人工草場(chǎng)不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸脂肪消化和肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

李 貞 彭思嘉 左淑賢 王月君 羅海玲* 張英俊 王占軍

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京100193；3.寧夏農(nóng)林科學(xué)院，銀川750002)

我國(guó)自2000年以來(lái)為保護(hù)生態(tài)植被實(shí)行劃區(qū)輪牧、休牧和禁牧封育的政策，在一定程度上限制了放牧家畜的規(guī)模[1]。消費(fèi)市場(chǎng)規(guī)模的擴(kuò)大以及草原牧區(qū)放牧受限，促使肉羊養(yǎng)殖逐漸由傳統(tǒng)放牧向規(guī)?；犸曓D(zhuǎn)變。灘羊作為寧夏地方品種，因其肉質(zhì)鮮嫩、膻味輕且具有獨(dú)特的風(fēng)味和口感而多次入選國(guó)宴。隨著寧夏禁牧決策的實(shí)施，灘羊的生產(chǎn)方式由傳統(tǒng)的天然草場(chǎng)放牧轉(zhuǎn)為舍飼或者人工草場(chǎng)放牧[2]，大量研究表明，飼養(yǎng)模式會(huì)影響羊肉品質(zhì)[3-4]。肌內(nèi)脂肪沉積是肉品質(zhì)的影響因素，而脂肪沉積與機(jī)體脂類代謝相關(guān)。脂類是反芻動(dòng)物體內(nèi)重要的能源物質(zhì)，飼糧脂類攝入后經(jīng)瘤胃分解氫化，進(jìn)入小腸消化吸收，產(chǎn)物通過(guò)血液循環(huán)運(yùn)輸至肝臟代謝轉(zhuǎn)化，再進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)被各組織利用，最后沉積在肌肉、脂肪等組織中。肌內(nèi)脂肪沉積是動(dòng)物機(jī)體脂質(zhì)代謝動(dòng)態(tài)平衡的最終結(jié)果，一定程度上受脂質(zhì)代謝相關(guān)基因和酶的調(diào)控[5]。飼糧脂質(zhì)約20%在空腸上部被吸收，約60%在空腸中后部吸收，即食糜到達(dá)回腸時(shí)基本完成吸收過(guò)程；脂肪酶在膽鹽激活下，主要在空腸發(fā)揮作用[6]。而肝臟作為機(jī)體脂質(zhì)代謝的主要場(chǎng)所，對(duì)來(lái)自脂肪分解產(chǎn)生的游離脂肪酸、瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生的揮發(fā)性脂肪酸以及飼糧來(lái)源的長(zhǎng)鏈脂肪酸等代謝產(chǎn)物進(jìn)行轉(zhuǎn)化和分配[7]。

本試驗(yàn)前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，不同飼養(yǎng)模式下羔羊肌肉脂肪酸含量存在顯著差異，放牧和放牧補(bǔ)飼模式均可增加羊肉中n-3多不飽和脂肪酸的含量，降低飽和脂肪酸的含量，改善羊肉脂肪酸組成[8]；另外，舍飼灘羊肌內(nèi)脂肪含量及各部位體脂沉積均顯著高于放牧灘羊[9]?，F(xiàn)有研究多集中于不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊生產(chǎn)性能和肉品質(zhì)的影響，但對(duì)于羔羊機(jī)體內(nèi)部脂質(zhì)代謝過(guò)程的關(guān)注較少。小腸和肝臟作為動(dòng)物攝入飼糧脂質(zhì)后消化代謝的重要場(chǎng)所，飼養(yǎng)模式的改變可能會(huì)導(dǎo)致小腸脂肪的消化吸收和肝臟脂質(zhì)代謝的過(guò)程產(chǎn)生差異，從而引起不同飼養(yǎng)模式下羊肉脂肪酸沉積的差異。鑒于此，本試驗(yàn)旨在研究不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸脂肪消化吸收和肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響，為解釋肌肉脂肪沉積和脂肪酸含量及組成的差異提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2019年7月至10月在寧夏回族自治區(qū)固原市原州區(qū)頭營(yíng)鎮(zhèn)馬園村(東經(jīng)106°26′，北緯36°14′，平均海拔1 600 m)進(jìn)行。試驗(yàn)所用人工草地分為4個(gè)放牧小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積為516 m2，草地為15%苜蓿(alfalfa)、35%草地早熟禾(Poapratensis)和50%草地雀麥(Bromusriparius)的混播組合，畝播量為4.5 kg。

選用體重[(19.69±0.29) kg]相近的3月齡斷奶灘羊公羔33只，隨機(jī)分為舍飼組(H組)、人工草場(chǎng)放牧補(bǔ)飼組(GH組)和人工草場(chǎng)放牧組(G組)，每組11只。H組每天07：30和17:30進(jìn)行飼喂，保證1～2 h活動(dòng)時(shí)間；GH組每天07:00—11:00進(jìn)行放牧，歸牧后進(jìn)行補(bǔ)飼；G組每天07:00—19:00進(jìn)行放牧，不單獨(dú)補(bǔ)飼。每天將羊在4個(gè)放牧小區(qū)中輪流放牧，放牧結(jié)束后，所有羊歸圈。試驗(yàn)期間自由飲水，預(yù)試期7 d，正試期90 d。其中，H組和GH組灘羊單欄飼養(yǎng)，采用顆粒料、玉米秸稈和苜蓿干草按75%、15%和10%比例充分混合后飼喂。通過(guò)預(yù)試期調(diào)整飼喂量，保證每次飼喂剩料量為總量的5%～15%。試驗(yàn)飼糧參考NRC(2007)肉用綿羊的營(yíng)養(yǎng)需要，按照試驗(yàn)羊體重30 kg，日增重200 g的營(yíng)養(yǎng)需要量進(jìn)行配制，試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。人工草場(chǎng)牧草主要營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表2。本試驗(yàn)前期已測(cè)得G組平均每天采食牧草干物質(zhì)0.514 kg，GH組平均每天采食牧草干物質(zhì)0.530 kg，采食混合飼糧干物質(zhì)0.657 kg；H組平均每天采食混合飼糧干物質(zhì)1.189 kg[9]。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

表2 人工草場(chǎng)牧草主要營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.2 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，測(cè)得各組宰前活重(H組34.97 kg，GH組33.33 kg，G組23.53 kg)[9]，所有羔羊宰前禁食12 h，自由飲水。采用清真屠宰法，在羔羊頸部放血處死后立即打開(kāi)腹腔，分離肝臟，記錄稱重。分離小腸，排盡小腸內(nèi)容物后用生理鹽水沖洗干凈，記錄稱重；其中小腸指數(shù)(%)=(小腸重量/宰前活重)×100。收集小腸(十二指腸、空腸、回腸)組織，用4%多聚甲醛固定后常溫保存；取肝臟組織樣品、小腸食糜保存于-80 ℃冰箱。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 小腸組織形態(tài)指標(biāo)測(cè)定

剪取十二指腸、空腸和回腸各腸段約2 cm，生理鹽水沖洗干凈后置于4%多聚甲醛溶液中保存。制作石蠟切片，并經(jīng)蘇木素-伊紅(HE)染色后，對(duì)染色后的切片進(jìn)行拍照采集相關(guān)圖像，使用Pannoramic Viewer軟件測(cè)量腸道形態(tài)指標(biāo)。

1.3.2 小腸食糜上清液脂肪酶活性測(cè)定

取-80 ℃保存的小腸食糜樣品，4 ℃自然解凍，用SIGMA 3K15臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(希格瑪，德國(guó))在4 ℃條件下26 515×g離心10 min，取上清液與4 ℃ 0.4 mol/mL KCl溶液按體積比1∶4進(jìn)行稀釋，使用南京建成生物工程研究所的脂肪酶測(cè)定試劑盒(微板法，貨號(hào)A054-2-1)測(cè)定脂肪酶活性，試驗(yàn)步驟按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，采用Thermo MK3酶標(biāo)儀(賽默飛，美國(guó))進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3 總RNA提取及cDNA合成

選用北京艾德萊生物科技有限公司的EASYspin Plus組織/細(xì)胞RNA快速提取試劑盒(貨號(hào)RN2802)提取肝臟總RNA，使用Biospec-nano生命科學(xué)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(SHIMADZU，日本)檢測(cè)樣本的RNA濃度和純度。對(duì)提取的總RNA選用北京艾德萊生物科技有限公司的TRUEscript RT Kit(+gDNA Eraser)試劑盒(貨號(hào)PC5402)，建立20 μL 500 ng體系反轉(zhuǎn)錄合成第1鏈cDNA，于-20 ℃保存。

1.3.4 肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的引物設(shè)計(jì)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

根據(jù)NCBI查找綿羊(Ovisaries)的相應(yīng)基因序列，設(shè)計(jì)脂質(zhì)代謝重要調(diào)控基因[過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、固醇調(diào)控元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1(SREBF1)]、脂肪酸氧化過(guò)程相關(guān)基因[長(zhǎng)鏈?；o酶A合酶1(ASCL1)、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1)、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶2(CPT2)]和乙酰輔酶A代謝過(guò)程相關(guān)基因[β-羥基-β-甲基戊二酸單酰輔酶A合酶1(HMGCS1)、β-羥基-β-甲基戊二酸單酰輔酶A裂解酶(HMGCL)、β-羥基-β-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCR)]的特異性PCR引物，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參基因，引物序列信息見(jiàn)表3，委托北京擎科生物科技有限公司進(jìn)行引物合成。

表3 引物序列

使用LineGene 964 BIOER熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng)(杭州博日科技有限公司)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)，選用北京艾德萊生物科技有限公司的2×Sybr Green Qpcr Mix(貨號(hào)PC3302)，建立20 μL反應(yīng)體系，包括：12.5 μL 2×SuperReal PreMix Plus，0.5 μL正向, 0.5 μL反向引物，1 μL cDNA 模板，RNase free ddH2O補(bǔ)齊至20 μL。采用兩步法進(jìn)行擴(kuò)增，PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?)恒溫段，95 ℃預(yù)變性2 min；2)循環(huán)段，95 ℃變性15 s，60 ℃退火34 s，共40個(gè)循環(huán)，收集熒光信號(hào)；3)熔解段，對(duì)熔解曲線進(jìn)行分析，曲線為單一峰則為特異性擴(kuò)增，無(wú)非特異性擴(kuò)增或引物二聚體。

試驗(yàn)中每個(gè)樣品的每個(gè)基因做3個(gè)技術(shù)重復(fù)，結(jié)果取平均值，采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因在樣本中的相對(duì)表達(dá)量，其中：

△Ct=(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)；
△△Ct=(△Ct試驗(yàn)組-△Ct對(duì)照組)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2016進(jìn)行原始數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和整理，導(dǎo)入SPSS 21.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較檢驗(yàn)，當(dāng)P<0.05時(shí)表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸重量及指數(shù)的影響

由表4可知，G組的小腸重量顯著高于H組(P<0.05)；3組間小腸指數(shù)存在顯著差異(P<0.05)，其中G組最高，H組最低。

表4 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸重量及指數(shù)的影響

2.2 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸形態(tài)的影響

十二指腸、空腸和回腸組織形態(tài)分別如圖1所示。

標(biāo)尺代表1 000 μm。H：舍飼組；GH：人工草場(chǎng)放牧補(bǔ)飼組；G：人工草場(chǎng)放牧組。下圖同。

由表5可知，H組和GH組十二指腸、回腸的絨毛高度及絨毛高度/隱窩深度均顯著高于G組(P<0.05)，G組空腸的隱窩深度顯著高于H組和GH組(P<0.05)，G組和GH組空腸的肌層厚度顯著高于H組(P<0.05)。

表5 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸形態(tài)差異的影響

續(xù)表5項(xiàng)目 Items組別 GroupsHGHGSEMP值P-value回腸Ileum絨毛高度 Villus height/μm514.81a490.61a393.31b10.944<0.001隱窩深度 Crypt depth/μm191.10176.97174.725.5130.440絨毛高度/隱窩深度 V/C2.81a2.84a2.27b0.1010.046肌層厚度 Muscle layer thickness/μm320.31389.89383.0514.3080.112

2.3 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸脂肪酶活性的影響

由圖2可知，不同飼養(yǎng)模式下，H組的羔羊空腸食糜上清脂肪酶活性顯著高于G組(P<0.05)；各組間羔羊十二指腸和回腸食糜上清脂肪酶活性無(wú)顯著差異(P>0.05)。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)注不同字母表示顯著差異(P<0.05)。下圖同。

2.4 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

2.4.1 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟脂質(zhì)代謝重要調(diào)控基因表達(dá)的影響

由圖3可知，不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟PPARα、PPARγ、SREBF1基因相對(duì)表達(dá)量均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

圖3 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟脂質(zhì)代謝重要調(diào)控基因表達(dá)的影響

2.4.2 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟脂肪酸氧化過(guò)程相關(guān)基因表達(dá)的影響

由圖4可知，H組羔羊的肝臟CPT1基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于G組(P<0.05)；3組間肝臟ACSL1、CPT2基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

圖4 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟脂肪酸氧化過(guò)程相關(guān)基因表達(dá)的影響

2.4.3 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟乙酰輔酶A代謝過(guò)程相關(guān)基因表達(dá)的影響

由圖5可知，H組羔羊的肝臟HMGCL、HMGCR基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于G組(P<0.05)，3組間肝臟HMGCS1基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

3 討 論

3.1 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸重量及指數(shù)的影響

在羔羊出生時(shí)小腸尚未發(fā)育完全，隨著年齡增長(zhǎng)、飼糧類型的改變逐漸完善其功能直至成熟，因此，飼糧的變化會(huì)對(duì)小腸發(fā)育產(chǎn)生重要影響[10]。研究表明，在斷奶階段，羔羊從采食母乳轉(zhuǎn)為固體飼料，這極大刺激了消化器官形態(tài)的發(fā)育，小腸重量在120～160日齡快速增長(zhǎng)，到200日齡時(shí)逐漸趨于成熟[11]。本研究試驗(yàn)動(dòng)物為3月齡灘羊羔羊，在試驗(yàn)期內(nèi)正處于120～160日齡快速增長(zhǎng)的時(shí)間段，G組羔羊小腸重量顯著高于H組，這可能是因?yàn)榉拍聊Ｊ较赂嵫虿墒车男迈r牧草比舍飼模式下飼喂的飼糧粗纖維比例更高，能刺激腸道促進(jìn)其發(fā)育；同時(shí)也可能是在營(yíng)養(yǎng)水平較低的情況下機(jī)體優(yōu)先保證腸道發(fā)育，讓小腸有更大表面積發(fā)揮消化吸收功能[12]。此外，G組小腸指數(shù)最高，其原因是在小腸重量更高的情況下，G組宰前活重更低，從而導(dǎo)致小腸指數(shù)提高[9]。

3.2 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸形態(tài)的影響

小腸的消化功能與腸道形態(tài)密切相關(guān)[13]，小腸絨毛的高度增加表明小腸吸收表面積增大，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收增強(qiáng)；隱窩深度反映細(xì)胞生成率，其增加表明成熟細(xì)胞比例低，細(xì)胞分泌功能較弱，影響吸收功能的發(fā)揮。而絨毛高度/隱窩深度可以綜合反映小腸的消化吸收功能及健康程度，比值升高時(shí)，腸道上皮細(xì)胞數(shù)量增加，腸道吸收面積增大，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用率；反之則可能存在腸道病變?nèi)琊つな軗p，影響腸道功能[14-15]。本試驗(yàn)中，G組十二指腸及回腸的絨毛高度、十二指腸的絨毛高度/隱窩深度顯著低于其他2組，而其空腸的隱窩深度顯著高于其他2組，這與孫娟[10]的研究結(jié)果一致，可能是因?yàn)轱暭Z的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水平不同，GH組和H組飼糧的能量和蛋白質(zhì)水平更高引起的。但劉學(xué)良等[16]的研究結(jié)果表明，放牧較舍飼飼糧中粗飼料比例更高，灘羊十二指腸絨毛高度更高，這可能與具體采食牧草種類、飼糧精粗比及品種等有關(guān)。另外，腸道肌層可以節(jié)律性收縮，其厚度增加利于小腸食糜與消化酶充分接觸[17]?？漳c是小腸消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要部位，GH組和G組空腸肌層厚度顯著高于H組，說(shuō)明其小腸的蠕動(dòng)能力增強(qiáng)，更利于食糜與消化酶的充分接觸。但也有研究認(rèn)為，較薄的胃腸道壁是動(dòng)物提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過(guò)率的一種適應(yīng)性機(jī)制[18-19]，因此H組的空腸肌層厚度低也可能代表其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收能力更強(qiáng)。綜上所述，舍飼和人工草場(chǎng)放牧補(bǔ)飼模式下的羔羊可能因?yàn)轱暭Z營(yíng)養(yǎng)水平更高，促進(jìn)了小腸的形態(tài)發(fā)育，有利于小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。

3.3 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊小腸脂肪酶活性的影響

消化酶的分泌和活性可直接影響小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率，消化酶活性主要與品種、日齡、飼糧和環(huán)境有關(guān)[20]。脂肪酶主要是將甘油三酯水解為甘油和脂肪酸，反芻動(dòng)物小腸內(nèi)脂肪酶主要來(lái)源于胰腺，生成后隨胰液排入小腸[21]。羔羊小腸不同部位的pH不同，會(huì)影響消化酶功能的發(fā)揮。十二指腸內(nèi)pH較低會(huì)影響脂肪酶活性，空腸脂肪酶活性顯著高于十二指腸和回腸，因此脂肪酶主要在空腸中發(fā)揮作用[6]。孫娟[10]研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物攝入飼糧脂肪更多，脂肪酶活性更高，放牧補(bǔ)飼比自然放牧可以顯著提高羔羊空腸脂肪酶活性，這與本試驗(yàn)的結(jié)果一致，舍飼模式羔羊空腸的脂肪酶活性高于人工草場(chǎng)放牧模式，利于脂肪消化。

3.4 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

3.4.1 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟脂質(zhì)代謝重要調(diào)控基因表達(dá)的影響

肝臟在脂類的代謝過(guò)程中起重要作用，因此研究肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)有助于進(jìn)一步了解不同飼養(yǎng)模式下機(jī)體脂質(zhì)代謝的差異。PPARα在肝臟中高度表達(dá)，主要是調(diào)控脂肪酸氧化過(guò)程涉及的基因表達(dá)[22]。PPARγ是動(dòng)物脂肪生成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，能夠直接調(diào)控脂肪細(xì)胞分化和脂類代謝相關(guān)基因的表達(dá)[23-24]。SREBF1是脂質(zhì)代謝的重要參與者，能調(diào)控脂肪酸合成和攝取過(guò)程相關(guān)基因的表達(dá)[25]。本試驗(yàn)中，不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟PPARα、PPARγ、SREBF1基因相對(duì)表達(dá)量有一定影響，但并未達(dá)到顯著水平，說(shuō)明飼養(yǎng)模式的改變可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他基因表達(dá)影響機(jī)體脂質(zhì)代謝。

3.4.2 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟脂肪酸氧化過(guò)程相關(guān)基因表達(dá)的影響

ACSL1是PPARα的靶基因，研究發(fā)現(xiàn)小鼠注射PPARα激動(dòng)劑時(shí)肝臟ACSL1基因相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)[26]。本試驗(yàn)中3組間ACSL1基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異，這可能與ACSL1基因表達(dá)受多途徑調(diào)控相關(guān)，但其中具體機(jī)制尚不清楚。CPT1和CPT2是一對(duì)移位酶，也是脂肪酸β氧化過(guò)程的限速酶。本試驗(yàn)中，舍飼模式下肝臟CPT1基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于人工草場(chǎng)放牧模式，CPT1基因表達(dá)上調(diào)說(shuō)明脂肪動(dòng)員作用加強(qiáng)，機(jī)體需要脂肪酸供能，可以促進(jìn)脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，肝臟線粒體脂肪酸的氧化作用增強(qiáng)。有研究表明，隨著烏金豬飼糧能量或者蛋白質(zhì)水平的變化，CPT1基因相對(duì)表達(dá)量也受到影響[27-28]，這說(shuō)明H組飼糧的能量或蛋白質(zhì)水平可能與G組存在顯著差異。雖然CPT1和CPT2都是PPARα調(diào)控的靶基因，但是在本試驗(yàn)中各組肝臟CPT2基因相對(duì)表達(dá)量差異不顯著，表現(xiàn)出H組高于G組的相對(duì)變化趨勢(shì)，這與PPARα基因相對(duì)表達(dá)量結(jié)果相似，而CPT1基因相對(duì)表達(dá)量有顯著差異可能是由于CPT1基因表達(dá)還受其他通路或基因的調(diào)控，但還需要進(jìn)一步研究。

3.4.3 不同飼養(yǎng)模式對(duì)羔羊肝臟乙酰輔酶A代謝過(guò)程相關(guān)基因表達(dá)的影響

HMGCL催化乙酰乙酸的生成，是該過(guò)程的限速酶[29]。在本試驗(yàn)中，H組肝臟HMGCL基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于G組，說(shuō)明H組羔羊機(jī)體肝臟乙酰乙酸合成作用更強(qiáng)。HMGCR是乙酰輔酶A合成膽固醇的限速酶，該酶控制20多個(gè)后續(xù)的酶反應(yīng)[30]。研究發(fā)現(xiàn)HMGCR的磷酸化會(huì)抑制其活性，在肝臟中，HMGCR主要被腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化。因此抑制AMPK活性能激活HMGCR，增加膽固醇合成[31]。本試驗(yàn)中，H組肝臟中HMGCR基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于G組，說(shuō)明H組羔羊膽固醇合成更為活躍。

4 結(jié) 論

綜上所述，在本試驗(yàn)條件下，與放牧模式相比，舍飼和人工草場(chǎng)放牧補(bǔ)飼模式提高了羔羊小腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度，且降低了隱窩深度，有利于小腸形態(tài)發(fā)育；在舍飼模式下空腸脂肪酶活性更高，這有利于脂肪在小腸的消化、吸收；在舍飼模式下羔羊肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)基因CPT1、HMGCL、HMGCR的相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)，從而利于體脂沉積。