飼喂枸杞枝條顆粒飼料對肉牛增重和一些免疫指標(biāo)的影響

王建東，侯鵬霞，馬秀明，于 洋，梁小軍*

(1.寧夏農(nóng)林科學(xué)院動物科學(xué)研究所，寧夏銀川 750002；2.銀川市西夏區(qū)三鑫綠源肉牛養(yǎng)殖專業(yè)合作社，寧夏銀川 750021)

枸杞枝條含有枸杞多糖以及黃酮，枸杞多糖含量2.21%～5.70%，總黃酮0.24%～0.57%，枸杞枝條的添加是按照課題組研發(fā)飼料新產(chǎn)品“肉牛免疫增效功能性預(yù)混料”，肉牛日糧添加枸杞多糖3 g/d。本次測得枸杞枝條多糖含量4.5%，考慮到枝條中枸杞多糖利用效率問題，以枸杞多糖為基礎(chǔ)設(shè)置了不同水平添加量0、0.65、0.975、1.3 kg/頭的枸杞枝條[1]。肉牛產(chǎn)業(yè)是寧夏貧困區(qū)脫貧攻堅、精準(zhǔn)扶貧的支柱產(chǎn)業(yè)，通過利用枸杞產(chǎn)業(yè)中的廢棄資源在肉牛產(chǎn)業(yè)中進(jìn)行資源化利用，是枸杞產(chǎn)業(yè)的延申和寧夏兩大主產(chǎn)業(yè)的有機(jī)融合，利用其所含的枸杞多糖可以提高肉牛機(jī)體免疫力水平，枸杞殘次果中的枸杞多糖可以誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生免疫球蛋白、細(xì)胞因子等，是一種天然免疫調(diào)節(jié)劑[1]。本研究將枸杞枝條通過機(jī)械揉絲、粉碎等物理方法進(jìn)行加工后制成顆粒飼料，添加到育肥牛日糧中，研究其在肉牛育肥和免疫力方面的作用，為枸杞枝條資源化利用提供技術(shù)支撐，也為肉牛健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 枸杞枝條顆粒飼料 枸杞枝條收集于寧夏枸杞主產(chǎn)區(qū)，水分含量為10%～15%，采用刀片式粉碎機(jī)，錘式粉碎機(jī)兩段粉碎法粉碎成小段(≤5 cm)，壓成顆粒。通過測定其中多糖含量為4.5%，水分含量為3.77%，粗蛋白質(zhì)含量為18.4%，粗灰分含量為10.0%。

1.1.2 主要檢測試劑盒 肉牛免疫球蛋白A(IgA)ELISA 試劑盒(批號E20200514-77090A)、免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒(批號E20200518-77091A)、免疫球蛋白M(IgM)ELISA 試劑盒(批號E20200520-77092A)、γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒(批號E20200520-77020A)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)ELISA 試劑盒(批號E20200519-77028A)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)ELISA 試劑盒(批號E20200521-77029A)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)ELISA 試劑盒(批號E20200519-77031A)、白細(xì)胞介素-13(IL-13)ELISA 試劑盒(批號E20200520-77360A)，上?？铺陨锟萍贾行漠a(chǎn)品；人腫瘤壞死因子放射免疫分析藥盒(批號20200520)，北京北方生物技術(shù)研究所產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 酶標(biāo)儀(SM-3)，北京天石天力公司產(chǎn)品；自動洗板機(jī)(ST360W)，上海科華公司產(chǎn)品；電熱恒溫器(HH-W21-600)，天津泰斯特有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)(TDL80-2B)，上海安亭科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；DFM-96 r-放射免疫計數(shù)儀，合肥眾成機(jī)電公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 試驗牛分組 選擇體況相近的西門塔爾雜交育肥牛24頭，隨機(jī)分4組，在基礎(chǔ)日糧中分別添加0 kg/頭(對照組)、低濃度組0.65 kg/頭、中濃度組0.975 kg/頭、高濃度組1.3 kg/頭的枸杞枝條，連續(xù)飼喂60 d，60 d的枸杞枝條顆粒飼料分6次拌好，每次稱好各組的枸杞枝條顆粒加入基礎(chǔ)日糧中拌勻。

1.2.2 血樣采集和稱重 試驗的60 d，分別采集對照組、低濃度組、中濃度組、高濃度組牛的血液，尾靜脈采血0.5 mL，室溫放置1 h，將凝固血與管壁剝離，使血清充分析出，然后于2 000 r/min離心10 min，收集血清。試驗0 d、60 d空腹稱重，記錄數(shù)據(jù)。

1.2.3 外周血液各種免疫因子和相關(guān)激素含量的檢測 采集試驗前后的血清，測定肉牛IgA、IgG、IgM、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-8、IL-13、IGF-1含量嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書步驟操作檢測；腫瘤壞死因子和胰島素嚴(yán)格按照放射免疫分析藥盒操作。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗結(jié)果用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 對育肥肉牛體重、胰島素水平的影響

由表1可見，育肥肉牛試驗前體重差異不顯著(P>0.05)，飼喂60 d后，對照組、中濃度組、高濃度組差異不顯著(P>0.05)，試驗低濃度組、中濃度組、高濃度組差異不顯著(P>0.05)，對照組、低濃度組差異顯著(P<0.05)，且對照組增重1.2 kg/d、低濃度組增重1.73 kg/d、中濃度組增重1.82 kg/d、高濃度組增重1.78 kg/d，中濃度組增重較明顯，IGF-1、INS水平各組差異不顯著(P>0.05)，但可以看出中濃度組激素水平較明顯升高且處于正常范圍。

表1 對育肥肉牛體重和胰島素水平的影響Table 1 Changes of body weight and insulin level in finishing cattle before and after the experiment

2.2 對育肥肉牛免疫因子的影響

由表2可見，育肥肉牛IgA、IgG、IgM、IL-2隨著枸杞枝條顆粒飼料的增加有所增加，飼喂60 d后，IgA、IgG水平試驗組極顯著高于對照組(P<0.01)，IgM水平試驗組較對照組極顯著升高(P<0.01)，中濃度組較低、高濃度組極顯著升高(P<0.01)，IL-2水平各組差異不顯著(P>0.05)，但可以看出中濃度組免疫因子水平較明顯。

表2 對育肥牛免疫球蛋白的影響Table 2 Changes of immunoglobulins in fattening cattle after experiment

由表3可見，育肥肉牛IL-4、IL-8、IL-13、TNF-α、IFN-γ隨著枸杞枝條顆粒飼料的增加有所增加，飼喂60 d后，IL-4水平中、高濃度組較對照組顯著升高(P<0.05)，低濃度組與對照組差異不顯著(P>0.05)，IL-8水平試驗組較對照組極顯著升高(P<0.01)，中濃度組較低濃度組極顯著升高(P<0.01)，IL-13水平試驗組較對照組極顯著升高(P<0.01)，中濃度組較低、高濃度組極顯著升高(P<0.01)，TNF-α水平中濃度組較對照組顯著升高(P<0.05)，低、高濃度與對照組差異不顯著(P>0.05)，IFN-γ水平各組差異不顯著(P>0.05)，但可以看出中濃度組免疫因子水平較明顯。

表3 對試驗牛白細(xì)胞介素的影響Table 3 Changes of immune factors in fattening cattle after experiment

3 討論

3.1 對育肥肉牛體重和胰島素水平的影響

體重是飼料報酬一項重要指標(biāo)，枸杞枝條味甘，適口性好，育肥牛喜歡采食。胰島素(INS)和胰島素樣生長因子1(IGF-1)濃度是評價牛能量平衡狀況的兩個指標(biāo)[2]。本試驗育肥肉牛飼喂60 d后，試驗3組增重1.82 kg/d，增重明顯；IGF-1、INS水平各組差異不顯著(P>0.05)，但可以看出試驗3組激素水平較明顯且處于正常范圍，由于IGF-1對采食量有影響，通過FGF-1，結(jié)合蛋白2 (IGFBP-2)或結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)的濃度可以評價能量平衡狀況。

3.2 對育肥肉牛免疫球蛋白的影響

免疫球蛋白IgG、IgA、IgM是肉牛體內(nèi)重要的免疫球蛋白，植物多糖可以誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生免疫球蛋白，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。有研究表明，育肥架子牛日糧中添加枸杞多糖類飼料預(yù)混劑，飼喂14 d后的含量極顯著的高于飼喂前，說明添加枸杞多糖可提高肉牛的體液免疫能力[3]。本試驗育肥肉牛IgA、IgG、IgM隨著枸杞枝條顆粒飼料的增加在增加，總體試驗表明添加該顆粒飼料0.975 kg/d，效果明顯。

3.3 對育肥肉牛白細(xì)胞介素的影響

IL-2的免疫治療已經(jīng)應(yīng)用多年，IL-2具有促進(jìn)輔助T細(xì)胞分化的作用，并分泌細(xì)胞因子IFN-γ，IL-2除了在輔助T細(xì)胞，還可以促進(jìn)靜息狀態(tài)的CD8+T細(xì)胞向記憶即效應(yīng)T細(xì)胞的分化，說明IL-2有利于免疫記憶反應(yīng)的形成[4]；IL-4的作用促進(jìn)Th2的分化，分泌細(xì)胞因子IL-4、IL-13，體外試驗發(fā)現(xiàn)，IL-4是一種具有多種生物效應(yīng)的細(xì)胞因子，如對于B細(xì)胞、T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和造血細(xì)胞都有免疫作用，可以增強(qiáng)IgG、IgE水平[5]；IL-8具有趨化和激活中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的作用，在急、慢性炎癥、自身免疫性疾病等有重要作用；IL-13作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)B細(xì)胞和單核細(xì)胞功能[6]；TNF-α具有雙重生物學(xué)效應(yīng)，較低濃度主要作為白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的自分泌及旁分泌的調(diào)節(jié)物，參與抵抗細(xì)菌、病毒和寄生蟲的感染，促進(jìn)組織修復(fù)及調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，引起腫瘤細(xì)胞凋亡；IFN-γ具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和抗寄生蟲的作用[7]。育肥架子牛日糧中添加枸杞多糖類飼料預(yù)混劑，飼喂肉牛免疫增效劑7 d，即可促進(jìn)肉牛細(xì)胞因子的分泌[3]。本試驗育肥肉牛IL-2、IL-4、IL-8、IL-13、TNF-α、IFN-γ水平隨著枸杞枝條顆粒飼料的增加有所增加。

枸杞枝條含有一定量的枸杞多糖，枸杞多糖是其發(fā)揮功效的主要物質(zhì)，飼喂枸杞枝條顆粒飼料60 d后，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫球蛋白、細(xì)胞因子等，提高肉牛機(jī)體免疫力，其中以添加量為0.975kg/d效果最好。