苦杏仁皮中膳食纖維和黃酮同步提取工藝的優(yōu)化

黃瓊連 周敏賢 龍江玲 黃瑩瑩 楊婷 夏荃

中圖分類號(hào) R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）06-0724-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.06.13

摘 要 目的 優(yōu)化苦杏仁皮中膳食纖維和黃酮的同步提取工藝。方法 采用酶-重量法計(jì)算膳食纖維含量，采用紫外分光光度法測定黃酮含量;以料液比、pH、木瓜蛋白酶溶液濃度、α-淀粉酶溶液濃度、酶解溫度和酶解時(shí)間為因素，膳食纖維和黃酮含量為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化提取工藝。結(jié)果 最優(yōu)提取工藝為料液比1 ∶ 10（g/mL）、pH5、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度0.5%、酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間1 h。經(jīng)3次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，得膳食纖維的平均含量為0.801 g/g（RSD=1.95%），黃酮的平均含量為2.135 mg/g（RSD=2.44%），平均綜合評(píng)分為0.988分（RSD=0.81%）。結(jié)論 所得最優(yōu)提取工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)鍵詞 苦杏仁皮;膳食纖維;黃酮;正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì);同步提取;工藝優(yōu)化

Optimization of the simultaneous extraction technology of dietary fiber and flavonoids from the peel of Prunus armeniaca

HUANG Qionglian1，ZHOU Minxian2，LONG Jiangling3，HUANG Yingying3，YANG Ting3，XIA Quan3（1. Institute of Chinese Medical Surgery， Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 200032， China; 2. Guangzhou Hangu Traditional Chinese Medicine Clinic Co.， Ltd.， Guangzhou 510620， China; 3. College of Traditional Chinese Medicine， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To optimize the simultaneous extraction technology of dietary fiber （DF） and flavonoids from the peel of Prunus armeniaca. METHODS The content of DF was calculated with enzyme-gravimetric method， and the content of flavonoids was determined by ultraviolet spectrophotometry. The orthogonal design and single factor test were used to optimize the extraction technology， with the factors of liquid-solid ratio， pH， papain concentration， α-amylase concentration， temperature of enzymatic hydrolysis and time of enzymatic hydrolysis as factors， using the contents of DF and flavonoids as indexes. RESULTS The optimal extraction technology included the solid-liquid ratio of 1 ∶ 10 （g/mL）， pH5， 0.5% papain and 0.5% α-amylase， enzymatic hydrolysis at 50 ℃ for 1 h. After three times of validation， the average content of DF was 0.801 g/g （RSD=1.95%）， and the average content of flavonoids was 2.135 mg/g （RSD=2.44%）. The average comprehensive score was 0.988 （RSD=0.81%）. CONCLUSIONS The optimal extraction technology is stable and feasible.

KEYWORDS? ?the peel of Prunus armeniaca; dietary fiber; flavonoids; orthogonal design; simultaneous extracxtion; technology optimization

苦杏仁為薔薇科植物山杏Prunus armeniaca L. var.ansu Maxim.、西伯利亞杏Prunus sibirica L.、東北杏Prunus mandshurica（Maxim.）Koehne或杏Prunus armeniaca L.的干燥成熟種子，具有降氣、止咳平喘、潤腸通便的功效，可用于臨床治療腸燥便秘、咳嗽氣喘、胸滿痰多等[1]?？嘈尤适浅Ｓ么笞谥兴幤贩N，同時(shí)也是藥食兩用品種，需求量大?？嘈尤食２捎? 法去除種皮后應(yīng)用，因此作為苦杏仁的副產(chǎn)物，苦杏仁皮的年丟棄量較大[2]。這既會(huì)造成苦杏仁皮堆積浪費(fèi)、苦杏仁應(yīng)用成本增加，又會(huì)使其成為藥品或食品生產(chǎn)企業(yè)工業(yè)廢棄物的來源之一，給環(huán)境治理造成一定壓力[3]。

有研究指出，苦杏仁皮中含有多種功能性成分，如膳食纖維（dietary fiber，DF）、黃酮、酚酸和黑色素、花青素、綠原酸等[3-6]。其中，DF被稱為第7類營養(yǎng)元素，在苦杏仁皮中的含量高達(dá)45%以上，具有改善腸道菌群、調(diào)節(jié)血脂血糖、預(yù)防結(jié)腸癌和清除自由基等藥理作用[3，7];黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、改善心血管功能等作用[8-9]，文連君等[10]以微波輔助工藝提取了苦杏仁皮總黃酮，發(fā)現(xiàn)其含量可達(dá)9～15 mg/g?？梢?，如何提高苦杏仁皮的高值化利用、避免資源浪費(fèi)，已成為相關(guān)研究的熱點(diǎn)之一。目前，雖有學(xué)者對(duì)苦杏仁皮中功能性成分的提取進(jìn)行了相關(guān)研究，但僅限于單一成分，且存在設(shè)備要求高、經(jīng)濟(jì)效益低、二次環(huán)境污染等問題[10-13]。生物酶輔助提取可根據(jù)植物藥材細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用酶反應(yīng)使細(xì)胞壁組分水解或降解，具有高度專一、反應(yīng)條件溫和、操作簡便、提取率高、環(huán)境污染少等優(yōu)點(diǎn)[14-15]。同步提取可綜合利用苦杏仁皮的有效成分，具有一提多效的效果，可提高苦杏仁皮的利用率?；诖?，本研究以生物酶輔助同步提取法提取苦杏仁皮中的DF和黃酮，采用酶-重量法測定DF含量[16]，采用紫外分光光度法檢測黃酮含量（以蘆丁計(jì)）;同時(shí)以料液比、pH、木瓜蛋白酶溶液濃度、α-淀粉酶溶液濃度、酶解溫度和酶解時(shí)間為考察因素，DF和黃酮含量為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，旨在為苦杏仁皮的高值化利用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有T2602S型雙光束紫外分光光度計(jì)（上海佑科儀器儀表有限公司）、T1000型電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）、AUY120型電子分析天平（廣州湘儀機(jī)電設(shè)備有限公司）、KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

蘆丁對(duì)照品（批號(hào)T27F10Z81699，純度≥98%）購自上海源葉生物科技有限公司;α-淀粉酶（批號(hào)C11581550，規(guī)格4 000 U/g）購自上海麥克林生化科技有限公司;木瓜蛋白酶（批號(hào)170108，規(guī)格≥1 000 000 U/g）購自上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司;無水乙醇、乙酸乙酯、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、冰醋酸均為分析純，水為蒸餾水。

苦杏仁皮（批號(hào)YY-190501）由嶺南中藥飲片有限公司提供，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院吳文如副教授鑒定為薔薇科植物杏P. armeniaca L.的干燥成熟種皮。苦杏仁皮經(jīng)干燥、粉碎，過40目篩，密封保存，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦杏仁皮中DF和黃酮的同步提取

取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，按料液比1 ∶ 10（g/mL，下同）加水適量，超聲（功率500 W，頻率70 kHz）處理5 min，在pH5（以10%乙酸溶液和4%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值）條件下加入0.5%的木瓜蛋白酶溶液（取木瓜蛋白酶，用蒸餾水溶解）和0.5%的α-淀粉酶溶液（取α-淀粉酶，用蒸餾水溶解），在50 ℃水浴中酶解1 h，煮沸10 min滅活，冷卻;加入4倍體積的60%乙醇，醇沉30 min后，抽濾，收集濾液，回收乙醇至170～200 mL，用等體積乙酸乙酯萃取3次，每次30 min，收集萃取液，揮干溶劑，即得黃酮浸膏;濾渣干燥至恒定質(zhì)量[17]，即得DF。

2.2 DF的含量測定

參考相關(guān)文獻(xiàn)[16]，采用酶-重量法計(jì)算DF含量：DF含量（g/g）=DF質(zhì)量/苦杏仁皮粉末質(zhì)量。

2.3 黃酮的含量測定

采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色法顯色，以紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測[18]。

2.3.1 對(duì)照品貯備液的制備 取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，加50%乙醇溶解，混勻，制得質(zhì)量濃度為204.4 μg/mL的對(duì)照品貯備液。

2.3.2 供試品溶液的制備 取苦杏仁皮粉末10 g，按“2.1”項(xiàng)下方法制得萃取液，蒸干，殘?jiān)?0%乙醇溶解并定容至10 mL，混勻，即得供試品溶液。

2.3.3 線性關(guān)系考察 精密移取質(zhì)量濃度為162.2 μg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液（按“2.3.1”項(xiàng)下方法制得）1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、4.5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min后，加10%硝酸鋁溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min后，加4%氫氧化鈉溶液4 mL，再加50%乙醇定容，搖勻，靜置15 min，用50%乙醇定容，混勻，制成質(zhì)量濃度為16.22、32.44、40.55、48.66、64.88、72.99 μg/mL的系列線性工作溶液。以50%乙醇為空白對(duì)照，采用紫外分光光度計(jì)于510 nm波長處測定吸光度[18]。以蘆丁質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、吸光度（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=11.481 0X+0.043 5（r=0.999 5），表明蘆丁檢測質(zhì)量濃度在16.22～72.99 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度成良好的線性關(guān)系。

2.3.4 精密度試驗(yàn) 精密移取“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液，用50%乙醇稀釋至質(zhì)量濃度為20.44 μg/mL，取適量按“2.3.3”項(xiàng)下方法顯色后（自“加5%亞硝酸鈉溶液0.4 mL”開始操作，下同），以50%乙醇為空白對(duì)照，采用紫外分光光度計(jì)于510 nm波長處連續(xù)測定5次吸光度。結(jié)果顯示，吸光度的RSD為0.09%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，共5份，分別按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.3”項(xiàng)下方法顯色后，以50%乙醇為空白對(duì)照，采用紫外分光光度計(jì)于510 nm波長處測定吸光度并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中黃酮的質(zhì)量濃度，然后按下式計(jì)算含量：黃酮含量（mg/g）=c×V×n/m。式中，c為樣品中黃酮的質(zhì)量濃度;V為最初定容的體積;n為稀釋倍數(shù);m為苦杏仁皮粉末的質(zhì)量[19]。結(jié)果顯示，黃酮含量的RSD為3.80%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液，分別于室溫下放置10、20、30、40、50、60 min時(shí)按“2.3.3”項(xiàng)下方法顯色后，以50%乙醇為空白對(duì)照，采用紫外分光光度計(jì)于510 nm波長處測定吸光度。結(jié)果顯示，吸光度的RSD為2.42%（n=6），表明供試品溶液于室溫下放置60 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 加樣回收率試驗(yàn) 取苦杏仁皮粉末約5 g，精密稱定，共6份，分別加入“2.3.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液10 mL，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.3”項(xiàng)下方法顯色后，以50%乙醇為空白對(duì)照，采用紫外分光光度計(jì)于510 nm波長處測定吸光度并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.3.8 樣品含量測定 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.3.3”項(xiàng)下方法顯色后，以50%乙醇為空白對(duì)照，采用紫外分光光度計(jì)于510 nm波長處測定吸光度并按“2.3.5”項(xiàng)下方法計(jì)算樣品含量。

2.4 苦杏仁皮中DF和黃酮提取工藝優(yōu)化的單因素實(shí)驗(yàn)

2.4.1 料液比 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，固定pH6、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度1.5%、酶解溫度65 ℃、酶解時(shí)間2 h，按“2.1”項(xiàng)下方法同步提取DF和黃酮，分別按“2.2”“2.3.8”項(xiàng)下方法計(jì)算兩者含量，考察不同料液比（1 ∶ 10、1 ∶ 20、1 ∶ 30）對(duì)DF和黃酮含量的影響。各條件平行操作3次，取平均值，結(jié)果見圖1A。由圖1A可知，隨著料液比的降低，DF含量逐漸降低，黃酮含量呈先增加后降低的趨勢;當(dāng)料液比為1 ∶ 10時(shí)，DF含量最高;當(dāng)料液比為1∶20時(shí)，黃酮含量最高;經(jīng)one-way ANOVA檢驗(yàn)可知，料液比對(duì)DF和黃酮含量的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），故選擇料液比1 ∶ 10～1 ∶ 30進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.4.2 pH 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，固定料液比1 ∶ 20、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度1.5%、酶解溫度65 ℃、酶解時(shí)間2 h，按“2.1”項(xiàng)下方法同步提取DF和黃酮，分別按“2.2”“2.3.8”項(xiàng)下方法計(jì)算兩者含量，考察不同pH（5、6、7）對(duì)DF和黃酮含量的影響。各條件平行操作3次，取平均值，結(jié)果見圖1B。由圖1B可知，隨著pH的增加，DF含量呈先略降低后略增加的趨勢，但總體較平穩(wěn)，黃酮含量逐漸降低;當(dāng)pH為7時(shí)，DF含量最高;當(dāng)pH為5時(shí)，黃酮含量最高;經(jīng)one-way ANOVA檢驗(yàn)可知，pH對(duì)DF和黃酮含量的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），故選擇pH5～7進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.4.3 木瓜蛋白酶溶液濃度 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，固定料液比1 ∶ 20、pH6、α-淀粉酶溶液濃度1.5%、酶解溫度65 ℃、酶解時(shí)間2 h，按“2.1”項(xiàng)下方法同步提取DF和黃酮，分別按“2.2”“2.3.8”項(xiàng)下方法計(jì)算兩者含量，考察不同木瓜蛋白酶溶液濃度（0.1%、0.5%、0.9%）對(duì)DF和黃酮含量的影響。各條件平行操作3次，取平均值，結(jié)果見圖1C。由圖1C可知，隨著木瓜蛋白酶溶液濃度的增加，DF和黃酮含量均呈先降低后增加的趨勢，均在木瓜蛋白酶溶液濃度為0.1%時(shí)達(dá)到峰值;經(jīng)one-way ANOVA檢驗(yàn)可知，木瓜蛋白酶溶液濃度對(duì)DF和黃酮含量的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），故選擇木瓜蛋白酶溶液濃度0.1%～0.9%進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.4.4 α-淀粉酶溶液濃度 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，固定料液比1 ∶ 20、pH6、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、酶解溫度65 ℃、酶解時(shí)間2 h，按“2.1”項(xiàng)下方法同步提取DF和黃酮，分別按“2.2”“2.3.8”項(xiàng)下方法計(jì)算兩者含量，考察不同α-淀粉酶溶液濃度（0.5%、1.5%、2.5%）對(duì)DF和黃酮含量的影響。各條件平行操作3次，取平均值，結(jié)果見圖1D。由圖1D可知，隨著α-淀粉酶溶液濃度的增加，DF含量呈先降低后增加的趨勢，當(dāng)α-淀粉酶溶液濃度為0.5%時(shí)達(dá)到最高;黃酮含量呈先增加后降低的趨勢，當(dāng)α-淀粉酶溶液濃度為1.5%時(shí)達(dá)到最高;經(jīng)one-way ANOVA檢驗(yàn)可知，α-淀粉酶溶液濃度對(duì)DF和黃酮含量的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），故選擇α-淀粉酶溶液濃度0.5%～2.5%進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.4.5 酶解溫度 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，固定料液比1 ∶ 20、pH6、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度1.5%、酶解時(shí)間2 h，按“2.1”項(xiàng)下方法同步提取DF和黃酮，分別按“2.2”“2.3.8”項(xiàng)下方法計(jì)算兩者含量，考察不同酶解溫度（50、65、80 ℃）對(duì)DF和黃酮含量的影響。各條件平行操作3次，取平均值，結(jié)果見圖1E。由圖1E可知，隨著酶解溫度的增加，DF和黃酮含量均無明顯變化;經(jīng)one-way ANOVA檢驗(yàn)可知，酶解溫度對(duì)DF含量的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而對(duì)黃酮含量的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），故從經(jīng)濟(jì)和節(jié)能角度考慮，暫不將酶解溫度作為后續(xù)正交實(shí)驗(yàn)的考察因素，選擇酶解溫度50 ℃。

2.4.6 酶解時(shí)間 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，固定料液比1 ∶ 20、pH6、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度1.5%、酶解溫度50 ℃，按“2.1”項(xiàng)下方法同步提取DF和黃酮，分別按“2.2”“2.3.8”項(xiàng)下方法計(jì)算兩者含量，考察不同酶解時(shí)間（1、2、3 h）對(duì)DF和黃酮含量的影響。各條件平行操作3次，取平均值，結(jié)果見圖1F。由圖1F可知，隨著酶解時(shí)間的延長，DF和黃酮含量均無明顯變化;經(jīng)one-way ANOVA檢驗(yàn)可知，酶解時(shí)間對(duì)DF和黃酮含量的影響均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），故從經(jīng)濟(jì)和節(jié)能角度考慮，暫不將酶解時(shí)間作為后續(xù)正交實(shí)驗(yàn)的考察因素，選擇酶解時(shí)間1 h。

2.5 苦杏仁皮中DF和黃酮提取工藝優(yōu)化的正交實(shí)驗(yàn)

2.5.1 正交實(shí)驗(yàn) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以料液比（A）、pH（B）、木瓜蛋白酶溶液濃度（C）、α-淀粉酶溶液濃度（D）為考察因素，DF和黃酮含量為指標(biāo)，采用L9（34）正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。將DF和黃酮含量分別賦予50%的權(quán)重計(jì)算綜合評(píng)分：綜合評(píng)分=（DF含量/DF含量最大值）×0.5+（黃酮含量/黃酮含量最大值）×0.5。綜合評(píng)分越高，表示在該實(shí)驗(yàn)因素條件下，苦杏仁皮中DF和黃酮的含量越高[20-21]。苦杏仁皮提取工藝優(yōu)化的因素與水平見表2，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案與結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。

由表3可知，各因素對(duì)DF和黃酮含量影響的大小順序依次為B>A>D>C，即pH>料液比>α-淀粉酶溶液濃度>木瓜蛋白酶溶液濃度，得到最優(yōu)提取工藝為A1B1C2D1，即料液比1 ∶ 10、pH5，木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度0.5%。各因素對(duì)DF和黃酮含量的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），其中pH的影響最大，隨后依次為料液比、α-淀粉酶溶液和木瓜蛋白酶溶液濃度，方差分析結(jié)果和極差分析結(jié)果一致。

2.5.2 最優(yōu)提取工藝的確定 綜合分析單因素和正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得到最優(yōu)提取工藝如下：料液比1 ∶ 10、pH5、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度0.5%、酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間1 h。

2.5.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取苦杏仁皮粉末約10 g，精密稱定，按上述最優(yōu)提取工藝同步提取DF和黃酮，分別按“2.2”“2.3.8”項(xiàng)下方法計(jì)算兩者含量。平行操作3次，取平均值，結(jié)果見表5。由表5可知，DF的平均含量為0.801 g/g（RSD=1.95%，n=3），黃酮的平均含量為2.135 mg/g（RSD=2.44%，n=3），平均綜合評(píng)分為0.988分（RSD=0.81%，n=3），表明所得最優(yōu)提取工藝穩(wěn)定、可行。

3 討論

隨著苦杏仁及其炮制品在藥品、保健品、食品等領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，使得其副產(chǎn)物苦杏仁皮的廢棄量較大，考慮到苦杏仁皮中DF、黃酮的藥用價(jià)值，故有必要對(duì)其資源化利用方法進(jìn)行探討，以挖掘其潛在價(jià)值，減少環(huán)境污染，促進(jìn)其在保健、醫(yī)藥和輕工日化等方面的高值化利用?？嘈尤势ぶ械腄F可通過改善腸道菌群來促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)，維持大腸上皮細(xì)胞健康，具有預(yù)防慢性腎病的功效[22];此外，DF可提高食品的營養(yǎng)閾值，還具有改善棉織物涂層的微觀結(jié)構(gòu)、成為新型抗氧化包裝膜等應(yīng)用價(jià)值[23-24]。黃酮作為抗氧化劑，具有清除羥基自由基和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的能力，可抑制自由基生成、修復(fù)損傷細(xì)胞、延緩細(xì)胞衰老與凋亡、改善心血管平滑肌的收縮/舒張功能、擴(kuò)張血管，可用于防治心血管疾病、偏頭痛、動(dòng)脈粥樣硬化等癥[8-10]。

本研究采用生物酶輔助提取了苦杏仁皮中的DF和黃酮，并以料液比、pH、木瓜蛋白酶溶液濃度、α-淀粉酶溶液濃度、酶解溫度和酶解時(shí)間為考察因素，DF和黃酮含量為指標(biāo)，進(jìn)行了單因素實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，隨著料液比的降低，DF含量逐漸降低，而黃酮含量呈先增加后降低的趨勢。筆者分析原因可能為：當(dāng)提取溶劑較少時(shí)，苦杏仁皮中的溶質(zhì)溶出不充分;而當(dāng)料液比為1 ∶ 30時(shí)，雜質(zhì)成分不斷析出，使得黃酮的溶出受到影響，加之在此料液比條件下的操作時(shí)間更長，可能造成黃酮損耗。隨著pH的增加，DF含量變化總體較平穩(wěn)，而黃酮含量逐漸減少，這可能與部分黃酮被中和有關(guān)。木瓜蛋白酶溶液濃度對(duì)DF和黃酮含量的影響趨勢均為先降低后升高，對(duì)前者的影響可能是不同酶用量對(duì)可溶性DF與不溶性DF轉(zhuǎn)化綜合影響的結(jié)果，對(duì)后者則可能是過低的酶溶液濃度不足以破碎細(xì)胞壁，而過高的酶溶液濃度提取出的雜質(zhì)更多。當(dāng)α-淀粉酶溶液濃度為0.5%時(shí)，α-淀粉酶可能優(yōu)先與淀粉或其他物質(zhì)發(fā)生催化反應(yīng)，而未及時(shí)與黃酮作用;當(dāng)增加α-淀粉酶溶液濃度時(shí)，黃酮含量增加，但過飽和的酶則與黃酮形成復(fù)合物，反而使得黃酮含量降低[25]。隨著α-淀粉酶溶液濃度的增加，DF含量呈先降低后增加的趨勢，這可能與可溶性DF和原料中淀粉的減少有關(guān)。

經(jīng)綜合評(píng)分法分析后可知，pH對(duì)DF和黃酮含量的影響較大，其次分別為料液比、α-淀粉酶溶液濃度和木瓜蛋白酶溶液濃度，結(jié)合正交實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)提取工藝為料液比1 ∶ 10、pH5、木瓜蛋白酶溶液濃度0.5%、α-淀粉酶溶液濃度0.5%、酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間1 h。經(jīng)驗(yàn)證，DF的平均含量為0.801 g/g（RSD=1.95%，n=3），黃酮的平均含量為2.135 mg/g（RSD=2.44%，n=3），平均綜合評(píng)分為0.988分（RSD=0.81%，n=3）。

綜上所述，所得最優(yōu)提取工藝穩(wěn)定、可行。

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2021080293.

（收稿日期：2021-11-02 修回日期：2022-02-18）

（編輯：陳 宏）