基于指紋圖譜技術(shù)的燕麥草質(zhì)量評(píng)價(jià)與相關(guān)性驗(yàn)證

潘予琮 寇 偉 蔣林樹** 年 芳*

(1.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)，奶牛營養(yǎng)學(xué)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京102206；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州730070)

燕麥草是反芻動(dòng)物的主要粗飼料來源之一，對(duì)瘤胃健康具有重要的調(diào)節(jié)作用[1]。燕麥草中除蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、礦物質(zhì)和維生素等常規(guī)營養(yǎng)物質(zhì)外，還含有能夠促進(jìn)腸道健康、維持理想的免疫平衡和氧化平衡及調(diào)節(jié)基因表達(dá)的特殊營養(yǎng)調(diào)控超微量成分[2]，燕麥草黃酮是其中含量相對(duì)較為豐富，且相關(guān)研究較多的一類活性物質(zhì)，其能夠通過Phase Ⅰ和Phase Ⅱ代謝途徑參與胃腸道、肝臟及結(jié)腸微生物代謝，促進(jìn)機(jī)體營養(yǎng)的消化、吸收和利用[3]，目前由于研究方法的限制，對(duì)飼用燕麥草中黃酮類成分的含量及作用研究較少。

高效液相色譜指紋圖譜法是一種能夠通過光譜或圖譜形式，對(duì)復(fù)雜化合物中成分進(jìn)行表征的方法，該方法一方面可以在有效成分不明確的條件下，根據(jù)特征峰的面積和比例確定活性物質(zhì)的含量和質(zhì)量，確保樣品的相對(duì)穩(wěn)定性；另一方面可以將圖譜與生理作用相結(jié)合，從而更快、更準(zhǔn)確地對(duì)有效成分進(jìn)行篩選和研究。在高效液相色譜指紋圖譜分析的基礎(chǔ)上，結(jié)合相似度分析(SA)、聚類分析(HCA)、主成分分析(PCA)、判別分析(DA)和單標(biāo)記多成分定量分析(QAMS)等現(xiàn)代分析技術(shù)，能夠科學(xué)地進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)[4]，很好地解決飼料活性成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜、主效因子不明確，且受產(chǎn)地來源、收獲季節(jié)、使用部位、加工方式影響較大的問題[5]。目前，高效液相色譜指紋圖譜法已成為中草藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要標(biāo)準(zhǔn)[6]，綜上所述，本試驗(yàn)擬采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色法測(cè)定總黃酮含量并結(jié)合高效液相色譜建立燕麥草黃酮類營養(yǎng)活性物質(zhì)特征圖譜，結(jié)合聚類分析、主成分分析及灰色關(guān)聯(lián)分析，對(duì)18種不同來源的燕麥草(S1～S18)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，同時(shí)探究以黃酮含量為指標(biāo)的分級(jí)方法與常規(guī)成分分級(jí)方法的內(nèi)在聯(lián)系，為燕麥草飼料的開發(fā)利用和奶牛飼糧配方的優(yōu)化提供新思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

18種不同來源的燕麥草采自首農(nóng)集團(tuán)旗下牧場(chǎng)，除S4、S9和S14外，均屬于國產(chǎn)燕麥草品種，均在2020年8月份于各牧場(chǎng)采集，具體來源見表1；蘆丁(rutin)標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99%)、芹菜素(apigenin)標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99%)、苜蓿素(tricin)標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99%)、山奈酚(kaempferol)標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99%)購自上海源葉生物科技有限公司；無水乙醇購自河北凈森寶貝化工產(chǎn)品銷售有限公司；NaNO2、Al(NO3)3和NaOH購自上海麥克林生化科技有限公司，均為分析純；實(shí)驗(yàn)室用水為蒸餾水。

表1 18種不同來源燕麥草樣品

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 燕麥草中常規(guī)養(yǎng)分測(cè)定

干物質(zhì)(DM)含量：根據(jù)GB 10648—1999，將新鮮燕麥草于65 ℃烘干，粉碎，取2 g樣品105 ℃烘干4 h，稱重，測(cè)定DM含量。

粗蛋白質(zhì)(CP)含量：根據(jù)GB/T 6432—1994，利用KDY-9830全自動(dòng)凱氏定氮儀和KXL-1010型控溫消煮爐測(cè)定CP含量。

酸性洗滌纖維(ADF)和中性洗滌纖維(NDF)含量：根據(jù)范氏(Van Soest)[7]的洗滌纖維分析法，利用ANKOM A2000i全自動(dòng)纖維分析儀測(cè)定ADF和NDF含量。

粗脂肪(EE)含量：根據(jù)GB/T 6433—2006，采用CFA-2型分布式脂肪測(cè)定儀測(cè)定EE含量。

有機(jī)物(OM)含量：根據(jù)GB/T 6438—2007，采用馬弗爐于550 ℃下進(jìn)行灼燒測(cè)定OM含量。

飼喂相對(duì)價(jià)值(RFV)：RFV由美國飼草和草原理事會(huì)下屬的干草市場(chǎng)特別工作組提出[8]，是目前美國唯一廣泛使用的粗飼料質(zhì)量評(píng)定指數(shù)。RFV的基礎(chǔ)是可消化的干物質(zhì)(DDM)的隨意干物質(zhì)采食量(DMI)，其關(guān)系式如下:

RFV=DMI(%BW)×DDM(%DM)/1.29。

DMI與DDM的預(yù)測(cè)模型如下:

DMI(%BW)=120/NDF(%DM)；
DDM(%DM)=88.9-0.779ADF(%DM)。

根據(jù)中國畜牧業(yè)協(xié)會(huì)發(fā)布的燕麥干草分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)T/CAAA 002—2018進(jìn)行分級(jí)，其中澳大利亞品種(S4、S9、S14)根據(jù)碳水化合物和地域標(biāo)準(zhǔn)屬于B型燕麥干草，其他品種屬于A型燕麥干草。

1.2.2 燕麥草總黃酮含量測(cè)定

參考桂利利等[9]總黃酮含量測(cè)定方法，精密稱取蘆丁對(duì)照品10 mg，置100 mL容量瓶中加60%乙醇超聲溶解，搖勻，即得0.1 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mL于25 mL容量瓶中，根據(jù)NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色法[10]，使用Thermo Multiskan FC酶標(biāo)儀在510 nm處測(cè)定吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取燕麥草提取液1.0 mL至于25 mL容量瓶中，添加10 mL 30%乙醇，再加入1 mL 5% NaNO2溶液，振蕩，放置6 min，加入1.0 mL 10% Al(NO3)3溶液，微微振蕩，放置6 min，加入10 mL 4% NaOH溶液，最后以30%乙醇定容至刻度線，精密吸取200 μL于96孔板測(cè)定吸光值。

燕麥草總黃酮含量(mg/g)=(待測(cè)液總黃酮
含量×50×25)/燕麥草樣品質(zhì)量[11]。

1.2.3 燕麥草黃酮類活性物質(zhì)種類及含量測(cè)定

1.2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取苜蓿素、山奈酚、芹菜素、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品各2.5 mg分別溶于25 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解后制成0.1%濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別精密吸取0.5 mL于5 mL離心管中，充分混合后取2 mL過濾，得到混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液[12]。

1.2.3.2 指紋圖譜及特質(zhì)圖譜的構(gòu)建

采用安捷倫1260型液相色譜儀，配有自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫控制器、DAD檢測(cè)器、四元泵和在線脫氣器，用于高效液相色譜分析。色譜條件在Chen等[13]的基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化，選取色譜柱為Luna C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相選擇乙腈(A)-0.5%磷酸水溶液(B)；梯度洗脫(0～15 min，15%～20% B；15～20 min，20%～20% B；20～55 min，20%～35% B；55～60 min，35%～85% B；60～90 min，85% B)；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長350 nm；柱溫25 ℃；進(jìn)樣量10 μL。將指紋圖譜從安捷倫系統(tǒng)中以AIA格式導(dǎo)出，利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》(2012版)進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，采用中位數(shù)計(jì)算法、多點(diǎn)校正和全譜峰匹配，得到18種燕麥草指紋圖譜疊加圖，選取時(shí)間窗為0.5條件下，以S1為參照峰生成燕麥草特征指紋圖譜。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2016軟件對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行整理統(tǒng)計(jì)，計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)。SPSS 21.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著；IBM SPSS Statistics 21.0軟件進(jìn)行聚類分析和主成分分析；采用SPSSAU軟件進(jìn)行灰色關(guān)聯(lián)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同來源燕麥草中常規(guī)養(yǎng)分的測(cè)定與評(píng)價(jià)

如表2所示，18種不同來源燕麥草DM、CP、EE、ADF、NDF、OM含量均呈現(xiàn)極顯著差異性(P<0.01)，其中S1、S6、S7和S16燕麥草CP含量大于12%；S2、S6、S7和S16燕麥草ADF含量小于33%；S4、S6、S9、S14、S11和S16燕麥草NDF含量小于55%。根據(jù)T/CAAA 002—2018燕麥干草質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，將S6、S7和S16這3種燕麥草評(píng)為特級(jí)燕麥草，S1、S4為一級(jí)燕麥草，其他品種分別為二級(jí)或三級(jí)。

表2 燕麥草中常規(guī)養(yǎng)分測(cè)定與評(píng)價(jià)(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表2樣品Samples干物質(zhì)DM/%粗蛋白質(zhì)CP/%粗脂肪EE/%酸性洗滌纖維ADF/%中性洗滌纖維NDF/%有機(jī)物OM/%相對(duì)飼喂價(jià)值RFV等級(jí)GradeS1392.44±0.419.86±0.372.03±0.0934.83±0.1645.61±0.258.19±0.03125.98±4.02二級(jí)S1493.21±0.3010.33±0.210.99±0.0936.29±0.4447.65±1.144.44±0.17118.36±3.42三級(jí)S1592.55±0.707.45±0.381.92±0.0638.05±0.67 58.46±0.788.06±0.1894.29±3.64三級(jí)S1691.92±0.0812.96±0.802.32±0.2133.18±0.5852.99±0.948.24±0.38110.69±4.62特級(jí)S1793.02±0.3610.84±0.180.37±0.0236.18±0.9558.15±0.858.93±0.0897.13±3.73三級(jí)S1893.41±0.1010.29±0.482.03±0.0637.79±0.2556.50±0.497.55±0.2397.90±3.76三級(jí)P值 P-value<0.001<0.001<0.001<0.001<0.0010.086<0.001

2.2 不同來源燕麥草中總黃酮含量差異性

如表3所示，18種不同來源燕麥草總黃酮含量存在極顯著差異(P<0.01)，其中S7燕麥草總黃酮含量最高，為(0.151±0.184) mg/g，S14燕麥草次之；S15燕麥草總黃酮含量最低，僅為(5.503±0.397) mg/g。

表3 不同來源燕麥草中總黃酮含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))

2.3 基于指紋圖譜的不同來源燕麥草質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)

2.3.1 燕麥草指紋圖譜與特征圖譜的構(gòu)建

如圖1和圖2所示，18種不同來源的燕麥草所得指紋圖譜疊加圖，共標(biāo)記7個(gè)峰，通過與標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)，指認(rèn)峰4為蘆丁、峰5為芹菜素、峰6為苜蓿素、峰7為山奈酚。

圖1 不同來源燕麥草的高效液相色譜圖

峰4為蘆??；峰5為芹菜素；峰6為苜蓿素；峰7為山奈酚。

2.3.2 不同來源燕麥草質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)

2.3.2.1 相似度評(píng)價(jià)

在高效液相色譜系統(tǒng)中，標(biāo)記7個(gè)共有峰保留時(shí)間和峰面積見表4和表5，可知共有峰保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值均在5%以內(nèi)，表明色譜峰穩(wěn)定性較好。

續(xù)表4樣品 Samples峰1Peak 1峰2Peak 2峰3Peak 3峰4Peak 4峰5Peak 5峰6Peak 6峰7Peak 7S88.47012.38813.40315.21645.31546.13148.717S98.78112.69913.73015.47245.20346.01648.618S108.39912.25713.25715.06045.16946.01648.583S118.37412.23913.25415.04245.19446.03648.624S128.35512.23713.24415.05045.15946.01548.594S138.57912.45713.46615.24545.24646.05348.666S148.46012.36613.41715.19645.25546.10248.672S158.36512.23713.25814.94145.08445.97648.561S168.30912.16713.17614.95545.03245.96648.522S178.44412.35313.41415.16645.30646.13948.690S188.44812.36813.38515.16745.29846.13048.680相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD/%1.260.96 0.920.810.210.160.14

表5 18種不同來源燕麥草共有峰峰面積

對(duì)比不同來源燕麥草中共有峰峰面積可以看出，未知成分(峰2)在燕麥草黃酮中占主要成分，其次為未知成分(峰1)；以特征圖譜為參照計(jì)算不同燕麥草中特征峰相似度(表6)，可知18種燕麥草相似度在0.941～0.999，且大于0.900，表明不同來源燕麥草中黃酮類活性物質(zhì)種類和含量存在相似性。

表6 18種不同來源燕麥草相似度分析

2.3.2.2 聚類分析

結(jié)果如圖3所示，當(dāng)分類距離為10時(shí)，燕麥草被分為3類，其中第1類為S15、S17、S5、S3、S16，第2類為S1、S11、S8、S18、S6、S10、S2、S4、S9、S14，第3類為S12、S13、S7，其主要成分(峰2)的峰面積較大值即黃酮相對(duì)含量較多。

圖3 燕麥草樣品聚類分析樹狀圖

2.3.2.3 主成分分析

對(duì)共有峰峰面積進(jìn)行主成分分析，結(jié)果見圖4，燕麥草中7個(gè)共有峰僅識(shí)別1個(gè)主成分貢獻(xiàn)值大于1，在主成分2處出現(xiàn)明顯拐點(diǎn)，因此可采用主成分1對(duì)燕麥草質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，進(jìn)一步分析表明，主成分1主要來自峰2和峰1。

分別計(jì)算18種不同來源燕麥草在主成分上的得分見表7，得分越高說明該燕麥草在代表性主成分中綜合質(zhì)量較好，主成分綜合排序的結(jié)果與聚類分析的結(jié)果相類似，進(jìn)一步驗(yàn)證了燕麥草的質(zhì)量。

表7 18種不同來源燕麥草主成分得分

2.4 不同來源燕麥草品質(zhì)綜合分析

綜合常規(guī)分級(jí)與黃酮營養(yǎng)活性物質(zhì)評(píng)價(jià)結(jié)果，采用SPSSAU軟件中灰色關(guān)聯(lián)度分析，探究2種評(píng)價(jià)方法的內(nèi)在關(guān)聯(lián)性，將相對(duì)飼喂價(jià)值作為母序列，DM、CP、EE、ADF、NDF，Ash和黃酮含量作為特征序列，對(duì)其關(guān)聯(lián)系數(shù)結(jié)果進(jìn)行加權(quán)處理，最終得出關(guān)聯(lián)度值。從表8可以看出，針對(duì)本次7個(gè)評(píng)價(jià)項(xiàng)，黃酮含量的綜合評(píng)價(jià)最高(關(guān)聯(lián)度為0.804)，其次是DM含量(關(guān)聯(lián)度為0.765)。

表8 灰色關(guān)聯(lián)度

3 討 論

飼料品質(zhì)評(píng)價(jià)方法有感官評(píng)價(jià)、化學(xué)評(píng)價(jià)2個(gè)方面，前者是從飼料的水分、顏色、氣味、飼料質(zhì)地和結(jié)構(gòu)方面對(duì)飼料進(jìn)行觀察、聞味以及手摸等方法進(jìn)行簡(jiǎn)單評(píng)價(jià)，通過感官評(píng)價(jià)粗略地了解飼料的品質(zhì)[14]；后者主要是通過儀器分析飼料的營養(yǎng)成分，包括CP、粗纖維、Ash、水分等指標(biāo)，在根據(jù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行等級(jí)。目前常用的燕麥草化學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)有2種：1)RFV法：RFV能夠綜合反映粗飼料的NDF和ADF的含量，用于預(yù)測(cè)牧草的攝入量和能量，其值越高表明飼料的營養(yǎng)價(jià)值越高，一般相對(duì)飼用價(jià)值指標(biāo)大于100，表示該種粗飼料的營養(yǎng)價(jià)值整體上良好。2)根據(jù)GBT/CAAA 002—2018方法進(jìn)行燕麥干草的質(zhì)量分級(jí)。本試驗(yàn)對(duì)比2種方法的一致性，相對(duì)飼喂價(jià)值大于100的燕麥草有S4、S6、S7、S9、S12、S13、S14和S16，在以燕麥干草營養(yǎng)成分分級(jí)中，分別劃分為特級(jí)、一級(jí)、二級(jí)和三級(jí)，看出2種方法存在一定差異性。分析原因?yàn)槌Ｒ?guī)營養(yǎng)成分分級(jí)中以NDF、ADF、CP含量3個(gè)指標(biāo)對(duì)應(yīng)等級(jí)中較低等級(jí)為準(zhǔn)，既燕麥草的等級(jí)僅由其中1個(gè)指標(biāo)決定，存在不確定性。查閱文獻(xiàn)可知，目前RFV是家畜粗飼料品質(zhì)評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一，是一種綜合衡量NDF和ADF含量對(duì)牧草品質(zhì)的影響的方法。

圖4 主成分碎石圖

指紋圖譜是指采用一定的分析手段，通過色譜圖或光譜圖標(biāo)示某些復(fù)雜物質(zhì)，從而進(jìn)行成分鑒定及質(zhì)量控制的一種可量化手段。Lu等[15]收集了來自13個(gè)地區(qū)的78個(gè)枸杞樣本，采用高相液相色譜法證明了產(chǎn)地、品種對(duì)樣品中活性成分總黃酮、總多酚及總多糖的含量對(duì)枸杞質(zhì)量有顯著影響，陳振興等[16]、牛曉方等[17]研究也有相似的結(jié)果，因此將營養(yǎng)活性物質(zhì)評(píng)價(jià)方法引入傳統(tǒng)飼料營養(yǎng)評(píng)價(jià)體系，為動(dòng)物精準(zhǔn)營養(yǎng)與飼糧配方的優(yōu)化提供新思路[18]。因此，本研究中，首先采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色法測(cè)定總黃酮含量，結(jié)果表明18種燕麥草總黃酮含量存在極顯著差異，其中含量較高的為S7燕麥草(10.151 mg/g)、澳大利亞燕麥草1(9.288 mg/g)和澳大利亞燕麥草2(9.491 mg/g)，含量較低的為S15(5.503 mg/g)、S17(6.964 mg/g)和S3(6.566 mg/g)，由于相關(guān)研究較少，分析原因可能由于產(chǎn)地位置及土壤環(huán)境對(duì)燕麥草中黃酮成分含量影響較大，且從表觀觀察，進(jìn)口燕麥干草含有更多的葉片，而研究表明，植物葉片中的黃酮含量高于莖中黃酮含量[19]，導(dǎo)致我國國產(chǎn)燕麥草總黃酮含量整體略低于進(jìn)口燕麥草。

黃曉莉等[20]在對(duì)金錢草種質(zhì)資源進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)研究中，研究了17個(gè)品種金錢草中10個(gè)農(nóng)藝性狀相關(guān)指標(biāo)、5個(gè)生理指標(biāo)和6個(gè)化學(xué)成分指標(biāo)，根據(jù)《中國藥典》中所規(guī)定的夏佛塔苷含量的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，結(jié)果表明活性成分含量較高的品種，其在某幾個(gè)農(nóng)藝性狀和生理指標(biāo)表現(xiàn)較好。這與本試驗(yàn)結(jié)果相似，依據(jù)燕麥草特征指紋圖譜共表征出7個(gè)共有成分，結(jié)合相似度分析、聚類分析及主成分分析等現(xiàn)代分析技術(shù)，能夠?qū)?8種不同來源燕麥草分為3類，具體結(jié)果見表9，其中指紋圖譜分類為第3類和第2類的燕麥草黃酮含量較高，所對(duì)應(yīng)常規(guī)營養(yǎng)分級(jí)多為特級(jí)、一級(jí)燕麥草，但不存在絕對(duì)對(duì)應(yīng)關(guān)系，分析原因可能由于黃酮類化合物在植物體內(nèi)通常與糖結(jié)合成苷類，被燕麥草中以纖維素為主的細(xì)胞壁包圍，而根據(jù)飼喂價(jià)值進(jìn)行分級(jí)主要以植物ADF和NDF含量為指標(biāo)，且與ADF(纖維素、木質(zhì)素、硅酸鹽等)含量成正比，因此燕麥草黃酮的含量與飼喂價(jià)值呈現(xiàn)一定相關(guān)性。

表9 18種不同來源燕麥草分級(jí)對(duì)比

灰色關(guān)聯(lián)分析法廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物的鑒定、篩選、育種等方面，具有所需樣本小、方法簡(jiǎn)便、信息量大等優(yōu)點(diǎn)[21]。本試驗(yàn)結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)度法分析對(duì)18種不同來源燕麥草的等級(jí)與常規(guī)成分、黃酮含量進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，量化處理，根據(jù)灰色關(guān)聯(lián)度揭示比較性狀數(shù)列和參考數(shù)列的重要程度，結(jié)果表明，在根據(jù)相對(duì)飼喂價(jià)值評(píng)判的等級(jí)中，其影響重要程度依次為黃酮含量>DM含量>CP含量>ADF含量>Ash含量含量>NDF含量>EE含量，此結(jié)果與王建芳等[22]研究結(jié)果一致，楊玉寧等[23]通過對(duì)木通科木通屬21份種質(zhì)果實(shí)果皮的主要表型性狀、產(chǎn)量性狀及內(nèi)在品質(zhì)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)果形指數(shù)和黃酮含量呈正相關(guān)，采用加權(quán)關(guān)聯(lián)度分析得出，B3種質(zhì)的果皮排在首位，其黃酮含量的影響居于首位，與試驗(yàn)存在相似結(jié)果，證明了以黃酮含量作為飼料質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)的可行性。

4 結(jié) 論

本研究對(duì)18種燕麥草中燕麥黃酮進(jìn)行提取，并通過高效液相法對(duì)其特征峰進(jìn)行表征和質(zhì)量評(píng)價(jià)，結(jié)果表明18種不同來源燕麥草總黃酮含量存在極顯著差異，其中S7燕麥草黃酮含量最高，為10.151 mg/g，S15燕麥草總黃酮含量最低，僅為5.503 mg/g；結(jié)合指紋圖譜技術(shù)建立燕麥草的特征指紋圖譜，并結(jié)合現(xiàn)代分析技術(shù)將18種燕麥草分為3類，其中第1類為S15、S17、S5、S3、S16，第2類為S1、S11、S8、S18、S6、S10、S2、S4、S9、S14，第3類為S12、S13、S7，此分類方法與常規(guī)營養(yǎng)成分分級(jí)存在一定一致性，且灰色關(guān)聯(lián)分析表明，黃酮類營養(yǎng)活性物質(zhì)含量與飼喂價(jià)值關(guān)聯(lián)性最高。綜上所述，將燕麥草中黃酮含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)能夠更全面地反映燕麥草品質(zhì)，為燕麥草飼料的開發(fā)利用及奶牛精準(zhǔn)營養(yǎng)配方優(yōu)化提供參考。