殼聚糖基抑菌凝膠劑的制備及其性能

張 濤， 王富平， 陳國(guó)寶， 吳基玉， 龐亞妮， 陳忠敏

(1. 重慶理工大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院， 重慶 400054； 2. 重慶華倫醫(yī)療器械有限公司， 重慶 400039)

創(chuàng)傷是由多因素引起的真皮淺層及表皮層的損傷，創(chuàng)傷處常常會(huì)出現(xiàn)炎癥反應(yīng)及細(xì)菌感染，導(dǎo)致難以愈合[1-2]?？股厥悄壳皯?yīng)用最廣泛的抗菌藥物，但其穩(wěn)定性較差，加上不規(guī)范使用造成大量耐藥菌出現(xiàn)[3]。無(wú)機(jī)抗菌劑如銀、鋅、銅、鈦等金屬氧化物及其離子具有廣譜抑菌性,但其潛在的毒性及生物安全性還有待進(jìn)一步研究[4]。凝膠劑具有潤(rùn)滑皮膚、保護(hù)創(chuàng)面的作用，且能夠增加藥物在皮膚局部累積作用達(dá)到持續(xù)釋放，因此,從生物材料的角度制備一種在傷面處具有抑菌和促愈合的凝膠劑是非常有意義的。

凝膠劑一般要求常溫時(shí)保持膠狀，均勻細(xì)膩，凝膠基底與藥物無(wú)理化作用，在傷面處可通過(guò)釋放生物制劑促進(jìn)上皮化[5]。針對(duì)皮膚表面的細(xì)菌感染和全層皮膚損傷修復(fù)，采用具有良好抑菌性能的天然聚合物制備凝膠劑是最優(yōu)選擇，因?yàn)樘烊痪酆衔锉群铣删酆衔锞哂懈玫纳锵嗳菪院透偷拿庖咴?。絲素蛋白(SF)和 絲膠蛋白(SS)是從家蠶蠶繭中提取的天然大分子蛋白。有研究表明，SF具有良好的生物相容性，有抑菌和促愈合作用[6]；SS同樣具有諸多優(yōu)異的生物活性，如抑菌、抗凝血以及促進(jìn)細(xì)胞黏附和增殖等作用[7]。SS、SF都具有良好的抑菌性、促創(chuàng)口愈合性能、可降解性和低免疫原性，適于作為傷口敷料的原料。殼聚糖(CS)是一種天然多糖，具有良好的生物相容性和抑菌性，能夠生物降解且產(chǎn)物無(wú)毒害，可以促進(jìn)傷口修復(fù)和組織再生，是良好的生物醫(yī)用材料[8]。甘油磷酸鈉(GP)為弱堿性化合物(pH值為6.34)，無(wú)細(xì)胞毒性。殼聚糖-甘油磷酸鈉體系由于高含水量、溫敏特性和良好的生物相容性，已被廣泛應(yīng)用到組織工程領(lǐng)域[9]，但該凝膠體系是通過(guò)物理交聯(lián)形成的，存在力學(xué)性能低、黏度小和抑菌效果較差等問(wèn)題。

基于以上對(duì)殼聚糖-甘油磷酸鈉體系、SS和SF在醫(yī)用材料方面的研究，本文以殼聚糖為基底，通過(guò)添加羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)改性制備得到黏度適中便于涂抹的凝膠劑基質(zhì)，再分別加入SF、SS以提高凝膠劑基質(zhì)的抑菌性能，篩選出一種具有良好生物相容性、抑菌性的復(fù)合凝膠劑。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

材料：中等級(jí)蠶繭，重慶纖維檢驗(yàn)所；透析袋(長(zhǎng)為0.4 m，寬為44 mm，截留分子質(zhì)量為8～12 ku)，北京索萊寶生物技術(shù)有限公司；中性蛋白酶(活力為20萬(wàn)U/g)，美國(guó)Sigma公司；殼聚糖(CS,脫乙酰度≥95%)、Triton X-100，生工生物股份有限公司；甘油磷酸鈉(GP)、羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，成都科龍化工試劑廠；牛肉膏、蛋白胨，北京奧博星生物科技有限公司；金黃色葡萄球菌、大腸桿菌，由重慶理工大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室提供；胰蛋白酶，美國(guó)Gibco公司；DMEM HIGH培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)，美國(guó)HyClone公司；氨芐青霉素(Ampicillin)、硫酸鏈霉素(Streptomycin sulfate)、磷酸鹽緩沖液(PBS)、二甲基亞砜(PMSO)，北京Solarbio 生物科技有限公司；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)、碘化丙啶(PI)，上海翔圣生物科技有限公司；實(shí)驗(yàn)大鼠(SD品系)，重慶萊彼特生物科技有限公司；濃鹽酸、碳酸鈉、碳酸氫鈉、異丙醚等均為分析純，市售。

儀器：SW-CC-3F超凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)；FD-1-50真空冷凍干燥機(jī)(上海比郎儀器有限公司)；Varian 640型傅里葉紅外光譜儀(美國(guó)Varian公司)；SHA-C水浴恒溫振蕩器(江蘇金壇中大儀器廠)；Heraeus CO2培養(yǎng)箱(賽默飛世爾科技有限公司)；PHS-3C型pH計(jì)(上海虹益儀器有限公司)；DDS-3C型臺(tái)式電導(dǎo)率儀(上海雷磁儀器有限公司)；HH-8型數(shù)顯式恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)；Multiskan GO酶標(biāo)儀(美國(guó) Thermo公司)。

1.2 試樣的制備

1.2.1 SS和SF的制備

將繭殼用異丙醚浸泡2 d除蠟后，用無(wú)水乙醇浸泡2 d除去雜質(zhì)，然后放入去離子水中沸煮約6 h脫膠，去除絲素蛋白(SF)纖維余下淡黃色液體，將淡黃色液體經(jīng)過(guò)超濾膜過(guò)濾后，經(jīng)冷凍干燥得到SS粉末[10]。

按照文獻(xiàn)[11]方法將蠶繭用異丙醚浸泡2 d除蠟后，用無(wú)水乙醇浸泡2 d除雜。將處理好的蠶繭放入去離子水中煮沸脫膠得到纖維狀絲素(SF)，將絲素纖維溶解在CaCl2/C2H5OH/H2O中，再裝入透析袋在蒸餾水中透析3 d取出，用中性蛋白酶酶解，然后用超濾膜過(guò)濾，真空冷凍干燥得到SF粉末。

1.2.2 復(fù)合凝膠劑的制備

將CS溶解在0.1 mol/L的HCl中，配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的CS溶液；將GP溶解在0.1 mol/L的NaHCO3溶液中，配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%的GP溶液。在冰浴條件下，將4.5 mL的GP溶液緩慢加入至10 mL的CS溶液中并不斷攪拌，得到CS/GP體系。再向CS/GP體系中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的CMC-Na粉末，于37 ℃水浴鍋中水浴加熱3～4 min，制得外觀良好，均勻無(wú)顆粒感的凝膠劑基質(zhì)。向凝膠劑基質(zhì)中加入不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(5%、10%、15%)的SS或SF，攪拌均勻后即可得到復(fù)合凝膠劑。

1.3 測(cè)試與表征

1.3.1 抑菌性測(cè)試

參照文獻(xiàn)[12]方法采用浸提液法對(duì)復(fù)合凝膠劑進(jìn)行抑菌性測(cè)試。將凝膠劑樣品用紫外光照射30 min后，取約1 mL凝膠劑加入9 mL無(wú)菌水，封存在15 mL的離心管中。離心管置于恒溫振蕩器(37 ℃、100 r/min)放置3 d，隨后將離心管轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)，用針式濾膜過(guò)濾除雜、除菌，即可得到浸提液。用牛肉膏、蛋白胨、瓊脂粉、NaCl、去離子水配制普通溶菌肉湯培養(yǎng)基(LB培養(yǎng)基)。先將100 μL浸提液均勻涂布在平板上，待完全吸收后，再均勻涂布100 μL細(xì)菌懸液(濃度為1×109CFU/mL)。培養(yǎng)基倒置培養(yǎng)12 h。由對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的菌落數(shù)來(lái)確定復(fù)合凝膠劑的抑菌率，計(jì)算公式[13]為

式中：a0為涂抹含有絲素蛋白或絲膠蛋白的復(fù)合凝膠劑浸提液后平板的菌落數(shù)；a為涂抹凝膠劑基質(zhì)浸提液后平板的菌落數(shù)。

1.3.2 化學(xué)結(jié)構(gòu)表征

采用傅里葉變換紅外光譜儀(FI-IR)測(cè)試試樣的紅外光譜，測(cè)試范圍為4 500～400 cm-1,分辨率為4 cm-1。

1.3.3 抑菌機(jī)制分析

1.3.3.1細(xì)菌懸液吸光度(OD)測(cè)定 首先將大腸桿菌懸液(1×107CFU/mL)按每孔100 μL接種于96孔板上，分別加入不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0%、25%、50%、75%、100%)的復(fù)合凝膠劑浸提液、陽(yáng)性對(duì)照組(含0.1% Triton X-100、50 μg/mL的氨芐青霉素)各100 μL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%的凝膠劑浸提液加入到100 μL的無(wú)菌水中作為空白對(duì)照。再將96孔板放在生化培養(yǎng)箱中于37 ℃培養(yǎng)12 h，然后取出加入碘化丙啶(PI)使其終質(zhì)量濃度為50 μg/mL。于37 ℃孵育30 min后在酶標(biāo)儀上測(cè)定OD值，激發(fā)光波長(zhǎng)為488 nm，每組測(cè)定6個(gè)平行樣品，取平均值，以加入Triton X-100組測(cè)得的OD值認(rèn)定透過(guò)率為100%，計(jì)算其他組中的相對(duì)透過(guò)率。其計(jì)算公式為

式中：X為細(xì)胞膜相對(duì)透過(guò)率，%；OD1和OD2分別為其他各組和Triton X-100組的吸光度平均值。

1.3.3.2細(xì)菌電導(dǎo)率測(cè)試 用接種環(huán)取下具有代表性的菌落，置于適量的液體培養(yǎng)基中，在溫度為37 ℃，轉(zhuǎn)速為150 r/min條件下振蕩搖晃液體培養(yǎng)基至細(xì)菌濃度達(dá)1×107CFU/mL，分別向細(xì)菌懸液中加入10 mL含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(5%、10%、15%)SS的凝膠劑浸提液作為材料實(shí)驗(yàn)組。采用臺(tái)式電導(dǎo)率儀每隔2 h測(cè)量混勻后溶液的電導(dǎo)率，以菌液中加入不含SS的凝膠劑基質(zhì)浸提液作為對(duì)照組，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.3.4 生物安全性測(cè)試

1.3.4.1復(fù)合凝膠劑的細(xì)胞毒性檢測(cè) 用MTT法檢測(cè)凝膠浸提液對(duì)L929細(xì)胞增殖活性的影響。將細(xì)胞在DMEM完全培養(yǎng)基(DMEMHIGH培養(yǎng)基、胎牛血清、雙抗體積比為9∶1∶0.2)中培養(yǎng)，當(dāng)90%細(xì)胞貼壁后用胰蛋白酶(0.05%)去除貼壁，將處于對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的細(xì)胞懸液(5×104個(gè)/mL)按每孔200 μL接種于96孔板，置于CO2培養(yǎng)箱中。待細(xì)胞完全貼壁后棄去原培養(yǎng)基，分別加入材料實(shí)驗(yàn)組(含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(0%、25%、50%、75%、100%)浸提液的DMEM完全培養(yǎng)基)、空白對(duì)照組(DMEM完全培養(yǎng)基)各200 μL繼續(xù)在相同條件培養(yǎng)，4 h后用移液槍移除96孔板內(nèi)液體，加入150 μL的DMSO放入酶標(biāo)儀中振蕩10 min，檢測(cè)在波長(zhǎng)為490 nm處的OD值，每組平行測(cè)定6個(gè)樣品，取平均值。以細(xì)胞相對(duì)增長(zhǎng)率(Gr)來(lái)評(píng)定復(fù)合凝膠劑的細(xì)胞毒性，其計(jì)算公式為

式中，OD和OD0分別為材料實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組的吸光度平均值。參考文獻(xiàn)[14]以空白對(duì)照組細(xì)胞相對(duì)增長(zhǎng)率Gr為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)復(fù)合凝膠劑劃分安全等級(jí)。

1.3.4.2復(fù)合凝膠劑的皮膚刺激性測(cè)試 選取成年健康雌性SD大鼠9只(體重為220 g，飼養(yǎng)溫度為(23±3) ℃，每日光照12 h，自由飲食)，3只1組隨機(jī)分為3組，實(shí)驗(yàn)前以大鼠脊柱為中線，剪去背部毛發(fā)制作一個(gè)1.5 cm×1.5 cm的皮膚暴露面，作為實(shí)驗(yàn)和觀察部位。用吸收2 mL甲醛溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%)的醫(yī)用紗布作為陽(yáng)性對(duì)照，均勻涂抹2 cm3復(fù)合凝膠劑的醫(yī)用紗布作為實(shí)驗(yàn)組，將紗布包裹在大鼠的實(shí)驗(yàn)部位，在接觸0、(8±0.5)、(24±2)、(48±2) h后，取下紗布作觀察記錄。

2 結(jié)果與討論

2.1 凝膠劑的抑菌性能分析

圖1示出加入含SS或SF的復(fù)合凝膠劑浸提液涂布平板后形成的菌落分布?？梢钥闯?，隨著SS或SF在凝膠劑中質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，平板上菌落數(shù)越少。但是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，隨著SS或SF質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，復(fù)合凝膠劑的黏度降低甚至無(wú)法交聯(lián)，這可能是因?yàn)镾S和SF表面存在的許多可以交聯(lián)和修飾的活性基團(tuán)，在溫度為37 ℃ 時(shí)與CS部分基團(tuán)相結(jié)合，影響到CS鏈間片段的物理結(jié)合，導(dǎo)致凝膠劑黏度下降[15-17]，因此，本文實(shí)驗(yàn)沒(méi)有進(jìn)一步在凝膠劑基底中添加更高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的SS或SF。

與未添加SS和SF的凝膠劑基質(zhì)浸提液相比，加入SS、SF后凝膠劑的浸提液都表現(xiàn)出了更好的抑菌效果，抑菌統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖2所示。通過(guò)計(jì)算平板上的菌落數(shù)來(lái)評(píng)估凝膠劑的抑菌性能發(fā)現(xiàn)，隨著SS和SF質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，復(fù)合凝膠劑的抑菌性能提高。但相比之下，加入SS復(fù)合凝膠劑的抑菌效果更加優(yōu)異，當(dāng)SS質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌(革蘭氏陽(yáng)性菌)的抑菌率達(dá)到(86.30±2.51)%，對(duì)大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)的抑菌率為(96.20±3.40)%。

圖1 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的SS和SF復(fù)合凝膠劑浸提液抑菌效果Fig.1 Antibacterial effects of different mass fractions of SS (a) and SF (b) composite gel extracts

圖2 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的SS和SF 復(fù)合凝膠劑浸提液抑菌性Fig.2 Antibacterial properties of different mass fractions of SS (a) and SF (b) composite gel extracts

2.2 凝膠劑的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析

本文采用紅外光譜法來(lái)分析凝膠劑中各單一組分與SS復(fù)合凝膠劑(SS質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%)在二級(jí)構(gòu)象上的差異性。圖3示出本文實(shí)驗(yàn)所用的原材料及復(fù)合凝膠劑的紅外光譜?？梢钥闯觯珻S在1 667 cm-1處的特征峰歸屬于酰胺Ⅰ，而在1 056和985 cm-1處的特征峰歸因于C—O拉伸的骨骼振動(dòng)。SS具有的β-折疊結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)于1 653 cm-1(酰胺Ⅰ)、1 542 cm-1(酰胺Ⅱ)和1 230 cm-1(酰胺Ⅲ)處的特征峰。復(fù)合凝膠劑紅外光譜中酰胺Ⅰ的特征峰偏移至1 624 cm-1處且強(qiáng)度降低，表明有大量強(qiáng)氫鍵形成。此外，CS(3 345 cm-1)、SS(3 304 cm-1)、GP(3 218 cm-1)、CMC-Na(3 302 cm-1)中均出現(xiàn)—OH的伸縮振動(dòng)特征峰，而在復(fù)合凝膠劑中未出現(xiàn)新峰，但該特征峰向左偏移至3 355 cm-1處。

圖3 復(fù)合凝膠劑及其各組分的紅外光譜Fig.3 Infrared spectra of composite gel and its component

2.3 凝膠劑的抑菌機(jī)制分析

CS和SS的抑菌機(jī)制都是改變了細(xì)菌外膜的通透性，導(dǎo)致細(xì)菌外膜的電導(dǎo)率和完整性改變[18]。為研究復(fù)合凝膠劑的抑菌機(jī)制特別是對(duì)細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響，選取革蘭氏陰性菌大腸桿菌，測(cè)定加入不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的復(fù)合凝膠劑浸提液后細(xì)菌懸液的OD值，結(jié)果如表1所示。對(duì)多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析(P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)發(fā)現(xiàn)經(jīng)浸提液處理后的大腸桿菌懸液OD值明顯升高，且隨著浸提液質(zhì)量分?jǐn)?shù)的升高，OD值呈梯度上升(以Triton X-100為陽(yáng)性組作為參考)，OD值的上升顯示了大腸桿菌胞內(nèi)成分的大量釋放，說(shuō)明細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性增加，復(fù)合凝膠劑破壞了細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性，從而發(fā)揮抑菌效果。

表1 不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)浸提液對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜完整性的影響Tab.1 Effect of different mass fraction extracts on integrity of bacterial cell membrane

為進(jìn)一步驗(yàn)證復(fù)合凝膠劑的抑菌機(jī)制是其破壞了細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性，測(cè)定了復(fù)合凝膠劑浸提液處理大腸桿菌8 h內(nèi)電導(dǎo)率的變化，結(jié)果如圖4所示。

圖4 凝膠劑浸提液處理大腸桿菌8 h內(nèi)電導(dǎo)率的變化Fig.4 Change of electrical conductivity of gel in 8 h after treatment of Escherichia coli

從圖4可以看出，在0～8 h內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的細(xì)菌懸液電導(dǎo)率都增加，這是由于細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中通過(guò)代謝作用將不帶電或帶弱電物質(zhì)(碳水化合物、蛋白質(zhì)等)轉(zhuǎn)化為電活性物質(zhì)，因此，隨著細(xì)菌的生長(zhǎng),培養(yǎng)液的電導(dǎo)率上升。在實(shí)驗(yàn)最初的2 h內(nèi)含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)SS的復(fù)合凝膠劑浸提液處理后的菌液電導(dǎo)率增加最為顯著,而后增速減慢。由此可見，凝膠劑的抑菌作用主要發(fā)生在最初的2 h內(nèi)。隨著SS質(zhì)量分?jǐn)?shù)的提高，對(duì)應(yīng)時(shí)間內(nèi)電導(dǎo)率降低，表明SS能夠阻礙細(xì)菌代謝過(guò)程中的離子交換，細(xì)菌懸液電導(dǎo)率的降低可能是由于含有絲氨酸、天冬氨酸、甘氨酸的SS通過(guò)靜電相互作用與大腸桿菌細(xì)胞膜發(fā)生誘導(dǎo)效應(yīng)。SS的加入使帶電離子減少，細(xì)菌膜的滲透性下降，細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性被破壞[19]，由此確認(rèn)了復(fù)合凝膠劑破壞細(xì)菌細(xì)胞膜完整性的抑菌作用機(jī)制。

2.4 凝膠劑的生物安全性分析

2.4.1 凝膠劑的細(xì)胞毒性

作為潛在的外用創(chuàng)傷凝膠劑，應(yīng)具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的作用。圖5示出采用MTT法檢測(cè)不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的復(fù)合凝膠劑浸提液對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響結(jié)果。可以看出，細(xì)胞在含有不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)SS復(fù)合凝膠劑浸提液的培養(yǎng)基中相對(duì)增長(zhǎng)率均大于100%。根據(jù)GB/T 16886.5—2017《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第5部分:體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)》，經(jīng)實(shí)驗(yàn)材料處理后，細(xì)胞的相對(duì)增長(zhǎng)率大于75%即可被認(rèn)為無(wú)細(xì)胞毒性[20]，因此，本文制備的凝膠劑無(wú)細(xì)胞毒性。在加入浸提液24 h后各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)情況均比空白組要好，且隨著浸提液中SS質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，OD值也在相應(yīng)增大。說(shuō)明該凝膠劑具有良好的生物相容性并且能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖，滿足外用創(chuàng)傷的基本要求，可作進(jìn)一步的應(yīng)用研究。

圖5 L929細(xì)胞在含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的 浸提液培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況Fig.5 Growth of L929 cells in extract medium containing different mass concentration

2.4.2 凝膠劑的皮膚刺激性

圖6示出復(fù)合凝膠劑對(duì)大鼠皮膚刺激性結(jié)果?？梢钥闯觯和磕兹┎课黄つw在8 h時(shí)出現(xiàn)紅腫，隨著時(shí)間延長(zhǎng)皮膚腫塊增大，24 h時(shí)皮膚出現(xiàn)紅斑且隨時(shí)間增加紅斑越明顯；而涂抹凝膠劑部位皮膚一直未出現(xiàn)紅腫和紅斑，并且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，涂抹處皮膚更加紅潤(rùn)光滑。這可能是因?yàn)镾S降解為各種氨基酸被機(jī)體吸收，為表皮細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而促進(jìn)表皮修復(fù)[21]。

圖6 大鼠皮膚刺激反應(yīng)圖Fig.6 Rat skin irritation response chart.(a) Skin reaction after applying formaldehyde; (b) Skin reaction after applying gel

3 結(jié) 論

本文以殼聚糖(CS)為基材通過(guò)改性制備了殼聚糖基抑菌凝膠劑，并探討了凝膠劑的抑菌性、二級(jí)構(gòu)象、抑菌機(jī)制及生物相容性。研究結(jié)果表明：在以CS為凝膠劑基質(zhì)中加入絲膠蛋白(SS)比加入絲素蛋白(SF)表現(xiàn)出更加優(yōu)異的抑菌性，當(dāng)絲膠蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌率為(86.30±2.51)%，對(duì)大腸桿菌的抑菌率為(96.20±3.40)%；所制備的復(fù)合凝膠劑的二級(jí)構(gòu)象中有大量強(qiáng)氫鍵形成，表明其黏度和穩(wěn)定性增強(qiáng)；復(fù)合凝膠劑通過(guò)改變細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性從而發(fā)揮抑菌作用；復(fù)合凝膠劑無(wú)細(xì)胞毒性，無(wú)皮膚刺激性。本文實(shí)驗(yàn)制備的復(fù)合凝膠劑性能較優(yōu)，在生物材料領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。