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    云南不同品種大葉種茶樹生化成分季節(jié)變化特征分析

    2022-03-30 01:52:16陳春林田玉萍楊雪梅
    關(guān)鍵詞:兒茶素茶多酚茶樹

    李 芬 , 陳春林 , 田玉萍 , 楊雪梅 , 金 娜 , 李 梅 *

    (1. 滇西應(yīng)用技術(shù)大學(xué) 普洱茶學(xué)院,云南 普洱 665000;2. 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所,云南 勐海 666201)

    大葉種茶樹(Camellia sinensis var. assamica)是在云南特殊生態(tài)環(huán)境條件下繁衍的具有自身獨(dú)特個(gè)性的栽培品種,可分為喬木、小喬木等[1]。 云南大葉種茶樹的代表性品種可分為群體種、無性系品種兩類[2]。 群體種主要是鳳慶種、勐庫種、勐海種等;無性系品種(以無性繁殖方式選育出來的云南大葉種后代)主要有:云抗 10 號(hào)、雪芽100 號(hào)、云抗 14 號(hào)、長葉白毫、云梅、佛香2 號(hào)、紫娟、云瑰、矮豐、云抗37 號(hào)等。 云南大葉種茶是最原始的茶樹品種,茶葉中各種成分含量豐富,遠(yuǎn)高于中小葉種[3]。 其中,大葉種茶葉中的茶多酚[4-5]和咖啡堿[6]質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別是小葉種的1.5 倍和1.8 倍, 兒茶素質(zhì)量分?jǐn)?shù)是小葉種的1.1 倍[7]。云南大葉種茶樹是制作紅茶、綠茶、普洱茶等多種茶類的重要原材料[8-9]。

    茶葉的初級(jí)代謝產(chǎn)物和次級(jí)代謝產(chǎn)物是茶葉品質(zhì)的重要影響因素[10-11],茶葉的次級(jí)代謝產(chǎn)物茶多酚(tea polyphenols),以兒茶素為主要組成[12-13],與茶葉色、香、味等的形成密切相關(guān)。 氨基酸是茶湯滋味的決定性因素, 其中茶氨酸能增強(qiáng)茶湯甜味,緩解茶湯的苦澀味[12-13]。 茶葉中的咖啡堿(caffeine)、可可堿(theobromine)和茶葉堿(theophylline)3 類生物堿化合物,對(duì)人體有一定的保健藥理功效,研究表明,茶葉中的生物堿類化合物具有抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛等多方面藥理活性[13-14]。 同時(shí),茶葉的水分含量在茶葉加工、儲(chǔ)存等環(huán)節(jié)起著重要作用[15],研究表明,茶葉中水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過10%時(shí), 不僅易發(fā)生霉變,且其中的有益生化成分(如氨基酸等)含量發(fā)生減少[16]。 茶葉的水浸出物是茶湯主要呈味物質(zhì)[17],其含量高低反映了茶葉中可溶性物質(zhì)的多少,標(biāo)志著茶湯滋味的濃強(qiáng)程度和湯色等的變化,在一定程度上反映茶葉品質(zhì)的優(yōu)劣[18]。因此,研究不同品種之間茶葉生化成分的差異及同一品種不同采摘季節(jié)茶葉生化成分變化特征,對(duì)茶葉品質(zhì)的提高具有重要作用。

    目前,已有關(guān)于茶樹不同采摘季節(jié)茶葉生化成分的報(bào)道,如周順珍對(duì)貴州湄潭縣茶樹春、夏和秋三季不同采收時(shí)期茶葉主要生化成分的變化進(jìn)行探討[19];張見明分析了福建武夷山不同季節(jié)白牡丹等武夷名叢的主要生化成分[20];范延艮等對(duì)山東泰安茶區(qū)不同品種嫩梢生化成分的季節(jié)差異進(jìn)行了分析[21];潘順順等對(duì)廣東不同季節(jié)翠玉品種3 大茶類生化成分進(jìn)行了研究[22];周喆等探究了不同紫芽茶樹不同季節(jié)主要生化成分變化[23];周玉忠等監(jiān)測了云南大葉種茶樹中兒茶素組分,包括EC(表兒茶素)、EGC(表沒食子兒茶素)、ECG(表兒茶素沒食子酸酯)、EGCG(表沒食子兒茶素沒食子酸酯)含量的季節(jié)變化[24],但只測定了部分生化成分,且未明確茶樹品種對(duì)生化成分的影響。

    因此,作者從云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所科研試驗(yàn)基地采摘云抗10 號(hào)、 云抗14 號(hào)、 雪芽100號(hào)、佛香2 號(hào)和紫娟共5 個(gè)茶樹品種春、夏和秋三季的一芽二葉。 采用常規(guī)及高效液相色譜法測定試樣中的主要生化成分含量,其中包括水分、水浸出物、茶多酚、兒茶素組分(C、EC、EGC、ECG、EGCG)、氨基酸、咖啡堿。 探究不同品種之間茶葉生化成分的差異性及春、夏和秋三季茶樹嫩梢生化成分變化特征。 為茶樹種植品種及茶葉加工采摘季節(jié)的選擇提供一定理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集

    分別于 2019 年 4 月(春季)、 7 月(夏季)、 10月(秋季)3 個(gè)茶葉采摘季節(jié)采摘云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所科研試驗(yàn)基地的云抗10 號(hào)、 云抗14號(hào)、雪芽100 號(hào)、佛香2 號(hào)和紫娟共5 個(gè)茶樹品種的一芽二葉制成蒸青茶樣,共15 個(gè)樣品待測。

    1.2 試劑和儀器

    1.2.1 主要試劑 甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純):美國安捷倫有限公司產(chǎn)品;茚三酮(分析純):中國醫(yī)藥公司北京采購供應(yīng)站產(chǎn)品;酒石酸鉀鈉(分析純)、硫酸亞鐵(分析純):天津市雙船化學(xué)試劑廠產(chǎn)品;無水乙醇(分析純):汕頭市西隴化工廠有限公司產(chǎn)品;磷酸氫二鈉(分析純)、磷酸二氫鉀(分析純):天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司產(chǎn)品;氯化亞錫(分析純):天津市化學(xué)試劑三廠產(chǎn)品;鹽酸(分析純):重慶川東化工集團(tuán)有限公司產(chǎn)品;表沒食子兒茶素沒食子酸酯(純度≥98%)、表兒茶素沒食子酸酯(純度≥98%)、表沒食子兒茶素(純度≥98%)、表兒茶素(純度≥98%)、兒茶素(純度≥98%)、咖啡堿(純度≥98%):上海晶純生化科技有限公司產(chǎn)品。

    1.2.2 主要儀器 DFD-700 恒溫水浴鍋:上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品;BS201S 電子天平: 北京賽多利斯天平有限公司產(chǎn)品;孔徑過濾膜(0.45 μm)、NEX 超純水機(jī):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品;X-5紫外可見分光光度計(jì): 上海元析儀器有限公司產(chǎn)品;101-3ABS 恒溫電熱干燥箱:北京市永光明醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品;1200 型高效液相色譜系統(tǒng): 美國Agilent 公司產(chǎn)品。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法 茶多酚采用GB/T8313—2018 中的酒石酸亞鐵比色法測定[25-26]。 游離氨基酸采用GB/T8314—2013 中的茚三酮比色法測定[27-28]。 兒茶素、咖啡堿采用高效液相色譜法測定[29]。水分含量采用GB/T 8304—2013 中的恒重法測定[30]。水浸出物采用GB/T8305—2013 中的沸水萃取法進(jìn)行測定[31-32]。每個(gè)樣品有3 個(gè)平行樣,保證測定樣品數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

    1.4 兒茶素品質(zhì)指數(shù)計(jì)算

    式中:ωEGCG為 EGCG 在干試樣中的質(zhì)量分?jǐn)?shù),%;ωECG為 ECG 在干試樣中的質(zhì)量分?jǐn)?shù),%;ωEGC為EGC 在干試樣中的質(zhì)量分?jǐn)?shù),%[33]。

    1.5 統(tǒng)計(jì)分析

    采 用 Excel 2016、SPSS19.0 和 Origin 8.5 進(jìn) 行數(shù)據(jù)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同品種云南大葉種茶樹的生化成分差異

    不同品種云南大葉種茶樹(云抗10 號(hào)、云抗14號(hào)、雪芽100 號(hào)、佛香2 號(hào)和紫娟)主要生化成分的測定結(jié)果見圖1 和圖2。 不同品種水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.13%~6.80%, 紫娟樣品平均水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于云抗10 號(hào)和佛香2 號(hào)(P<0.05);樣品水浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為39.28%~50.69%, 云抗10 號(hào)中水浸出物平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于雪芽100 號(hào)(P<0.05);佛香2 號(hào)在所有品種中茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低, 且顯著低于其他4 種品種;樣品中氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.64%~6.89%,云抗10 號(hào)的氨基酸平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于紫娟。

    圖1 不同品種云南大葉種茶樹主要生化成分比較Fig. 1 Comparison of biochemical components in different cultivar

    圖2 不同品種云南大葉種茶樹兒茶素組分及其總質(zhì)量分?jǐn)?shù)的比較Fig. 2 Comparison of catechins contents and the total mass fraction of catechins in different cultivar

    不同品種中C 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%~5.50%,云抗14 號(hào)中C 的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于紫娟 (P<0.05);所有品種中紫娟的EGC 平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,是云抗10 號(hào)的1.8 倍;ECG 在樣品中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.12%~7.71%,云抗10 號(hào)顯著高于雪芽100 號(hào)(P<0.05); 不同品種中 EGCG 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 2.21%~17.45%, 紫娟的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于佛香2 號(hào);不同品種之間咖啡堿、EC 及兒茶素總量并無顯著性差異。

    2.2 不同季節(jié)云南大葉種茶樹的生化成分差異

    不同季節(jié)(春、夏和秋)云南大葉種茶樹主要生化成分的檢測結(jié)果見圖3 和圖4。其中,不同季節(jié)水分含量的高低順序?yàn)橄募?秋季>春季,且3 個(gè)季節(jié)之間水分含量存在顯著性差異;茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)受季節(jié)影響大,順序?yàn)榍锛?夏季>春季,且3 個(gè)季節(jié)之間差異顯著;春季的氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于秋季(P<0.05),達(dá)到秋季的1.39 倍;咖啡堿在春季質(zhì)量分?jǐn)?shù)均值為(3.67±0.27)%,夏季為(4.57±0.21)%,秋季為(4.06±0.42)%, 春季含量顯著低于秋季和夏季(P<0.05);水浸出物在3 個(gè)季節(jié)無顯著性差異。

    圖3 云南大葉種茶樹主要生化成分的季節(jié)變化特征Fig. 3 Comparison of biochemical components in different seasons

    圖4 云南大葉種茶樹兒茶素組分及其總質(zhì)量分?jǐn)?shù)的季節(jié)變化特征Fig. 4 Comparison of catechins contents and the total mass fraction of catechins in different seasons

    秋季C 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著低于春季和夏季(P<0.05)。兒茶素總質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值分別為春季(22.68±6.07)%、夏季(25.46±1.23)%、秋季(14.53±2.92)%,春、夏兩季的兒茶素總質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于秋季,分別是秋季的1.56 倍、1.75 倍。 從兒茶素總質(zhì)量分?jǐn)?shù)與茶多酚的比值來看,春季和夏季顯著高于秋季。

    2.3 品種對(duì)茶葉生化成分的影響

    結(jié)合2.1 中結(jié)果表明, 茶葉中的水分、 水浸出物、茶多酚、氨基酸、C、EGC、ECG 和 EGCG 在品種間存在顯著差異。 其中,紫娟品種兒茶素總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12.95%~34.10%,高于其他品種。 兒茶素含量與茶湯的澀味呈正相關(guān)[34],鮮葉中兒茶素約占干物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的12%~24%[35];一般來說,茶葉的品質(zhì)越好,兒茶素質(zhì)量分?jǐn)?shù)越高[33,36-37]。

    而兒茶素的核心組分為EGCG, 這是茶葉關(guān)鍵的功能性因子之一[38]。 目前,EGCG 尚不能人工合成。 近年來,為從茶樹中獲得EGCG,國內(nèi)科研工作者進(jìn)行了高EGCG 茶樹種質(zhì)資源的篩選和研究工作[39-41]。 紫娟品種的 EGCG 顯著高于佛香 2 號(hào),平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到(8.17±1.20)%,是佛香 2 號(hào)的 1.4 倍,這與前人研究結(jié)果一致[35]。 唐曉波等認(rèn)為EGCG 質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過9%的茶樹品種視為高EGCG 資源[41],而龔志華等則認(rèn)為超過7%即可視為高EGCG 資源[42],但目前對(duì)高EGCG 茶樹資源的判斷尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。

    另外, 云抗10 號(hào)的水浸出物顯著高于其他品種,其水浸出物平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到(47.46±2.95)%,是其他品種的1.20 倍。 同時(shí),佛香2 號(hào)的氨基酸平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到(4.89±0.31)%,是其他品種的1.51倍。 同時(shí),云抗10 號(hào)的兒茶素品質(zhì)指數(shù)最高,達(dá)到538.91%,是其他品種的2.38 倍。水浸出物主要包括茶多酚、可溶性糖、游離氨基酸、咖啡堿、水溶性果膠、水溶性蛋白質(zhì)等。 在一定程度上,茶葉中水浸出物能夠反映茶葉品質(zhì)的優(yōu)劣[18]。同時(shí),茶葉中的氨基酸是茶湯滋味的決定性因素, 能增強(qiáng)茶湯甜味,緩解茶湯的苦澀味[12-13]。 前人研究表明,在一定程度上,兒茶素品質(zhì)指數(shù)能夠較為確切地反映出茶葉的嫩度與茶葉品質(zhì)[33]。兒茶素品質(zhì)指數(shù)越大,芽葉持嫩性越好,品質(zhì)越高。

    2.4 采摘季節(jié)對(duì)茶葉生化成分的影響

    分析可知,茶葉中的水分含量、茶多酚、氨基酸、咖啡堿、C 和兒茶素總量在不同季節(jié)間存在顯著差異。 其中,春季氨基酸含量最高,與前人研究結(jié)果一致[43]。 原因可能是春季氣溫適中,雨量充沛,加上茶樹經(jīng)秋冬季節(jié)較長時(shí)間的休養(yǎng)生息,內(nèi)在成分及含量較為豐富,特別是氨基酸和多種維生素。 此外,楊亞軍等研究認(rèn)為茶多酚、 兒茶素含量相對(duì)低,氨基酸含量高,具有一定量咖啡堿是適制綠茶的品種特征[44-45]。 氨基酸是茶葉主要化學(xué)成分之一,其含量與綠茶品質(zhì)呈正相關(guān)[46-47]。 名優(yōu)綠茶氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般在3.0%以上[48]。 2.2 中結(jié)果表明,春茶氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.46%~6.89%,高于名優(yōu)綠茶氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)閾值。 春茶芽葉肥壯、色澤翠綠、滋味鮮爽、香氣強(qiáng)烈,可以說春茶是一年中最優(yōu)質(zhì)的茶。

    夏茶中的水分、 咖啡堿和茶多酚相對(duì)較高,日照和溫度有利于茶葉中多酚類物質(zhì)的積累[49]。 茶多酚是綠茶苦澀味形成的主要物質(zhì),并且在一定范圍內(nèi)對(duì)茶葉品質(zhì)有積極作用,當(dāng)茶多酚含量超出一定量時(shí),便會(huì)對(duì)茶葉品質(zhì)帶來消極影響[50-52]。 研究認(rèn)為,優(yōu)質(zhì)茶樹品種鮮葉中茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般不超過25%[53]。 楊亞軍等認(rèn)為茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過38%視為高茶多酚資源[44];王小萍等將茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過34%視為超常規(guī)資源[54]。 夏茶的茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為36.00%~40.89%, 秋茶的茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為38.83%~46.53%, 其中秋茶的茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于定義為高茶多酚資源的茶多酚閾值。 咖啡堿作為構(gòu)成茶葉滋味的主要成分之一,質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般在2%~4%[55], 咖啡堿對(duì)綠茶品質(zhì)的形成存在逆轉(zhuǎn)閾值,數(shù)值為 3.8%~4.5%[53]。 春茶中咖啡堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.33%~4.04%,低于逆轉(zhuǎn)閾值。夏茶咖啡堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.28%~4.92%, 可能對(duì)茶葉品質(zhì)帶來消極影響,原因可能在于,夏茶采制時(shí),正逢雨量充沛的炎熱季節(jié),茶樹新梢生長迅速,高溫使茶樹的生理代謝發(fā)生變化,茶樹芽葉積累的酚類物質(zhì)含量高,氨基酸含量低,成品茶苦澀味較重。 結(jié)合兒茶素品質(zhì)指數(shù)結(jié)果,夏茶的兒茶素品質(zhì)指數(shù)為405.09%,相對(duì)較低。 李慶偉研究日照綠茶的兒茶素品質(zhì)指數(shù)得出,春茶最好、秋茶次之、夏茶最差[56]。結(jié)合前人研究,分析原因可能是夏季茶樹生長較快,土壤中營養(yǎng)成分有限,導(dǎo)致茶樹中糖類等相關(guān)營養(yǎng)物質(zhì)的形成和積累較少,從而影響兒茶素品質(zhì)指數(shù)。 所以夏季要提高兒茶素品質(zhì)指數(shù),必須合理施肥,彌補(bǔ)土壤中的營養(yǎng)成分缺失,以增強(qiáng)光合作用,提高糖類的合成,從而有利于茶葉品質(zhì)的提高[57]。

    而秋茶中的氨基酸、C、ECG、EGCG、兒茶素總量等均低于春、夏季,這與前人的研究結(jié)果一致[19]。原因可能是秋茶采摘后期,氣候雖較為溫和,但雨量往往不足, 會(huì)使采制而成的茶葉顯得較為粗老,尤其是茶樹歷經(jīng)春、夏兩季的采收,體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)虧缺。 因此,秋茶內(nèi)各種物質(zhì)貧乏,茶葉滋味淡薄。但是, 秋天的氣候卻有利于茶樹芳香物質(zhì)的合成,因此,秋茶的香氣會(huì)更好,故有“春水秋香”之說[58-59]。

    3 結(jié) 語

    茶葉中主要生化成分在不同品種及不同季節(jié)間存在顯著性差異。 紫娟品種的兒茶素總量比其他品種高,其EGC 質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于其他品種;云抗10 號(hào)的水浸出物及兒茶素品質(zhì)指數(shù)顯著高于其他品種。 春茶氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,且高于制作名優(yōu)綠茶的閾值;夏茶的水分、咖啡堿、C、兒茶素總量顯著高于其他季節(jié),同時(shí)氨基酸含量較低;秋茶茶多酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,氨基酸和兒茶素總量顯著低于其他品種。

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