高效液相色譜法測定豬血制品中莧菜紅、新紅、胭脂紅和誘惑紅

畢 娜，高 晗，楊曉赫

（吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林吉林 132000）

豬血又稱血豆腐、血花、血紅和血旺等，是一種高蛋白、低脂肪、低糖而微量元素含量豐富的食品工業(yè)副產(chǎn)品[1]。豬血制品顏色多為深暗紅色，色澤是食品感官質(zhì)量的指標(biāo)之一，色澤鮮艷能夠增加消費(fèi)者的購買欲望[2-5]。因此，為改善豬血制品的色澤，生產(chǎn)者在制作豬血制品過程中通過添加色素來實(shí)現(xiàn)。根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》 （GB 2760—2014）規(guī)定，畜禽血制品中允許添加的添加劑有氯化鈣，聚二甲基硅氧烷及其乳液，并且有明確規(guī)定的最大使用量?？商砑忧{菜紅、新紅、胭脂紅、誘惑紅的食品名稱項(xiàng)下均不包括豬血制品。因此，在豬血制品中添加色素屬于超范圍添加?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn) 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）適用于汽水、硬糖、糕點(diǎn)和冰淇淋。《肉制品胭脂紅著色劑測定》（GB/T 9695.6—2008）適用于肉制品。SN/T 1743—2006 規(guī)定，采用高效液相色譜法測定食品中誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量適用于糖果、飲料?！冻隹诨疱伒琢现卸喾N合成色素的測定》（SN/T 3845—2014）適用于火鍋底料。綜上，食品檢測標(biāo)準(zhǔn)中沒有包含檢測豬血制品中色素的相關(guān)檢測方法[6-10]。因此，建立豬血中多組分色素的檢測技術(shù)十分必要。本方法建立了高效液相色譜法同時(shí)測定豬血制品中莧菜紅、新紅、胭脂紅和誘惑紅的含量。

1 材料與方法

1.1 材料

水相微孔濾膜：0.22 μm；塑料離心管：50 mL。

1.2 試劑與儀器

甲醇（色譜純）；娃哈哈純凈水；乙酸銨；無水乙醇；氨水；標(biāo)準(zhǔn)品：新紅（1 000 μg·mL-1）；莧菜紅、胭脂紅和誘惑紅濃度均為1.00 mg·mL-1，中國計(jì)量科學(xué)研究院。

島津LC2030C 高效液相色譜儀，帶二極管陣列檢測器；METTLER MS105DU 電子天平；MX-F漩渦振蕩器，CRAGONLAB；Z36HK 離心機(jī)，HERMLE Labortechnik Gmbh。

1.3 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

分別準(zhǔn)確吸取莧菜紅、新紅、胭脂紅、誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液適量于同一10 mL 量瓶中，用水定容至 10 mL，得到莧菜紅、新紅、胭脂紅、誘惑紅濃度均為100 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2 g 樣品于50 mL 離心管中，準(zhǔn)確加入20 mL 無水乙醇-氨水-水（7 ∶2 ∶1）提取，漩渦振蕩10 min，水浴超聲提取10 min，10 000 r·min-1離心10 min，取上清液10 mL，70 ℃水浴濃縮至近干，用水溶解并定容至5 mL。經(jīng)0.22 μm 濾膜過濾，濾液待測。

1.5 色譜條件

色譜柱：Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1 mL·min-1；流動相：甲醇-0.02 mol·L-1乙酸銨，梯度洗脫，洗脫條件見表1；檢測波長：510 nm。

表1 梯度洗脫條件

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方式的確定

提取過程中，提取液分別采用水和無水乙醇-氨水-水（7 ∶2 ∶1）進(jìn)行提取。用水提取時(shí)，受雜質(zhì)干擾較大，無法有效分離目標(biāo)峰。而用無水乙醇-氨水-水（7 ∶2 ∶1）提取時(shí)，采用1.4 步驟進(jìn)行樣品前處理，分離度、回收率均較好，故采用無水乙醇-氨水-水（7 ∶2 ∶1）提取。水和無水乙醇-氨水-水提取樣品的圖譜見圖1、圖2。

圖1 用水提取樣品時(shí)的色譜圖

圖2 用無水乙醇-氨水-水（7 ∶2 ∶1）提取樣品時(shí)的色譜圖

2.2 波長的確定

經(jīng)紫外掃描，莧菜紅、新紅、胭脂紅和誘惑紅最大吸收波長分別為509 nm、522 nm、510 nm 和510 nm。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，混合組分采用同一波長檢測，檢測波長為510 nm，各組分響應(yīng)值均較好，靈敏度高。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01 mL、0.05 mL、0.10 mL、1.00 mL 和5.00 mL 于5 個(gè)10 mL 量瓶中，并用水定容至刻度，配制成莧菜紅、新紅、胭脂紅、誘惑紅濃度均為0.1 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、1.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、50.0 μg·mL-1和100.0 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別取混合溶液10 μL，按1.5 條件，進(jìn)行檢測。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，外標(biāo)法定量。由表2 可知，4 種被測物質(zhì)在0.1 ～100.0 μg·mL-1線性良好，相關(guān)系數(shù)r均為 1.000 0。取已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過逐級稀釋不斷進(jìn)樣，直至檢測物質(zhì)為3 倍基線噪聲時(shí)，此時(shí)的濃度即為檢出限，3 倍檢出限即為定量限。4 種色素檢出限均為0.05 mg·kg-1，定量限均為0.15 mg·kg-1。

表2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、標(biāo)曲、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

2.4 加標(biāo)回收率及精密度

選擇低、中、高3 個(gè)不同濃度，將已知含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入樣品中，每水平處理4 個(gè)樣品，將樣品過0.22 μm 混合濾膜后，按1.5 條件進(jìn)行檢測，記錄峰面積計(jì)算回收率平均值，得加標(biāo)回收率。由表3 可知，4 種被測組分的回收率在81%～102%，在重復(fù)性條件下，獲得的4 次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值均小于算數(shù)平均值的20%。選擇低、中、高3 個(gè)不同濃度，將已知含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入樣品中，每個(gè)濃度處理一個(gè)供試品，每個(gè)供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次，按1.5 條件進(jìn)行檢測，記錄峰面積計(jì)算6 次結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果，4 種被測組分的精密度在0.2%～0.9%，表明儀器穩(wěn)定性良好。

表3 4 種色素在豬血制品中回收率及精密度

3 結(jié)論

本文建立了HPLC測定豬血制品中莧菜紅、新紅、胭脂紅、誘惑紅含量的方法。所建立的分析方法前處理簡單，檢測效率高，能滿足分析要求。