胸腺肽制劑的質(zhì)量及安全風(fēng)險(xiǎn)分析

陳小英，楊亞婷，王嫦鶴，劉海靜*

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽(yáng) 712046；2.陜西省食品藥品檢驗(yàn)研究院，西安 710065

胸腺為機(jī)體的重要淋巴細(xì)胞器官，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場(chǎng)所[1]。胸腺肽是從健康豬或小牛胸腺中提取的具有生物活性的多肽類(lèi)混合物，相對(duì)分子質(zhì)量小于10 000道爾頓[2]，其中公認(rèn)為胸腺肽的有效成分是由28個(gè)氨基酸組成的胸腺肽α1(Tα1)。我國(guó)從1973年開(kāi)始研究胸腺肽，在20世紀(jì)80 年代末改進(jìn)并簡(jiǎn)化了胸腺組分5(TF5)的制備工藝，使制品的相對(duì)分子質(zhì)量控制在10 000道爾頓以下[3]。胸腺肽制劑臨床上常用的劑型有腸溶片劑、腸溶膠囊和注射劑。胸腺肽能誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞分化、增殖與成熟，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬和抗原遞呈功能，提高白細(xì)胞介素應(yīng)答水平，可以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能[4]。胸腺肽制劑常用于各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、慢性疾病、乙型肝炎、各種細(xì)胞免疫功能低下的疾病以及腫瘤的輔助治療等。

1 國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的生產(chǎn)企業(yè)和批號(hào)

胸腺肽制劑市場(chǎng)需求量大，全國(guó)生產(chǎn)胸腺肽制劑的企業(yè)較多，通過(guò)在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)查詢并統(tǒng)計(jì)，我國(guó)市場(chǎng)上現(xiàn)有的胸腺肽制劑生產(chǎn)企業(yè)和批準(zhǔn)文號(hào)分別為75家和243個(gè)。見(jiàn)表1。

表1 胸腺肽制劑生產(chǎn)企業(yè)和批準(zhǔn)文號(hào)

2 胸腺肽的生產(chǎn)工藝

目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的胸腺肽制劑是以健康豬或小牛胸腺為原料，提取高活性的多肽混合物。通過(guò)查閱文獻(xiàn)，胸腺肽提取主要有常規(guī)提取法、酸堿提取法和化學(xué)酶解法。

常規(guī)提取法：胸腺勻漿反復(fù)凍融，通過(guò)水浴解凍，離心沉淀，取上清液置于水浴中加熱80 ℃，調(diào)節(jié)pH值為中性，超濾，用滯留相對(duì)分子質(zhì)量為1.0×104的超濾膜進(jìn)行超濾，即得胸腺肽溶液[5-7]。

酸堿提取法：加鹽酸調(diào)節(jié)胸腺勻漿pH值至3.5，反復(fù)凍融3次，離心后調(diào)節(jié)pH值為6.5，超濾，用滯留相對(duì)分子質(zhì)量為1.0×104的超濾膜進(jìn)行超濾，即得胸腺肽溶液[5-7]。

化學(xué)酶解法：胸腺勻漿加入適當(dāng)?shù)哪竟系鞍酌杆猓{(diào)節(jié)pH值為7.0，在37 ℃水浴中保溫?cái)?shù)小時(shí)，加鹽酸調(diào)節(jié)pH值為3.5，水浴加熱，冷卻至室溫，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為6.8，離心沉淀，超濾，用滯留相對(duì)分子質(zhì)量為1.0×104的超濾膜進(jìn)行超濾，即得胸腺肽溶液[8]。

常規(guī)提取法和酸堿提取法屬于物理提取方法，化學(xué)酶解法屬于化學(xué)提取方法?；瘜W(xué)提取方法提取的多肽含量大于物理提取法，但是活性低于物理提取方法。物理提取法中，酸堿提取法的多肽含量和活性均大于常規(guī)提取法[5-8]。

3 胸腺肽注射劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)及其存在的問(wèn)題

胸腺肽制劑均屬于多組分生化藥，成分復(fù)雜?，F(xiàn)行胸腺肽制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要是化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第16冊(cè)、新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第44冊(cè)和各企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，各標(biāo)準(zhǔn)中具體的檢驗(yàn)項(xiàng)目見(jiàn)表2。胸腺肽制劑中的檢驗(yàn)項(xiàng)目比較簡(jiǎn)單，有效性和安全性指標(biāo)未做出具體的規(guī)定。在現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中均缺少基原鑒定，無(wú)法控制藥品原料的動(dòng)物來(lái)源。不同企業(yè)中胸腺肽生產(chǎn)工藝不同，導(dǎo)致胸腺肽特征圖譜差異較大，表明不同企業(yè)的胸腺肽制劑在質(zhì)量中存在一定的差異，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)添加胸腺肽專屬性鑒別項(xiàng)目，從而規(guī)范胸腺肽生產(chǎn)工藝，在一定程度上可以保證胸腺肽制劑的質(zhì)量。

胸腺肽制劑的原料為健康豬或小牛胸腺，其原料的特殊性易受致病微生物、病菌等污染，人體過(guò)多攝入有害物質(zhì)，可增加臨床不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)高度關(guān)注胸腺肽制劑中生物胺含量、獸藥殘留、重金屬、病原微生物及病毒等安全性指標(biāo)，對(duì)可能引起不良反應(yīng)的因素進(jìn)行控制，增強(qiáng)臨床用藥的安全性，保證廣大患者的利益。

表2 胸腺肽制劑的標(biāo)準(zhǔn)

4 胸腺肽制劑的不良反應(yīng)

胸腺肽制劑中注射劑的不良反應(yīng)報(bào)道較多， 2007～2013年胸腺肽注射劑的不良反應(yīng)文獻(xiàn)有47篇，不良反應(yīng)有101例[9]。2003～2011年共收到懷疑與胸腺肽注射劑有關(guān)的不良反應(yīng)報(bào)告5 459例[10]。胸腺肽注射劑的不良反應(yīng)主要有皮疹、心悸、發(fā)熱、惡心、胸悶、嘔吐、呼吸困難、支氣管哮喘、嚴(yán)重可導(dǎo)致過(guò)敏性休克等[11-12]。胸腺肽注射劑引起不良反應(yīng)的主要原因?yàn)?，注射劑具有高風(fēng)險(xiǎn)的特點(diǎn)[13-15]，在臨床使用上引起的不良反應(yīng)概率比傳統(tǒng)的口服劑型要高[16]；胸腺肽是從動(dòng)物臟器中提取的多肽混合物，在原料提取加工貯存過(guò)程中容易產(chǎn)生對(duì)人體有害的物質(zhì)。

5 胸腺肽制劑存在的安全問(wèn)題

胸腺肽溶液是從健康豬或小牛胸腺中提取的無(wú)菌溶液。動(dòng)物胸腺來(lái)源復(fù)雜，組成不明確，動(dòng)物健康狀況無(wú)法得到保證。胸腺肽制劑在原料和加工過(guò)程中易引入有害物質(zhì)，比如生物胺、獸藥殘留、重金屬、致病微生物和病毒等。應(yīng)控制這些有害物質(zhì)，提高胸腺肽制劑的安全性，從而保證臨床用藥的可靠性。

5.1 生物胺

生物胺是一類(lèi)具有生物活性的含氮的低相對(duì)分子質(zhì)量有機(jī)化合物的總稱。生物胺主要包括腐胺、尸胺、精胺、亞精胺、酪胺、苯乙胺、組胺、色胺等[17]。生物胺常存在于動(dòng)物類(lèi)中藥或以動(dòng)物為原料的生物藥品中。生物胺中組胺毒性最強(qiáng)，主要表現(xiàn)為頭疼、胸悶、腹瀉、心率增加、血壓下降、甚至休克；其次是酪胺可引起血壓升高、偏頭痛、呼吸困難；尸胺、腐胺可增加組胺和酪胺的毒性，尸胺、腐胺、精胺和亞精胺可與亞硝酸鹽反應(yīng)產(chǎn)生亞硝胺致癌物質(zhì)[18-19]。

動(dòng)物源食品中檢測(cè)生物胺含量的方法比較成熟，常采用柱前衍生反相高效液相色譜法測(cè)定生物胺的含量[20-22]。在動(dòng)物中藥材中生物胺的研究也比較普遍，比如對(duì)蜈蚣、鹿茸采用柱前衍生化的方法，使用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定生物胺的含量[23-24]。以動(dòng)物為原料的生物制品中生物胺的測(cè)定也常用此方法，蘇喆等[25]對(duì)鹿瓜多肽注射劑中的生物胺應(yīng)用柱前衍生化反相高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，該法專屬性、精密度、線性關(guān)系以及回收率等均良好。徐學(xué)平等[26]采用柱前衍生的方法對(duì)胸腺中的組胺進(jìn)行測(cè)定，在胸腺中均可測(cè)出組胺?？梢越梃b文獻(xiàn)中生物胺的測(cè)定方法，對(duì)胸腺肽制劑中生物胺的含量進(jìn)行測(cè)定。

5.2 獸藥殘留

獸藥可用于預(yù)防和治療動(dòng)物疾病，科學(xué)規(guī)范地使用獸藥，能有效預(yù)防動(dòng)物疾病，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高產(chǎn)量，改善動(dòng)物質(zhì)量。但是，一些飼養(yǎng)戶在經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下，為了促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和提高產(chǎn)量，違規(guī)或過(guò)多地使用獸藥，使過(guò)多的獸藥殘留在動(dòng)物體內(nèi)[27]。獸藥殘留分為4類(lèi)：抗生素類(lèi)(四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、氯霉素等)[28]；抗病毒類(lèi)(美金剛、嗎啉胍、金剛烷胺、金剛乙胺等)[29]；激素類(lèi)(己烷雌酚、己烯雌酚、雌酮、雌二醇等)[30]；抗寄生蟲(chóng)類(lèi)[31](苯并咪唑類(lèi)藥物)。其中抗生素類(lèi)占所有獸藥添加劑的60%，是最主要的獸藥殘留藥[32]。動(dòng)物飼養(yǎng)過(guò)程中獸藥的濫用，導(dǎo)致在動(dòng)物源食品和藥品中獸藥頻繁被檢出。胸腺肽原料來(lái)自健康豬或小牛胸腺，動(dòng)物來(lái)源復(fù)雜，生產(chǎn)廠家對(duì)動(dòng)物來(lái)源控制薄弱，缺乏統(tǒng)一的監(jiān)管體系，未對(duì)胸腺中獸藥殘留進(jìn)行控制。

獸藥殘留的檢測(cè)主要使用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法、HPLC法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜-四級(jí)桿-質(zhì)譜法等[33]。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有高效、靈敏、快速、選擇性好等優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于獸藥殘留檢測(cè)[34-35]。獸藥殘留越來(lái)越受到企業(yè)和個(gè)人的關(guān)注，對(duì)動(dòng)物類(lèi)中藥和以動(dòng)物類(lèi)為原料的中藥制劑中獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，比如檢測(cè)梅花鹿鹿茸中獸藥殘留[36]；中藥膏劑中蜂蜜的獸藥殘留用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，該方法在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好[37]。胸腺肽制劑原料來(lái)源于健康豬或小牛胸腺，在動(dòng)物生長(zhǎng)過(guò)程中，養(yǎng)殖戶是否過(guò)量地使用獸藥或使用禁用獸藥，提高動(dòng)物生產(chǎn)繁殖能力和產(chǎn)量，生產(chǎn)企業(yè)未對(duì)獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)法確保原料安全。

5.3 重金屬

胸腺肽來(lái)自健康豬或小牛胸腺，動(dòng)物是人工養(yǎng)殖，水、土壤、肥料的使用可能引入重金屬[38]。胸腺肽制劑在生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)引進(jìn)鋁、鉻、鐵、鋇等重金屬，胸腺肽注射劑內(nèi)包材常采用玻璃包裝，會(huì)引入硼、鋁、硅等元素[39]。研究表明，重金屬對(duì)人體的代謝和正常的生理作用會(huì)造成明顯的損害，當(dāng)體內(nèi)重金屬過(guò)量時(shí)會(huì)嚴(yán)重危害人體健康[40]。

重金屬的檢測(cè)方法主要有原子吸收光譜法、紫外分光光度法、原子熒光光譜法、電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)等[41]，其中ICP-MS為重金屬常用的檢測(cè)方法，因其操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠[42-43]。ICP-MS廣泛用于動(dòng)物類(lèi)中藥材中重金屬的測(cè)定[44]，李勇等[45]使用ICP-MS方法對(duì)地龍和水蛭中的重金屬及有害元素進(jìn)行測(cè)定。胸腺肽注射劑臨床用法是皮下或肌肉注射、靜脈注射，不經(jīng)過(guò)肝臟的首過(guò)效應(yīng)，直接進(jìn)入人體，微量的重金屬對(duì)人體都可能產(chǎn)生很大的危害。為了確保臨床安全性，應(yīng)關(guān)注胸腺肽制劑中重金屬的含量。

5.4 病原微生物及病毒

動(dòng)物在飼養(yǎng)過(guò)程中很容易被病原微生物污染，比如肉毒梭菌、沙門(mén)氏桿菌、巴氏桿菌[46]、布魯氏菌、副結(jié)核分枝桿菌等。檢測(cè)病原微生物的主要技術(shù)有病原學(xué)檢查、ELISA、膠體金免疫層析技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)法、生物芯片技術(shù)等方法[47]。蔡珠明等[48]采用IS900-PCR分離鑒定得到3株牛型副結(jié)核分枝桿菌。何亞鵬等[49]采用多重PCR方法同時(shí)檢測(cè)豬種、牛種、羊種、綿羊種布魯氏菌，該方法因其特異性強(qiáng)、敏感度高、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，可用于生物制品污染的布魯氏菌的快速檢測(cè)。

國(guó)際上現(xiàn)有對(duì)生物制品中病毒安全性控制的標(biāo)準(zhǔn)或指導(dǎo)原則主要有：生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評(píng)價(jià)；日本藥典(JP17，所列生物技術(shù)/生物制品病毒安全的基本要求)；美國(guó)藥典(USP41 1050，人源或動(dòng)物源細(xì)胞系制備的生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評(píng)價(jià))等。各標(biāo)準(zhǔn)或指導(dǎo)原則雖然都具有科學(xué)性和規(guī)范性，但是均未涵蓋所有相關(guān)生物制品。目前國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的指導(dǎo)原則有：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)發(fā)布的“血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則”；“生物組織提取制品和真核細(xì)胞表達(dá)制品的病毒安全性評(píng)價(jià)技術(shù)審評(píng)一般原則”。現(xiàn)行藥典未對(duì)生物制品中通用病毒進(jìn)行相關(guān)的規(guī)定[50]。

6 展望

胸腺肽制劑屬于多肽類(lèi)藥物，生物活性高和特異性強(qiáng)，但其穩(wěn)定性差和半衰期短。胸腺肽制劑的生產(chǎn)工藝不同，使其有效性差異較大，導(dǎo)致臨床療效差異性大。胸腺肽制劑在臨床上得到廣泛的應(yīng)用，但不良反應(yīng)報(bào)道多，易出現(xiàn)呼吸困難、休克甚至死亡等嚴(yán)重不良反應(yīng)，應(yīng)引起高度重視。健康豬或小牛胸腺是胸腺肽制劑的原料，動(dòng)物在飼養(yǎng)過(guò)程中易感染致病微生物和病毒，易攝入過(guò)多的重金屬，過(guò)多地使用獸藥。在生產(chǎn)和貯藏的過(guò)程中產(chǎn)生對(duì)人體有害的生物胺。生物胺、獸藥、重金屬、致病微生物等，都增加胸腺肽制劑在臨床上的安全風(fēng)險(xiǎn)，增加不良反應(yīng)的概率。