù)有限公司。

1.4 方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測癌組織及癌旁組織（距離癌組織＞5 cm的組織）中SGK3的表達(dá)情況。常規(guī)石蠟包埋組織切片，玻片烘干，然后在二甲苯中脫蠟，再通過一系列濃度梯度乙醇脫水。免疫組織化學(xué)染色的操作步驟按產(chǎn)品說明書進(jìn)行。SGK3（1∶100）陽性染色呈棕黃色顆粒狀，主要表達(dá)于細(xì)胞漿。切片在雙盲情況下由2名高年資病理科醫(yī)師獨(dú)立閱片。結(jié)果判定按照半定量積分法［7］：（1）每例標(biāo)本隨機(jī)觀察5 個(gè)（×400）高倍視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比：陽性細(xì)胞數(shù)為0 則計(jì)為0 分，≤25%計(jì)1 分，26%～50%計(jì)為2分，51%～75%計(jì)為3分，＞75%計(jì)為4 分；（2）按染色強(qiáng)度評分：無染色計(jì)為0分，淡黃色計(jì)為1分，棕黃色計(jì)為2分，棕褐色計(jì)為3 分；根據(jù)（1）、（2）兩項(xiàng)積分之和：0～2 分為陰性，3～7分為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用［n（%）］表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SGK3 在NSCLC 癌組織及癌旁組織中的表達(dá)比較 SGK3 在NSCLC 癌旁組織中低表達(dá)，在癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞漿，陽性染色呈棕褐色顆粒狀，見圖1。SGK3在NSCLC癌組織的表達(dá)水平為67.9%（91/134），明顯高于癌旁組織表達(dá)的3.7%（5/134），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=120.042，P＜0.01）。

圖1 SGK3在NSCLC癌組織（A）中高表達(dá)和癌旁組織（B）中低表達(dá)（HE染色，×400）

2.2 SGK3的陽性表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性 SGK3的陽性表達(dá)與NSCLC患者的年齡、性別、病理類型、腫瘤直徑、分化程度均無相關(guān)性（P＞0.05），與TNM期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），見表1。

表1 SGK3陽性表達(dá)與NSCLC臨床特征的相關(guān)性

續(xù)表1

3 討論

NSCLC 作為常見的腫瘤，目前常見的治療方法包括放療、化療、靶向藥物治療及手術(shù)等，早期NSCLC 主要以手術(shù)治療，但30%～70%的患者在就診時(shí)已處于Ⅲ～Ⅳ期［8］，因此肺癌的早期發(fā)現(xiàn)尤為重要。

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide-3-kinase，PI3K）途徑是人類癌癥中最常見的改變途徑之一［9］，PI3K 促進(jìn)腫瘤的發(fā)生主要是通過激活A(yù)KT，AKT是一個(gè)高度同源的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族，具有多種參與細(xì)胞的靶點(diǎn)［10］。SGK家族是一種普遍表達(dá)的絲氨酸/蘇氨酸激酶，由三種同種SGK1、SGK2、SGK3 組成，與AKT 家族高度同源，有研究稱SGK3 為第二個(gè)AKT［3］，具有與AKT相似的底物特異性［11］，SGK3具有2個(gè)關(guān)鍵的調(diào)控位點(diǎn)：催化結(jié)構(gòu)域的活化環(huán)中的蘇氨酸殘基（SGK3中的Thr 320）和C端疏水基序中的絲氨酸殘基（SGK3 中的Ser 486），2 個(gè)位點(diǎn)都需要磷酸化才能完全激活［8，12］，參與PI3K途徑的轉(zhuǎn)化，涉及細(xì)胞生長增殖，可以推測SGK3 在功能上與AKT 平行，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、生長、存活、遷移參與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。本研究采用免疫組化法檢測NSCLC 癌組織及癌旁組織中SGK3 的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)SGK3 在NSCLC 癌組織的表達(dá)明顯高于癌旁組織，并且SGK3 的表達(dá)與NSCLC 的表達(dá)與TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示SGK3 可能參與了NSCLC的細(xì)胞增殖、生長、遷移及腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。據(jù)報(bào)道，在肝癌中發(fā)現(xiàn)SGK3擴(kuò)增和過表達(dá)，并能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖［13］。有研究表明，PDPK1（Phosphoinositide-dependent Kinase-1）通過SGK3 信號介導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞的存活，內(nèi)源性PDPK1在前列腺癌細(xì)胞中的敲除顯著降低了SGK3的磷酸化水平［5］。有文獻(xiàn)表明，在乳腺癌中SGK3過表達(dá)，增強(qiáng)凋亡和侵襲相關(guān)基因和蛋白，從而導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞的腫瘤發(fā)展和侵襲［14］；用pEGFPN1-SGK3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MDA-MD-231 細(xì)胞以高表達(dá)SGK3，促進(jìn)了乳腺癌腫瘤生長和癌細(xì)胞的侵略性［4］；在黑色素瘤中，miR-605通過在黑色素瘤中負(fù)調(diào)控INPP4B介導(dǎo)的SGK3 活化而起腫瘤抑制作用［15］；SMAD2 和SGK3 在NSCLC 癌變組織中呈高表達(dá)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，SMAD2 和SGK3 高表達(dá)率均上升［16］，本研究結(jié)果與該研究結(jié)果相似。

綜上所述，SGK3 可能參與了NSCLC 的發(fā)生及發(fā)展過程，因此，檢測NSCLC 癌組織中SGK3的表達(dá)，為NSCLC 的靶向治療提供了一定的依據(jù)，SGK3 能否成為治療NSCLC 的潛在新靶點(diǎn)仍需進(jìn)一步探討，關(guān)于SGK3是通過何種機(jī)制發(fā)揮作用仍需做進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。