非洲豬瘟防控下的豬流行性腹瀉返飼馴化成功案例探討

王 蘭 ，劉勝敏 ，李 智 ，曲向陽 ，任夫波

（1.海南農(nóng)墾草畜豬業(yè)有限公司，海南 海口 570125；2.南京博維特健康管理有限公司，江蘇 南京 210031）

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhoea，PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhoea Virus，PEDV）引起的一種主要導(dǎo)致仔豬腹瀉、嘔吐、脫水，嚴(yán)重者死亡的腸道傳染性疾病。該病對(duì)各年齡階段豬只均易感，尤其是對(duì)哺乳仔豬，具有高發(fā)病率，高死亡率的特征。當(dāng)前，針對(duì)PED的防控仍然以采用疫苗免疫和生物安全為主，但由于PEDV變異毒株的流行，疫苗免疫對(duì)各場(chǎng)豬群的保護(hù)力參差不齊。盡管非洲豬瘟（ASF）進(jìn)入中國(guó)以來，規(guī)?；i場(chǎng)對(duì)生物安全的防控不斷升級(jí)，但非洲豬瘟發(fā)生以后的復(fù)產(chǎn)及新建豬場(chǎng)引種需求增加，引種后母豬沒有進(jìn)行PED的馴化或免疫，當(dāng)PEDV進(jìn)入豬場(chǎng)以后，仍然導(dǎo)致發(fā)病嚴(yán)重，損失慘重。

1 豬流行性腹瀉（PED）

PED作為一種急性傳染性腹瀉病，其在國(guó)內(nèi)的流行已經(jīng)給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。1978年，比利時(shí)研究人員通過電鏡檢測(cè)腹瀉仔豬腸道內(nèi)的病毒粒子確認(rèn)引起PED的病原是一種新型冠狀病毒，并命名為CV777。PEDV病毒顆粒由囊膜和核衣殼兩部分組成，囊膜上有許多從核心向外呈放射狀排列的花瓣樣纖突，纖突長(zhǎng)約18～23 nm，形似皇冠，確如其名。PEDV基因組屬于不分節(jié)段、具有侵染性的單股正鏈RNA。

PEDV的 S蛋白是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，在病毒識(shí)別宿主細(xì)胞、促進(jìn)病毒粒子和細(xì)胞表面受體結(jié)合以及促進(jìn)病毒和細(xì)胞膜的融合過程、刺激宿主體內(nèi)產(chǎn)生中和抗體、決定病毒的體外培養(yǎng)適應(yīng)力以及病毒在體內(nèi)的致弱方面發(fā)揮重要作用。

PEDV主要侵染豬的腸道消化系統(tǒng)，當(dāng)病毒經(jīng)口鼻途徑進(jìn)入宿主體內(nèi)并突破腸道內(nèi)物理屏障后，其主要寄居于豬小腸內(nèi)，與小腸上皮細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合后，通過膜融合的方式進(jìn)入宿主細(xì)胞并在24 h內(nèi)進(jìn)行大量復(fù)制，進(jìn)而破壞豬小腸上皮細(xì)胞的正常形態(tài)，引起腸絨毛萎縮、變短和脫落，同時(shí)導(dǎo)致腸壁出現(xiàn)充血，變薄、透明,并腸內(nèi)充滿淡黃色液體。

PEDV作為導(dǎo)致仔豬腹瀉的主要傳染性病原，因其引起的臨床癥狀和病理變化與豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）及近些年新發(fā)現(xiàn)的豬δ-冠狀病毒（PDCoV）很相似，又常常與引起腹瀉的其他病原混合感染，故難以進(jìn)行區(qū)分，所以對(duì)于PEDV引起的豬流行性腹瀉的診斷不能單純地以臨床癥狀和病理變化為判斷依據(jù)，必須借助相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)進(jìn)行鑒別診斷。

當(dāng)前的流行病學(xué)調(diào)查表明，PED的暴發(fā)主要與豬和相關(guān)人員的流動(dòng)有很大關(guān)系，而豬場(chǎng)一旦暴發(fā)PED，并沒有特效的措施進(jìn)行及時(shí)有效的根除治療。因此，對(duì)于PED的防控手段主要還是依靠疫苗免疫和加強(qiáng)生物安全管理。已商品化應(yīng)用的PED疫苗主要有PED弱毒活疫苗、細(xì)胞滅活苗和新型基因工程疫苗。

2 案例分享

2.1 發(fā)病背景

2021年3月，海南某地區(qū)新建存欄5 600頭商品母豬場(chǎng)投產(chǎn)不久，分娩舍新生仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉，脫水死亡，傳播迅速，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確定感染PEDV；由于該場(chǎng)引種后備母豬未進(jìn)行過PED的馴化或疫苗免疫，為PEDV陰性豬場(chǎng)。暴發(fā)PED后，腹瀉癥狀在產(chǎn)房迅速蔓延，脫水死亡仔豬與日俱增，同時(shí)該豬場(chǎng)未來一個(gè)月有2 000頭后備母豬待分娩，急需采取緊急措施來控制PED的發(fā)生。

2.2 臨床初步診斷

3月17日下午分娩一區(qū)4單元，有8窩仔豬出現(xiàn)吐奶腹瀉，18日上午，仔豬腹瀉嚴(yán)重，當(dāng)天該單元累計(jì)有18窩仔豬腹瀉。同時(shí)，分娩一區(qū)3單元出現(xiàn)5窩仔豬腹瀉，5單元有10窩仔豬吐奶腹瀉（圖1），后備豬舍母豬同樣出現(xiàn)水樣腹瀉且采食下降（圖2）。初步判斷可能是由于病毒性感染導(dǎo)致的腹瀉。能夠?qū)е伦胸i嚴(yán)重腹瀉的病毒主要包括 PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV等，這幾種病毒引起的臨床癥狀很相似，僅根據(jù)臨床癥狀難以鑒別區(qū)分，故需要借助相關(guān)實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行鑒別。

圖1 新生仔豬嚴(yán)重腹瀉脫水

圖2 后備母豬水樣腹瀉

2.3 實(shí)驗(yàn)室確診

腹瀉發(fā)生以后，3月18日上午將腹瀉樣品送實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)qPCR檢測(cè)，PEDV陽 性、TGEV、PoRV、PDCoV陰性；確定該場(chǎng)為PEDV感染。

2.4 處置策略

盡管當(dāng)前該地區(qū)非洲豬瘟感染風(fēng)險(xiǎn)也高，但考慮到對(duì)PED最有效的控制措施為返飼，經(jīng)過豬場(chǎng)管理層和技術(shù)團(tuán)隊(duì)的商討，為了豬場(chǎng)今后PED防控的長(zhǎng)遠(yuǎn)考慮，決定以返飼馴化配合疫苗免疫的方式控制PED。具體策略如下。

2.4.1 排除ASFV感染風(fēng)險(xiǎn)

采集豬場(chǎng)異常豬尾尖血、母豬和仔豬的腹瀉樣品、環(huán)境樣品進(jìn)行非洲豬瘟病毒（ASFV） 檢測(cè)，排除場(chǎng)內(nèi)ASFV感染，特別是環(huán)境中是否存在ASFV，確定為PEDV單純感染，保證返飼計(jì)劃的安全性。

2.4.2 通過返飼快速建立母豬群免疫力

3月18-22日，豬場(chǎng)收集發(fā)生腹瀉24-36 h內(nèi)的仔豬（腹瀉嚴(yán)重并且沒有進(jìn)行過治療）糞便或腸道病料。

采集腸道病料時(shí)，每頭仔豬均需要分別收集腸道；在對(duì)仔豬收集部分脾臟病料時(shí)，將每窩仔豬（約10頭仔豬）脾臟放入到一個(gè)包裝袋中，并進(jìn)行合樣檢測(cè)，進(jìn)行ASFV、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）三種疾病病毒的PCR檢測(cè)，若ASFV陽性，不得返飼。

制備的仔豬腸道病料勻漿，根據(jù)qPCR檢測(cè)的Ct值，估算每份腸道所能返飼的豬群數(shù)量，通常每頭腹瀉仔豬的腸道可用于20頭豬的返飼； 此后1周內(nèi)，對(duì)場(chǎng)內(nèi)所有母豬群及公豬進(jìn)行3次返飼。

對(duì)返飼效果的評(píng)估，初期主要以返飼后豬群的臨床表現(xiàn)為準(zhǔn)。該場(chǎng)經(jīng)過1周3次的返飼，3月28日返飼結(jié)束，至少70%豬群在返飼后表現(xiàn)出采食下降、腹瀉等癥狀，表明返飼后豬群感染比例很高，返飼基本成功。

2.4.3 降低場(chǎng)內(nèi)PEDV病毒載量

在臨產(chǎn)母豬沒有建立母源抗體保護(hù)前，停止產(chǎn)房的所有生產(chǎn)操作，包括接產(chǎn)、非必要的助產(chǎn)、閹割、斷尾等，參考Macrebel操作；減少不同欄位之間的交叉污染。

對(duì)全場(chǎng)進(jìn)行分區(qū)管理并做好生物安全細(xì)節(jié)操作，減少場(chǎng)內(nèi)病毒的循環(huán)，降低環(huán)境中病毒對(duì)新生仔豬感染壓力。

保證產(chǎn)房豬群的全進(jìn)全出，做到斷奶后，對(duì)產(chǎn)床進(jìn)行嚴(yán)格的清洗消毒工作，降低產(chǎn)房環(huán)境中的PEDV。

2.4.4 返飼后的疫苗免疫策略

返飼成功以后1個(gè)月，對(duì)全群進(jìn)行PEDV滅活疫苗加強(qiáng)普免一次。母豬群在分娩前6周免疫PEDV弱毒活疫苗1次，分娩前3周免疫PEDV滅活苗1次。以確保母豬群在未來的生產(chǎn)周期內(nèi)能夠產(chǎn)生持續(xù)不斷的免疫力，給新生仔豬提供母源抗體保護(hù)。

2.5 返飼效果評(píng)估

母豬群返飼結(jié)束1周以后，場(chǎng)內(nèi)母豬的排毒減少，母豬根據(jù)批次轉(zhuǎn)入分娩舍，分娩舍腹瀉仔豬的數(shù)量逐步下降，2周以后，腹瀉損失數(shù)量下降明顯（圖3）。通常返飼后，母豬需要2周左右時(shí)間，體內(nèi)才能產(chǎn)生針對(duì)PEDV的母源抗體。

圖3 返飼后腹瀉損失仔豬

分別對(duì)返飼后2周、1個(gè)月及加強(qiáng)免疫滅活疫苗1個(gè)月后的母豬群進(jìn)行PEDV IgG抗體水平監(jiān)測(cè)，母豬群PEDV抗體均為100%陽性，且IgG抗體均維持較高水平（表1）。同時(shí)，仔豬臨床腹瀉基本消失，表明該場(chǎng)通過返飼馴化控制PED取得成功。

表1 返飼后母豬群抗體監(jiān)測(cè)

3 討論

PEDV作為導(dǎo)致仔豬腹瀉的主要傳染性病原，因其引起的臨床癥狀和病理變化與TGEV、PoRV、PDCoV很相似，又常常與引起腹瀉的其他病原混合感染，故難以進(jìn)行區(qū)分，所以對(duì)于PEDV引起的豬流行性腹瀉的診斷，不能單純地以臨床癥狀和病理變化為判斷依據(jù)，必須借助相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)進(jìn)行鑒別診斷。非洲豬瘟發(fā)生以后，集團(tuán)化獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室和第三方實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力發(fā)展迅速，為各類疾病快速有效的鑒別診斷提供很大幫助。針對(duì)PED、TGE等病毒性疾病的檢測(cè)，豬場(chǎng)也可以常備一些商品化的膠體金快速檢測(cè)試紙條，用以緊急疫情時(shí)的病原快速篩檢，為臨床快速處置搶占先機(jī)。

當(dāng)前的流行病學(xué)調(diào)查表明，PED的暴發(fā)主要與豬和相關(guān)人員的流動(dòng)有很大關(guān)系，而豬場(chǎng)一旦暴發(fā)PED，并沒有特效的藥物進(jìn)行及時(shí)有效的根除治療。因此，對(duì)于PED的防控手段主要還是依靠疫苗免疫和加強(qiáng)生物安全管理。

伴隨非洲豬瘟防控的需求，豬場(chǎng)生物安全等級(jí)不斷提升，新建母豬場(chǎng)發(fā)生PED，除了供種豬場(chǎng)本身就存在PEDV感染帶毒的可能性外，引種過程的運(yùn)輸風(fēng)險(xiǎn)、區(qū)域內(nèi)PED流行、生物安全防控存在漏洞等都可能是導(dǎo)致PED發(fā)生的因素。當(dāng)前防控非洲豬瘟的壓力下，仍然需要復(fù)盤梳理豬場(chǎng)的生物安全漏洞；同時(shí)重視后備母豬在分娩前的PED馴化，通常采用病料返飼會(huì)比直接進(jìn)行疫苗免疫效果要好，倘若采取返飼的策略，則必須首先要排除非洲豬瘟等重大疾病的感染風(fēng)險(xiǎn)，其次對(duì)臨床返飼的有效方式和效果評(píng)估需要建立標(biāo)準(zhǔn)，返飼后母豬群的抗體的產(chǎn)生需要2周左右時(shí)間，同時(shí)需要加強(qiáng)對(duì)環(huán)境中PEDV的控制，尤其重視分娩舍全進(jìn)全出后的清洗消毒工作。必要時(shí)，需要將分娩舍10日齡以上仔豬提前斷奶轉(zhuǎn)至保育場(chǎng)以減少仔豬群在發(fā)病場(chǎng)的損失。返飼成功后，想要維持豬場(chǎng)PED的持續(xù)穩(wěn)定，建議豬場(chǎng)選擇產(chǎn)前活疫苗配合滅活疫苗的方式進(jìn)行跟胎免疫。

非洲豬瘟發(fā)生以后，豬場(chǎng)生物安全條件的大幅升級(jí)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的提升，為ASF、PED等重大疾病的防控和監(jiān)測(cè)提供有力幫助，豬場(chǎng)在不斷做好生物安全的同時(shí)，也需要定期對(duì)豬群進(jìn)行各類疾病的健康監(jiān)測(cè)，以便及時(shí)預(yù)警，快速干預(yù)，有助于豬場(chǎng)生產(chǎn)效益的提升。