載脂蛋白Eε等位基因與癲癇患者認知功能的關(guān)系

韓雨薇 王晨辰 袁冠前 梁國標(biāo) 李曉明

北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，遼寧 沈陽 110016

癲癇是大腦神經(jīng)元異常放電導(dǎo)致大腦功能障礙的一種慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，中國現(xiàn)有癲癇患者近千萬［1］。癲癇反復(fù)發(fā)作易引起腦白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致患者出現(xiàn)不同程度的認知功能障礙［2］。認知障礙是癲癇最常見的并發(fā)癥，約80%的癲癇患者存在認知功能障礙，臨床主要表現(xiàn)為注意力下降、記憶力減退、語言障礙、視覺感知缺失等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［3-5］。找到影響癲癇患者認知障礙的可能危險因素并及時做出早期臨床干預(yù)，提高其診斷率和治療率尤為重要。癲癇發(fā)作是神經(jīng)元異常和快速放電引起的，這與發(fā)育異常、抑制性和興奮性神經(jīng)遞質(zhì)之間的平衡紊亂或細胞外K+水平的改變有關(guān)。載脂蛋白E（apolipoprotein E，APOE）參與這些過程的調(diào)控，在癲癇發(fā)作中起關(guān)鍵作用［6］。APOE基因多態(tài)性與認知功能減退密切相關(guān)，在老年人群和帕金森病患者中APOE*ε4等位基因攜帶者認知功能方面的表現(xiàn)比非攜帶者差［7-9］。APOE等位基因與癲癇患者認知功能的相關(guān)性方面仍缺乏研究。

本研究通過檢測癲癇患者的APOE 基因表型和認知功能評分，探討APOE等位基因?qū)Πd癇患者認知功能的影響，為臨床治療提供依據(jù)，從而改善癲癇患者的生活質(zhì)量。

1 資料與方法

1.1 一般資料納入2021-01—2022-07 在中國人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)外科就診并確診的癲癇患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)體格檢查、臨床評估包括腦電圖、MRI 和詳細病史確診為癲癇。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）惡性腫瘤、甲狀腺或甲狀旁腺疾病、肝或腎衰竭等嚴(yán)重身體疾病者；（2）有創(chuàng)傷性腦損傷、腦腫瘤、腦血管病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；（3）酗酒或服用影響情緒或神經(jīng)系統(tǒng)的藥物者；（4）癲癇發(fā)病前已有認知功能障礙者；（5）認知功能評估不完整者。共納入72例癲癇患者，男46例，女26例，年齡16～60歲。本研究通過中國人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（2021-135號），并獲得所有參與者知情同意。

1.2 APOE 基因分型收集患者外周靜脈血（含EDTA 抗凝管），充分混勻后分裝保存于—20 ℃冰箱中。使用APOE基因檢測試劑盒（上海Baio技術(shù)有限公司，中國上海），PCR 擴增操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。將基因擴增產(chǎn)物孵育在基因芯片上，經(jīng)Baio R-Hyb全自動雜交儀（上海Baio技術(shù)有限公司，中國上海）進行雜交顯色反應(yīng)，BaiO BE-2.0基因芯片讀取器（上海Baio 技術(shù)有限公司，中國上海）進行基因分型分析。

1.3 認知功能評估所有研究對象均應(yīng)用修訂版Addenbrooke 認知評估量表（Addenbrooke cognitive examination，ACE-R）評估認知功能。該量表涵蓋6個認知領(lǐng)域的評估，包括定位和注意力（18分）、記憶力（26分）、語言流利度（14分）、語言（26分）、視覺空間和感知能力（16 分），共21 項認知測試，總分100分。評分越高表示認知功能越好。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進行t檢驗。APOE基因頻率和等位基因頻率等計數(shù)資料各組比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 APOE基因分布頻率共檢測72例癲癇患者外周血APOE 基因分型、APOE 等位基因和基因型分布頻率，分布6 種基因型，分別為ε2/ε2、ε2/ε3、ε2/ε4、ε 3/ε3、ε3/ε4、ε4/ε4，其中ε3/ε3 是最常見的基因型，為32 例，占51.39%，其次是ε3/ε4 基因型，為20 例，占27.78%。ε2/ε2（2 例）和ε2/ε4（1 例）基因表型較少，分別占2.78%和1.39%。APOE*ε3 是最常見的等位基因，所占頻率為70.83%，其次是APOE*ε4 等位基因，所占頻率為20.14%。見表1。

表1 APOE基因型及等位基因分布頻率 ［例（%）］Table 1 APOE genotype and allele distribution frequency［n（%）］

2.2 2組患者基本資料比較APOE*ε2、ε3、ε4各等位基因攜帶者與非攜帶者進行臨床資料比較，結(jié)果顯示，在性別、年齡、發(fā)病年齡、病程、婚姻情況方面，APOE*ε2、ε3、ε4各等位基因攜帶者與非攜帶者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2～4。

表2 APOE*ε2等位基因與癲癇患者基本資料的分析Table 2 Analysis of APOE*ε2 allele and basic data of epilepsy patients

表3 APOE*ε3等位基因與癲癇患者基本資料分析Table 3 Analysis of APOE*ε3 allele and basic data of epilepsy patients

表4 APOE*ε4等位基因與癲癇患者基本資料分析Table 4 Analysis of APOE*ε4 allele and basic data of epilepsy patients

2.3 APOE*ε2、ε3、ε4 等位基因與認知功能障礙的關(guān)系比較APOE 不同等位基因?qū)Πd癇患者的認知功能的影響（表5），結(jié)果顯示，APOE*ε2或ε3等位基因攜帶者與非攜帶者ACE-R 認知功能評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），而APOE*ε4 等位基因攜帶者的ACE-R 認知功能評分顯著低于APOE*ε4 等位基因非攜帶者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。本研究人群中攜帶ε4 等位基因的癲癇患者ACE-R 認知功能評分最低，其次是ε3和ε2等位基因，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表6。

表5 APOE*ε2、ε3、ε4等位基因與癲癇患者認知功能的關(guān)系Table 5 Association of APOE*ε2，ε3，ε4 alleles with cognitive function in patients with epilepsy

表6 APOE*ε2、ε3、ε4等位基因與癲癇患者認知功能的關(guān)系 （±s）Table 6 Association of APOE*ε2，ε3，ε4 alleles with cognitive function in epilepsy patients （±s）

表6 APOE*ε2、ε3、ε4等位基因與癲癇患者認知功能的關(guān)系 （±s）Table 6 Association of APOE*ε2，ε3，ε4 alleles with cognitive function in epilepsy patients （±s）

量表ACE-R ε2攜帶者（n=11）86.45±8.99 ε3攜帶者（n=63）83.21±12.83 ε4攜帶者（n=29）78.24±12.25 F值2.363 P值0.099

3 討論

認知障礙在癲癇起病初期已存在，約80%的癲癇患者存在注意力、記憶力和語言等認知損害［10-15］，臨床治療時應(yīng)提高對癲癇患者認知功能的關(guān)注。APOE 是一種參與全身脂質(zhì)運輸和代謝的糖蛋白，包含3種蛋白亞型ε2、ε3和ε4［11，16-20］。存在APOE*ε4等位基因時，大腦修復(fù)損傷和形成新突觸的能力受損［12-13，21-26］，這是由于APOE*ε等位基因促進腦組織中β淀粉樣蛋白（β-amyloid，Aβ）的沉積，而大腦中高表達的Aβ可導(dǎo)致癲癇樣活動和認知障礙［14-15，27-32］。GOURAS等［16］報道APOE*ε4等位基因促進癲癇患者腦內(nèi)Aβ的累積。APOE基因型與老年人群和帕金森患者的認知功能障礙相關(guān)，APOE*ε4 等位基因攜帶者認知功能與非攜帶者之間存在顯著差異［7，9，33-40］。目前APOE 基因型與癲癇患者認知功能的相關(guān)性方面還缺乏研究。

本研究利用基因芯片雜交技術(shù)對72例癲癇患者進行基因型和等位基因分布的分析，并運用修訂版Addenbrooke 量表評估患者認知功能。患者的基本資料，如性別、年齡、發(fā)病年齡、病程和婚姻情況在APOE*ε2、ε3 和ε4 等位基因分布頻率無統(tǒng)計學(xué)差異。APOE 3 種等位基因中唯有ε4 等位基因與癲癇患者認知功能相關(guān)，攜帶ε4 等位基因的癲癇患者比非攜帶者的認知功能差，APOE 3種等位基因中攜帶ε4 等位基因的癲癇患者認知功能評分最低，表明APOE*ε4等位基因?qū)Πd癇患者認知功能具有顯著影響［41-45］。由于研究的人群樣本量較小，具有一定的局限性，還需要更大樣本量驗證APOE*ε4 等位基因與癲癇患者認知功能的關(guān)系。

APOE*ε4等位基因攜帶與否與癲癇患者認知功能有相關(guān)性［46-50］，攜帶APOE*ε4 等位基因的癲癇患者認知功能比非攜帶患者更差。APOE*ε4等位基因可作為判斷癲癇患者認知障礙的危險因素，為臨床上盡早評估癲癇患者的認知狀況并及早進行臨床干預(yù)，最大程度減少認知損害提供依據(jù)。