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    不同發(fā)酵方式對(duì)酸筍發(fā)酵過程亞硝酸鹽含量 變化的影響研究

    2022-03-23 08:17:58王宇軒敖宇菲
    食品安全導(dǎo)刊 2022年33期
    關(guān)鍵詞:麻竹酸筍冬筍

    崔 娜,惠 翔,王宇軒,王 波,敖宇菲,鞏 僖*

    (1.柳州工學(xué)院,廣西柳州 545616;2.柳州市螺螄粉植物源性配料研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣西柳州 545616;3.柳州市特色食品與品質(zhì)控制工程技術(shù)研究中心,廣西柳州 545616)

    酸筍是我國的傳統(tǒng)食材之一,在南方各地區(qū)一直被廣泛種植,但是在發(fā)酵過程中硝酸還原酶和有害微生物都會(huì)使硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽,亞硝酸鹽的攝入量也常被用作衡量腌制和發(fā)酵食品安全性的重要技術(shù)指標(biāo)之一[1]。因此,應(yīng)在加工發(fā)酵食品時(shí)盡量避免亞硝酸鹽的產(chǎn)生,且在食用過程中采取措施降低亞硝酸鹽的攝入量[2]。為了解不同發(fā)酵方式對(duì)酸筍發(fā)酵過程亞硝酸鹽含量變化的影響,本文選取麻竹、冬筍兩種新鮮竹筍,通過接種發(fā)酵和自然發(fā)酵兩種方式研究酸筍發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量的變化,并與市售酸筍進(jìn)行對(duì)比。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    冬筍:廣西壯族自治區(qū)柳州市柳城縣東泉鎮(zhèn);麻竹:廣西壯族自治區(qū)柳州市柳城縣東泉鎮(zhèn);普通高度白酒:廣西柳州新福路聯(lián)華超市;食鹽:孝感廣鹽華源制鹽有限公司;純水:柳州工學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室;亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、冰乙酸、硼酸鈉、硼酸鈉、鹽酸、氨水、對(duì)氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺、亞硝酸鈉:西隴科學(xué)股份有限公司;濾紙:杭州特種紙業(yè)有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    JYL-C93T 型榨汁攪拌機(jī):九陽股份有限公司;FW100 型高速萬能粉碎機(jī):天津市泰斯特儀器有限公司;HH-S6 電熱恒溫水浴鍋:江蘇金怡儀器科技有限公司 ;AX124ZH/E 電子分析天平:奧豪斯儀器(常州)有限公司;PV1 型可見分光光度計(jì):上海美譜達(dá)儀器有限公司;UV-1800 紫外可見分光光度計(jì):上海美譜達(dá)儀器有限公司;DHG-9070A 恒溫干燥箱:上海一恒科學(xué)儀器有限公司;SX-4-10 型箱式電阻爐:天津市泰斯特儀器有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 酸筍自然發(fā)酵工藝及操作要點(diǎn)

    洗壇:使用100 ℃的熱水淋在壇子內(nèi)壁反復(fù)淋洗3 次,最后噴適量75%乙醇消毒,防止酸筍遭到雜菌污染。

    竹筍前處理:將新鮮竹筍剝皮,去掉皮、根部和其他不能食用的部分,清洗后切塊至適宜大小,每塊重量約150 g。

    入壇發(fā)酵:將筍塊置于壇內(nèi),加入半壇生理鹽水,然后加入250 mL 老水,再繼續(xù)加生理鹽水至壇口,最后加入50 mL 普通高度白酒,封壇發(fā)酵。

    1.3.2 酸筍接種發(fā)酵工藝及操作要點(diǎn)

    菌種的活化:取50 μL 乳酸菌LC-3-3[經(jīng)分子生物學(xué)鑒定為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)]于MRS 固體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)24 h;將菌體轉(zhuǎn)移至MRS 液體培養(yǎng)基(約50 mL)于37 ℃、160 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng)12 h;后吸取1 mL 菌液于MRS 液體培養(yǎng)基(約200 mL)中于37 ℃、160 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng)10 h;后離心、洗菌、振蕩,反復(fù)收集直至菌體收集完全。最后測(cè)定菌液在波長600 nm 處的吸光度值,調(diào)整菌液在波長600 nm 處的吸光度值為1,將其作為種子液。培養(yǎng)菌體分別得到2%(等同于 125 mL 菌液)和4%(等同于250 mL 菌液)濃度的菌液,后接種到壇子中[3]。

    前處理:使用100 ℃的熱水淋在壇子內(nèi)壁,反復(fù)淋洗3 次,最后噴適量75%乙醇消毒,確保殺死大部分的細(xì)菌,防止酸筍遭到雜菌污染。

    配制生理鹽水:稱取8 g 食用鹽,用純水定容至1 L(0.8%生理鹽水);將新鮮竹筍剝皮,去掉皮、根部和其他不能食用的部分,清洗后切塊至適宜大小,每塊重量約150 g。

    入壇發(fā)酵:將切好的筍塊放入壇中,加入鹽水浸漬,并確保鹽水沒過竹筍,沒有竹筍暴露在空氣中,加入菌液125 mL(2%質(zhì)量濃度)或250 mL(4%質(zhì)量濃度)[經(jīng)過培養(yǎng)活化的乳酸菌(LC-3-3)]起到接種發(fā)酵的效果,最后加入50 mL 普通高度白酒,陰涼處封壇發(fā)酵。

    1.3.3 亞硝酸鹽的測(cè)定

    根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》(GB 5009.33—2016)[4],采用鹽酸萘乙二胺分光光度法,繪制亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線,測(cè)定竹筍發(fā)酵過程中樣品的亞硝酸鹽含量,分別于發(fā)酵前15 天(隔天一測(cè))、第20 天、第25 天、第30 天取樣檢測(cè)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同品種竹筍自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽含量變化

    由圖1 可知冬筍在自然發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量最高為10.1 mg·kg-1(第10 天),發(fā)酵30 d 后亞硝酸鹽含量為4.3 mg·kg-1,亞硝酸鹽含量從開始發(fā)酵到第9 天逐漸增加,第10 天起緩慢下降。由圖2 可知麻竹在自然發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量最高為 9.6 mg·kg-1(第8 天),發(fā)酵30 d 后亞硝酸鹽含量為 3.2 mg·kg-1,亞硝酸鹽含量從第0 天到第7 天逐漸增加,第8 天起緩慢下降。

    圖1 冬筍自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽含量變化

    圖2 麻竹自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽含量變化

    不同品種竹筍在自然發(fā)酵過程中,亞硝酸鹽含量均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),這主要是由于乳酸菌在發(fā)酵初期沒有形成優(yōu)勢(shì)菌群,環(huán)境中含有腸桿菌科等有害微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣、適宜的pH 值,因此這些微生物在發(fā)酵初期會(huì)大量繁殖,亞硝酸鹽含量快速上升。隨著發(fā)酵時(shí)間的推移,乳酸菌逐漸形成優(yōu)勢(shì)菌群,抑制有害微生物的生長,進(jìn)而抑制亞硝酸鹽的產(chǎn)生。

    2.2 不同品種竹筍接種發(fā)酵(2%濃度)亞硝酸鹽含量變化

    由圖3、圖4 可知冬筍在接種發(fā)酵過程中(2%濃度),亞硝酸鹽含量最高為8.9 mg·kg-1,發(fā)酵30 d后亞硝酸鹽含量為3.7 mg·kg-1;麻竹在接種發(fā)酵過程中(2%濃度),亞硝酸鹽含量最高達(dá)到6.7 mg·kg-1,發(fā)酵30 d 后亞硝酸鹽含量為2.1 mg·kg-1;亞硝酸鹽含量均呈先上升后下降的趨勢(shì)。亞硝酸鹽達(dá)到峰值的時(shí)間均比自然發(fā)酵提前了3 ~5 d,且最高值均有下降,主要原因可能是環(huán)境內(nèi)并未生成大量有害菌,乳酸菌在發(fā)酵初期就占據(jù)主導(dǎo)地位,成為優(yōu)勢(shì)菌群,因此,亞硝酸鹽含量被控制在較低的程度。

    圖3 冬筍接種2%乳酸菌發(fā)酵亞硝酸鹽含量變化圖

    圖4 麻竹接種2%乳酸菌發(fā)酵亞硝酸鹽含量變化圖

    2.3 不同品種竹筍接種發(fā)酵(4%濃度)亞硝酸鹽含量變化

    由圖5、圖6 可知冬筍在接種發(fā)酵過程中(4%濃度),亞硝酸鹽含量最高為7.3 mg·kg-1,發(fā)酵完成后亞硝酸鹽含量為4.1 mg·kg-1;麻竹在接種發(fā)酵過程中(4%濃度),亞硝酸鹽含量最高達(dá)到6.7 mg·kg-1,發(fā)酵完成后亞硝酸鹽含量為2.7 mg·kg-1;亞硝酸鹽含量均呈先上升后下降的趨勢(shì)。亞硝酸鹽達(dá)到峰值的時(shí)間均比自然發(fā)酵提前,且最高值均有下降,但與2%濃度接種發(fā)酵沒有顯著性差異。主要原因可能是發(fā)酵初期環(huán)境內(nèi)并未生成有害菌,但是在實(shí)驗(yàn)中期亞硝酸鹽含量逐步提升,其原因可能是存在外界污染的情況,導(dǎo)致酸筍液中有害微生物提升,破壞了原有的微生物內(nèi)環(huán)境,進(jìn)而導(dǎo)致亞硝酸鹽含量升高;實(shí)驗(yàn)后期當(dāng)乳酸菌重新占據(jù)主導(dǎo)地位,成為優(yōu)勢(shì)菌群時(shí),亞硝酸鹽含量又逐漸降低。冬筍的亞硝酸鹽含量始終高于麻竹,有可能是冬筍品種自帶有益菌群較少,不利于長時(shí)間發(fā)酵加工,易被雜菌污染[5-7]。

    圖5 冬筍接種4%乳酸菌發(fā)酵亞硝酸鹽含量變化圖

    圖6 麻竹接種4%乳酸菌發(fā)酵亞硝酸鹽含量變化圖

    2.4 自制成品酸筍與市售酸筍中亞硝酸鹽含量的對(duì)比分析

    根據(jù)圖7 中的對(duì)比分析可知,市售酸筍中的亞硝酸鹽含量均高于自制成品酸筍,其原因可能是市售散裝酸筍的發(fā)酵及保存環(huán)境較差,易受污染,且貯存時(shí)間較長導(dǎo)致微生物的二次污染。市售酸筍與自制接種發(fā)酵酸筍對(duì)比后,差異性較為明顯,自制接種發(fā)酵的兩個(gè)品種的竹筍亞硝酸鹽含量普遍低于市售酸筍,其主要原因在于發(fā)酵工藝的不同以及發(fā)酵時(shí)間的差異,酸筍中乳酸桿菌的代謝產(chǎn)物乳酸降低了酸筍液環(huán)境內(nèi)的pH,抑制絕大多數(shù)有害菌的生長,使其無法將氨基酸脫羧為生物胺,把硝酸鹽還原成亞硝酸鹽,從而起到了抑制亞硝酸鹽產(chǎn)生的效果,因此接種發(fā)酵更利于加工酸筍時(shí)對(duì)亞硝酸鹽的控制。

    圖7 自制成品酸筍(發(fā)酵30 d 后)與市售酸筍中亞硝酸鹽含量對(duì)比分析圖

    3 結(jié)論

    本研究對(duì)比了麻竹、冬筍兩個(gè)品種以及接種乳酸桿菌發(fā)酵與自然發(fā)酵兩種發(fā)酵方式分別對(duì)酸筍發(fā)酵過程亞硝酸鹽含量的影響,得出酸筍發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì),其含量最高峰為10.1 mg·kg-1,成品酸筍亞硝酸鹽含量均低于4.5 mg·kg-1,達(dá)到國標(biāo)限量要求(<20 mg·kg-1);麻竹發(fā)酵產(chǎn)生的亞硝酸鹽含量顯著低于冬筍,接種發(fā)酵產(chǎn)生的亞硝酸鹽含量顯著低于自然發(fā)酵;此外,在接種發(fā)酵中,還觀察到并不是乳酸菌的濃度越高,亞硝酸鹽抑制效果越好,仍需要通過后續(xù)實(shí)驗(yàn)篩選到合適的乳酸菌品種及接種濃度。

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