小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬生長性能、血清生化指標(biāo)和腸道健康的影響

包學(xué)太 黎育穎 田軍權(quán) 蘇文璇 楊 凡 姚 康

(1.中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，動物營養(yǎng)生理與代謝過程湖南省重點(diǎn)實驗室，湖南省畜禽健康養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，長沙410125；2.中國科學(xué)院大學(xué)，北京100049)

仔豬的斷奶過渡期是整個生豬養(yǎng)殖過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，將直接影響到養(yǎng)豬業(yè)的整體經(jīng)濟(jì)效益[1-2]。斷奶應(yīng)激導(dǎo)致仔豬胃腸道消化酶分泌不足，再加上消化道自身的偏堿性環(huán)境，導(dǎo)致仔豬腸道極易感染病原菌和病毒，造成斷奶仔豬腹瀉[3]。腹瀉導(dǎo)致斷奶仔豬生長發(fā)育緩慢，死亡率提高，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。過去很長一段時間，畜禽生產(chǎn)過程中使用抗生素來維持和促進(jìn)動物生長，但長期、大量、廣泛以及不合理的使用抗生素，導(dǎo)致致病菌抗藥性增強(qiáng)，畜產(chǎn)品藥物殘留嚴(yán)重，這直接危及到人類健康。歐盟在2006年及我國在2020年頒布了相關(guān)政策禁止在飼料中添加抗生素，因此尋找綠色、高效和無污染的替抗產(chǎn)品顯得尤為重要。

小檗堿，又名黃連素，是一種具有四環(huán)結(jié)構(gòu)的異喹啉類生物堿，在許多草藥植物的根、根莖和莖皮中含量較高，是存在于亞洲和美洲的各種黃連科和小檗屬植物中的重要活性成分[4-5]。據(jù)藥理研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿對多種病原微生物具有抑制和殺滅作用，其抑菌機(jī)制主要是作用于細(xì)胞膜，破壞菌體結(jié)構(gòu)，致使菌體細(xì)胞破裂，胞內(nèi)離子外流[6]。同時，小檗堿還能抑制細(xì)菌RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)合成，從而發(fā)揮抑菌作用[7-8]。此外，小檗堿在抗腫瘤[9-10]、抗氧化[11]和治療糖尿病[12]等方面應(yīng)用也較為廣泛。齊墩果酸，又名慶四素，是從女貞子、甘草等植物中分離提取的一種五環(huán)三萜類化合物，是女貞子中的主要有效成分[13]。齊墩果酸具有護(hù)肝降酶的作用，常用于治療急性肝炎[14]。同時，齊墩果酸被機(jī)體吸收后還具有抗炎[15-16]、抗腫瘤[17-18]和抗氧化[19]等藥理作用。但是，小檗堿和齊墩果酸的單一成分均難溶于水，有著吸收差的特點(diǎn)，再加上小檗堿味道極苦可能會影響飼糧的適口性，這就限制了它們作用于動物機(jī)體所發(fā)揮的功效?；诖?，我們根據(jù)小檗堿和齊墩果酸鹽的化學(xué)特性構(gòu)建了一種化合物——小檗堿齊墩果酸鹽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。這不僅解決了小檗堿味苦的問題，而且這種化合物具有親脂性，可以增加透膜吸收，從而克服了小檗堿和齊墩果酸鹽單一成分吸收差的問題。雖然小檗堿齊墩果酸鹽克服了小檗堿和齊墩果酸單一成分的缺點(diǎn)，但其在預(yù)防和治療仔豬腹瀉方面的研究尚未見報道。研究表明，產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(enterotoxigenicEscherichiacoli，ETEC)是導(dǎo)致仔豬腹瀉的最常見的一類致病菌，其中K88菌株是引起仔豬腹瀉的主要病原菌，多用于構(gòu)建仔豬腹瀉模型[20-22]。因此，本試驗采用灌服一定量的ETEC K88來建立仔豬腹瀉模型，模擬實踐生產(chǎn)中大腸桿菌導(dǎo)致的斷奶仔豬腹瀉，并將不同劑量的小檗堿齊墩果酸鹽添加到仔豬飼糧中，研究其對斷奶仔豬感染ETEC K88后生長性能、腹瀉、血清生化指標(biāo)和腸道健康的影響。

圖1 小檗堿齊墩果酸鹽化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗所用小檗堿齊墩果酸鹽由湖南省中醫(yī)藥研究院制備并提供，性質(zhì)穩(wěn)定，相對分子質(zhì)量為792.1，純度為80%，其余20%為齊墩果酸和硫酸小檗堿的單一成分。本試驗所用大腸桿菌購自國家菌種保藏中心的K88凍干粉[編號：VIP(S)24607]，經(jīng)復(fù)蘇、傳代增菌，最終獲得試驗所需濃度菌液。

1.2 試驗設(shè)計和飼養(yǎng)管理

選取28日齡健康的“杜×長×大”三元雜交斷奶仔豬50頭[體重(8.22±0.98) kg]，隨機(jī)分為5個組，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)1頭豬。5個組分別為對照組、模型組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，其中對照組和模型組飼喂基礎(chǔ)飼糧，低、中、高劑量組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加50、250和500 mg/kg小檗堿齊墩果酸鹽的試驗飼糧。基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2012)營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

本試驗在中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所全封閉動物房飼養(yǎng)間開展，所有試驗豬只單欄飼養(yǎng)。試驗全程自由采食和飲水，舍內(nèi)定期打掃衛(wèi)生及消毒。試驗預(yù)試期3 d，正試期18 d。在正試期第15天，模型組和低、中、高劑量組仔豬灌服10 mL濃度為2×109CFU/mL的ETEC K88菌液，對照組仔豬灌服相同劑量的無菌LB培養(yǎng)液。

1.3 樣本采集

于正試期第18天，所有豬只在禁止采食12 h后，進(jìn)行前腔靜脈采血并屠宰取樣。所采血液分裝在抗凝管和普通管中各5 mL，用于血常規(guī)指標(biāo)和血清生化指標(biāo)的測定。采血后所有豬只迅速處死并解剖，分離心臟、肝臟、脾臟和腎臟，稱重記錄。同時分離空腸、回腸置于冰上，取中段2 cm左右放于裝有4%多聚甲醛固定液的50 mL離心管中，用于檢測腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.4 檢測指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能

試驗期間每天記錄各欄采食量，在試驗第1、14和18天同一時間空腹稱重仔豬重量，最終計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 腹瀉評分

試驗期間每天09:00對仔豬的糞便進(jìn)行評分并記錄，評分標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2 仔豬糞便評分標(biāo)準(zhǔn)

1.4.3 臟器指數(shù)

屠宰后分離心臟、肝臟、脾臟和腎臟，吸干其表面水分并稱重記錄，用于計算各器官指數(shù)。計算公式如下：

臟器指數(shù)(%)=(臟器重/仔豬活體重)×100。

1.4.4 血清生化指標(biāo)

試驗使用普通負(fù)壓采血管采集血樣，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，分離得到血清后，使用全自動生化分析儀(Cobas c311，羅氏公司)測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)活性以及補(bǔ)體3(C3)、補(bǔ)體4(C4)、C反應(yīng)蛋白3(CRPL3)和免疫球蛋白G(IgG)含量。

1.4.5 血常規(guī)指標(biāo)

使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝負(fù)壓采血管采集血樣后，迅速采用全自動血液細(xì)胞分析儀(BC-5000VET，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)進(jìn)行血細(xì)胞分類與計數(shù)檢測，包括白細(xì)胞(WBC)、嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)、中性粒細(xì)胞(Neu)、嗜堿性粒細(xì)胞(Bas)、淋巴細(xì)胞(Lym)、單核細(xì)胞(Mon)、紅細(xì)胞(RBC)數(shù)量和血紅蛋白(HGB)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)含量，以及紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差(RDW-SD)、血小板(PLT)數(shù)量、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)和血小板體積分布寬度(PDW)等指標(biāo)。

1.4.6 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)

將2～3 cm空腸和回腸組織樣品在4%多聚甲醛固定液固定至少24 h，再依次經(jīng)過梯度酒精脫水、二甲苯透明和石蠟浸蠟包埋，然后采用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)切取厚度為4 μm的切片，烘干并做好標(biāo)記。經(jīng)過脫蠟水化、先后用Harris蘇木素和伊紅染液染色、脫水，并用中性樹膠封片，顯微鏡鏡檢。選取組織切片上絨毛完整、走向平直的視野，采用正置光學(xué)顯微鏡(NIKON ECLIPSE CI)觀察，并用CaseViewer軟件測量空腸和回腸絨毛高度和隱窩深度,計算絨毛高度/隱窩深度(V/C)值。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)均采用Excel 2010軟件進(jìn)行初步歸納整理，然后采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著的指標(biāo)則使用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，并使用線性或二次曲線分析檢測指標(biāo)對小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的反應(yīng)。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬生長性能的影響

由表3可知，第1～14天，即ETEC K88感染前，與模型組相比，中劑量組仔豬ADFI顯著升高(P<0.05)。第15～18天，即ETEC K88感染后，各組仔豬末重、ADFI、ADG和F/G之間均無顯著差異(P>0.05)。第1～18天，與模型組相比，中劑量組仔豬ADFI顯著升高(P<0.05)；高劑量組F/G顯著低于模型組和低劑量組(P<0.05)。小檗堿齊墩果酸鹽添加組仔豬第14天和第18天體重呈現(xiàn)出劑量效應(yīng)，且高劑量組高于對照組(P>0.05)。

表3 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬生長性能的影響

續(xù)表3項目 Items對照組Control group模型組Model group低劑量組Low dose group中劑量組Mid dose group高劑量組High dose group末重 Final body weight/kg11.58±0.5411.21±0.5011.43±0.8812.04±0.2612.57±0.32平均日采食量 ADFI/kg0.46±0.03ab0.40±0.04b0.44±0.03ab0.51±0.02a0.44±0.03ab平均日增重 ADG/kg0.19±0.030.19±0.030.16±0.040.21±0.020.23±0.02料重比 F/G2.12±0.18ab2.56±0.29a2.65±0.36a2.34±0.23ab1.72±0.14b

2.2 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬糞便評分的影響

由表4可知，第1～14天，各組仔豬糞便評分之間無顯著差異(P>0.05)。在感染后24 h，與對照組相比，模型組仔豬糞便評分顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，低、中、高劑量組仔豬糞便評分明顯降低，但差異不顯著(P>0.05)。而在感染后48 h，與對照組相比，模型組仔豬糞便評分顯著升高(P<0.05)；與模型組相比，低、中、高劑量組仔豬糞便評分顯著降低(P<0.05)。在整個試驗期，低、中、高劑量組仔豬糞便評分隨著添加劑量的增加呈降低趨勢(P>0.05)。

表4 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬糞便評分的影響

2.3 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬臟器指數(shù)的影響

由表5可知，與對照組和模型組相比，飼糧添加小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬心臟、肝臟和腎臟指數(shù)均無顯著影響(P>0.05)；而低劑量組仔豬脾臟指數(shù)較中劑量組顯著降低了37.50%(P<0.05)，且脾臟指數(shù)隨著小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的增加呈現(xiàn)出先增高后降低，有二次回歸趨勢(0.05≤P<0.10)。

表5 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬臟器指數(shù)的影響

2.4 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬血清生化指標(biāo)的影響

由表6可知，與模型組相比，低劑量組仔豬血清ALP活性顯著降低(P<0.05)，低、中、高劑量組血清C4含量顯著升高(P<0.05)，高劑量組血清C3含量顯著提高(P<0.05)。仔豬血清AST活性隨著小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的增加而線性提高(P<0.05)，其他血清生化指標(biāo)各組間均無顯著差異(P>0.05)。

表6 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬血清生化指標(biāo)的影響

2.5 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

由表7可知，模型組和低劑量組仔豬血液中Lym數(shù)量顯著低于對照組和中、高劑量組(P<0.05)，并且血液中Eos數(shù)量也顯著低于中、高劑量組(P<0.05)。與模型組相比，低劑量組仔豬血液中PLT數(shù)量顯著升高(P<0.05)，對照組血液中PCT顯著升高(P<0.05)。與對照組相比，中劑量組血液中PDW顯著降低(P<0.05)。各組仔豬其他血常規(guī)指標(biāo)之間均無顯著差異(P>0.05)。仔豬血液中RBC數(shù)量和HGB含量與小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量呈線性負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

表7 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

2.6 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表8可知，高劑量組仔豬空腸絨毛高度顯著高于低劑量組(P<0.05)，模型組空腸隱窩深度顯著高于其他各組(P<0.05)，對照組空腸V/C值顯著高于模型組和低劑量組(P<0.05)；中、高劑量組仔豬回腸絨毛高度顯著高于對照組、模型組和低劑量組(P<0.05)，高劑量組回腸V/C值顯著高于低劑量組(P<0.05)。仔豬回腸隱窩深度隨小檗堿齊墩果酸鹽添加劑量的增加呈現(xiàn)先增高后降低趨勢(0.05≤P<0.10)。由圖2可以看出，模型組仔豬空腸和回腸絨毛萎縮、隱窩增生，有明顯的腸上皮細(xì)胞及腸腺體壞死；而中、高劑量組空腸和回腸均為完整的絨毛，且隱窩深度低于模型組，視野中可見正常的腸上皮細(xì)胞和腸腺體。

表8 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

圖2 仔豬空腸和回腸蘇木精-伊紅染色切片

3 討 論

3.1 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬生長性能的影響

仔豬腹瀉是仔豬斷奶后常見的一種疾病，會嚴(yán)重影響豬只生長性能，導(dǎo)致免疫功能受損，進(jìn)而增加發(fā)病率和死亡率，制約著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[23]。因此，有效預(yù)防仔豬腹瀉是保證斷奶仔豬健康生長發(fā)育的重要環(huán)節(jié)。在禁抗背景下，促進(jìn)仔豬生長發(fā)育、預(yù)防和治療各種疾病需要開發(fā)合適的抗生素替代品。其中，小檗堿因具有多種藥理作用成為研究熱點(diǎn)之一。據(jù)研究報道，在葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸炎試驗中，鹽酸小檗堿可有效緩解結(jié)腸炎造成的小鼠體重下降，且50 mg/kg的鹽酸小檗堿改善體重減輕效果最為明顯[24-25]。在本研究中，ETEC K88感染前，相比于對照組和模型組，低、中、高劑量組仔豬第14天體重均有所提高，提示小檗堿齊墩果酸鹽對未感染ETEC K88的仔豬有增重效果。其原因可能是小檗堿齊墩果酸鹽被機(jī)體吸收后，增強(qiáng)了機(jī)體免疫力，提高了仔豬采食量，進(jìn)而保證了營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。而ETEC K88感染后，相比于模型組，低、中、高劑量組仔豬第18天體重同樣有所增高，并且呈劑量效應(yīng)，提示小檗堿齊墩果酸鹽較好地緩解了ETEC K88感染導(dǎo)致的仔豬體重減輕。其原因可能是飼糧中的小檗堿齊墩果酸鹽到達(dá)后腸后能直接作用于病原菌，從而減少了腸毒素的產(chǎn)生，有效緩解了腸黏膜損傷，進(jìn)而保證仔豬腸道健康及正常生長發(fā)育。在整個試驗期，中劑量組仔豬ADFI顯著高于模型組，高劑量組F/G顯著低于模型組，提示小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬感染ETEC K88造成的炎癥有較好的防治作用，保證仔豬更好的采食。綜上所述，小檗堿齊墩果酸鹽有助于仔豬的生長發(fā)育，可有效緩解仔豬感染ETEC K88后的體重減輕。

3.2 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬糞便評分的影響

仔豬腹瀉是生豬養(yǎng)殖過程中的一大難題，也是造成養(yǎng)殖場經(jīng)濟(jì)損失的一個重要原因，解決好仔豬腹瀉問題是挽回生豬養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)損失的根源[2]。糞便評分是根據(jù)豬只糞便性狀成型進(jìn)行評分，可直接反映仔豬的腹瀉狀況。本研究中，在ETEC K88感染前，除高劑量組外的其余4組仔豬均存在較為輕微的腹瀉，這可能跟養(yǎng)殖試驗當(dāng)時的氣溫、近窗近門的環(huán)境因素等有關(guān)。而在ETEC K88感染后24和48 h，模型組仔豬的糞便評分顯著高于對照組，提示本試驗仔豬腹瀉模型建立成功，這一結(jié)果與Peng等[26]報道的ETEC K88攻毒后仔豬的糞便評分結(jié)果一致。此外，從ETEC K88感染后24和48 h 2次的糞便評分結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，小檗堿齊墩果酸鹽添加組糞便評分隨時間變化降低，模型組糞便評分反而稍有增高。其原因可能是小檗堿齊墩果酸鹽對于腹瀉仔豬有較好的治療效果，并且隨著添加劑量的增加效果越明顯。而模型組仔豬在攻毒處理后，ETEC K88造成的仔豬腸道黏膜損傷沒能得到緩解，加之仔豬階段自身免疫力較弱，機(jī)體離子失衡，導(dǎo)致腹瀉加重。另外，在感染后24和48 h，中、高劑量組糞便評分相等，其原因可能是本研究中250和500 mg/kg 2種添加劑量已經(jīng)達(dá)到小檗堿齊墩果酸鹽治療仔豬腹瀉的適宜臨界點(diǎn)，且治療效果不隨添加劑量的增加而提高。綜上可知，小檗堿齊墩果酸鹽在緩解ETEC K88造成的仔豬腹瀉方面效果顯著，但最適添加劑量還需進(jìn)一步研究。

3.3 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬臟器指數(shù)的影響

臟器指數(shù)是動物機(jī)體一項重要的生物學(xué)特征指標(biāo)，常用于衡量機(jī)體健康狀況和相應(yīng)臟器的功能強(qiáng)弱。其中，脾臟是動物機(jī)體最大的免疫器官，脾臟質(zhì)量與其體質(zhì)量呈一定的線性關(guān)系[27]，脾臟指數(shù)可反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱。肖玉波[28]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠在接種腫瘤細(xì)胞后，脾臟指數(shù)顯著提高，而與模型組相比，灌胃給藥的高劑量小檗堿組并未發(fā)現(xiàn)顯著差異。在本研究中，與中劑量組相比，低劑量組仔豬脾臟指數(shù)降低了37.50%。這可能與低劑量的小檗堿齊墩果酸鹽對攻毒仔豬治療效果不顯著，以及灌胃攻毒過程中造成的應(yīng)激較大，影響采食導(dǎo)致的仔豬體重下降有關(guān)。同時，本研究發(fā)現(xiàn)，在仔豬飼糧中添加小檗堿齊墩果酸鹽對ETEC K88感染仔豬的心臟、肝臟和腎臟的臟器指數(shù)無顯著影響，這與肖玉波[28]試驗結(jié)果基本一致。

3.4 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬血清生化指標(biāo)的影響

動物機(jī)體血清生化指標(biāo)受飼糧營養(yǎng)水平的影響，同時血清生化指標(biāo)又可以間接反映機(jī)體自身的營養(yǎng)水平、生長發(fā)育和健康狀況。因此，血清生化指標(biāo)作為動物生產(chǎn)研究中重要指標(biāo)之一，在評價機(jī)體生長發(fā)育、預(yù)防疾病等方面意義重大[29]。據(jù)研究報道，在四氯化碳誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷的試驗中，模型組血清ALP活性升高，小檗堿治療組血清ALP活性降低，提示小檗堿在一定程度上緩解了四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷[30]。Gao等[31]研究發(fā)現(xiàn)，齊墩果酸可以緩解由四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病大鼠血清中ALP活性的升高。而本研究中低劑量組仔豬血清ALP活性顯著低于模型組，提示飼糧中添加50 mg/kg的小檗堿齊墩果酸鹽有助于緩解仔豬感染ETEC K88后的肝臟損傷，從而表現(xiàn)出低劑量組血清ALP活性的下降。有研究表明，補(bǔ)體是人和動物體內(nèi)一組具有酶原活性的球蛋白，是血漿蛋白的組成成分，血清中C3、C4含量可反映機(jī)體的免疫水平[32]。Xu等[33]研究發(fā)現(xiàn)，50 mg/kg的小檗堿每2周1次添加到團(tuán)頭魴飼糧中，可顯著提高機(jī)體血清中C3和C4含量。在本研究中，仔豬血清C3和C4含量由高到低依次為小檗堿添加組、對照組和模型組，提示小檗堿齊墩果酸鹽有助于提高仔豬的機(jī)體免疫水平，這可能跟小檗堿齊墩果酸鹽相對于單一的小檗堿或齊墩果酸更易于被機(jī)體吸收，因此發(fā)揮協(xié)同增效作用，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫能力有關(guān)。

3.5 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

血常規(guī)指標(biāo)可反映動物機(jī)體或器官的健康狀況、新陳代謝、內(nèi)外環(huán)境平衡以及監(jiān)測一些早期血液系統(tǒng)疾病，其檢測通常包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板3個方面[34-35]。白細(xì)胞中的粒細(xì)胞可抵御外界病原微生物的侵入，同時還有吞噬異物并產(chǎn)生抗體等作用。本研究結(jié)果顯示，中、高劑量組仔豬血液中Lym和Eos數(shù)量顯著高于模型組和低劑量組，提示仔豬在感染ETEC K88后，機(jī)體產(chǎn)生大量Lym和Eos參與機(jī)體免疫反應(yīng)，抵御ETEC K88的入侵，吞噬已入侵的病原菌并產(chǎn)生抗體。因此，小檗堿齊墩果酸鹽有助于提高機(jī)體免疫功能，可以提升機(jī)體抵御外界病原微生物的能力。本研究結(jié)果還顯示，小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬感染ETEC K88后血液中紅細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)未出現(xiàn)顯著影響。PLT、MPV、PDW和PCT可以從整體反映血小板的功能和分布情況，其中PLT和MPV與骨髓造血功能有關(guān)，PDW反映血小板之間的體積差異，PCT與血小板數(shù)量和體積有關(guān)[36]。在本研究中，與模型組相比，低劑量組仔豬血液中PLT數(shù)量顯著升高；與對照組相比，中劑量組血液中PDW顯著降低，提示仔豬在ETEC K88感染后體內(nèi)骨髓造血功能下降，高劑量的小檗堿齊墩果酸鹽有助于恢復(fù)攻毒后造血功能。

3.6 小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

腸道是動物的主要消化器官，同時也是抵御外界病原微生物、毒素和致敏大分子的重要屏障[3]。腸道黏膜層的褶皺、絨毛是動物消化道的主要組成部分，在保證營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和維持胃腸道穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用[37-38]。研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿對腹膜透析液造成的大鼠結(jié)腸隱窩損傷和腸上皮屏障功能障礙有明顯的修復(fù)作用，還能改善微絨毛的形態(tài)[39]。Zhu等[24]、Zhang等[25]研究也發(fā)現(xiàn)，小檗堿對DSS誘導(dǎo)造成的小鼠腸道損傷有一定的治療效果，相比于模型組，小檗堿組腸道損傷組織學(xué)評分顯著降低，并且隨小檗堿劑量增加評分呈降低趨勢。此外，也有研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬進(jìn)行ETEC K88攻毒后，仔豬空腸絨毛高度和V/C值顯著降低[40]。在本研究中，與對照組相比，模型組仔豬空腸隱窩深度顯著升高，空腸V/C值顯著降低；與模型組相比，低、中、高劑量組空腸隱窩深度顯著降低，提示小檗堿齊墩果酸鹽可緩解ETEC K88感染造成的仔豬空腸隱窩增深。同時，中、高劑量組回腸絨毛高度高于其他3組，高劑量組回腸V/C值高于低劑量組，提示小檗堿齊墩果酸鹽對仔豬感染ETEC K88后回腸絨毛高度的損傷有明顯的治療效果，出現(xiàn)這一結(jié)果的一個可能的原因是小檗堿齊墩果酸鹽抑制了ETEC K88，從而減少了毒素的產(chǎn)生。并且，在本研究中500 mg/kg劑量的小檗堿齊墩果酸鹽效果最好。綜上所述，小檗堿齊墩果酸鹽可緩解ETEC K88導(dǎo)致的小腸黏膜損傷，改善腹瀉仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)。

4 結(jié) 論

飼糧添加500 mg/kg小檗堿齊墩果酸鹽能夠提高斷奶仔豬的生長性能，緩解ETEC K88感染導(dǎo)致的仔豬腹瀉，降低腹瀉對仔豬生長性能、腸道健康和血液生化指標(biāo)造成的影響，提高腹瀉仔豬機(jī)體免疫力。