豬常見細菌性病原檢測方法研究進展

李璐

（遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，遼寧 沈陽 110299）

豬的細菌性疾病是目前生豬養(yǎng)殖過程中最為常見的一類傳染性疾病，是由一些具有致病性的細菌引發(fā)的疾病，這類疾病可以導(dǎo)致豬的個體在呼吸、生殖、消化、泌尿、循環(huán)等系統(tǒng)發(fā)生各類疾病。雖然隨著生豬養(yǎng)殖管理水平的不斷提高，細菌性疾病的發(fā)病率有所下降，但是細菌性疾病已經(jīng)由單一的細菌感染逐漸轉(zhuǎn)變成多細菌感染的狀況，同時細菌的耐藥情況不斷嚴(yán)重，這就導(dǎo)致臨床上出現(xiàn)臨床癥狀簡單化變的復(fù)雜化，更是難以治療，嚴(yán)重威脅我國的生豬生產(chǎn)。細菌性病原檢測在目前的生豬生產(chǎn)中就顯得尤為重要，病原檢測可以快速準(zhǔn)確的明確感染的細菌種類，是控制細菌性疾病發(fā)生發(fā)展的重要手段。細菌的分離培養(yǎng)鑒定一直是細菌感染診斷的最為傳統(tǒng)方法，這種方法的特點是較為準(zhǔn)確直觀，但是由于這種檢測方法耗時較長，操作過程較為繁雜，尤其是一些生長條件苛刻的細菌更是難于鑒定，導(dǎo)致這種方法不能作為一種快速診斷的方法進行應(yīng)用。一些常見的免疫學(xué)檢測方法如：凝集試驗、補體結(jié)合試驗、中和試驗等，雖然能作為細菌檢測的常用方法，但是存在特異性較差、靈敏性不高等特點，不能大面積的推廣應(yīng)用到生產(chǎn)實踐中。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，細菌檢測技術(shù)也在不斷的進步，目前已經(jīng)從傳統(tǒng)的檢測手段朝著更高層次發(fā)展，如：免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫磁珠分離技術(shù)、實時熒光定量PCR法、DNA雜交技術(shù)等，這些新的檢測技術(shù)適用于快速診斷應(yīng)用，能夠較為準(zhǔn)確的為我國生豬細菌性疾病的診斷提供快速診斷的新方法。

1 免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)（ICS）

免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)是一種較為新型的檢測技術(shù)，主要采用膠體金作為檢測中的標(biāo)記物。這種技術(shù)主要是根據(jù)免疫學(xué)中的抗原抗體之間的關(guān)系，采取毛細管作用或者滲濾作用又將其分為膠體金免疫層析法（GICA）和斑點免疫滲濾法（DIGFA）。目前這種方法可以應(yīng)用在金黃色葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌、鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏菌等一些細菌的檢測。其特點是不需要特別的實驗室設(shè)備支持，操作簡單，特異性較高，成本較低等。但是同時也存在穩(wěn)定性不是非常高，眼觀判斷主觀性較高等問題。易兵[1]建立了一種豬肺炎支原體膠體金快速診斷試紙，共檢測了54份樣品，與傳統(tǒng)的ELISA進行了對比，發(fā)現(xiàn)這種膠體金快速診斷試紙的陽性率為83.8%，ELISA的陽性率為90.7%。隨著科技的不斷發(fā)展，尤其是一些與檢測相關(guān)的新型材料的發(fā)展，這種檢測方法的準(zhǔn)確率和特異性將會得到進一步的提升。

2 免疫磁珠分離技術(shù)（IMS）

免疫磁珠分離技術(shù)是通過細菌中某些特異性抗原存在一定超順磁性，這些特異性抗原與一些化學(xué)基團形成親和性的磁珠，最終形成免疫復(fù)合物，再通過磁場將其分離出來，使其濃縮純化。目前這種方法可以檢測多種細菌，如胸膜肺炎放線菌、鼠傷寒沙門氏菌、霍亂弧菌等。該方法具有細菌分離速度快、特異性強、效率高等特點，隨著不斷的深入研究，這種檢測方法的應(yīng)用前景將更為廣闊。白莉等[2]采用免疫磁珠分離技術(shù)和實時熒光定量PCR技術(shù)檢測志賀毒素大腸埃希菌，效果較好。李倩茹等[3]采用免疫磁珠分離技術(shù)與熒光微球免疫層析法檢測鼠傷寒沙門氏菌進行檢測，結(jié)果顯示其靈敏度非常高，比單一的檢測方法效率提高了30倍。

3 實時熒光定量PCR法

實時熒光定量PCR法是采取熒光標(biāo)記的探針對產(chǎn)物進行了標(biāo)記，然后通過制作好的專門軟件對檢測的細菌樣品進行分析。目前這種檢測方法可以檢測多種細菌，如沙門氏菌、豬附紅細胞體、副豬嗜血桿菌、豬鏈球菌、豬傳染性胸膜肺炎放線菌、豬支原體等。該方法具有特異性高、敏感性強等多種優(yōu)點。但是也存在一定的不足，如需要專業(yè)設(shè)備，操作要求較高，費用高，這就導(dǎo)致這種特異性強的檢測方法在基層使用過程中受到了一定的限制。

4 DNA雜交技術(shù)（DNAH）

DNA雜交技術(shù)是一種核酸分子雜交技術(shù)，2007年由美國的一家公司開發(fā)上市。該檢測方法與一些傳統(tǒng)的檢測方法相比，其特點是樣品處理較為簡單，不存在提取核酸等環(huán)節(jié)，特異性強、靈敏度高、假陽性率低等特點。劉亞娟等[4]建立了沙門氏菌等的DNA雜交技術(shù)檢測方法，試驗結(jié)果顯示這種方法的檢測最低限較低，靈敏度較高。

5 LAMP

LAMP技術(shù)屬于恒溫核酸擴增方法，在65℃反應(yīng)30～60min，結(jié)果可直接可視化判定，與常見的PCR比省去了高溫變性的環(huán)節(jié)，節(jié)省時間，其靈敏度和特異性等方面明顯優(yōu)于普通PCR。目前這種方法可檢測多種細菌，如鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、金黃色葡萄球菌、炭疽芽孢桿菌等。蔡樹東等[5]應(yīng)用LAMP技術(shù)對多種基因型的大腸桿菌進行檢查，其靈敏度較高，能夠較為準(zhǔn)確的鑒定出大腸桿菌的類型。雖然這種方法已經(jīng)成為常用的檢測方法之一，但是偶爾也會出現(xiàn)假陽性的現(xiàn)象，隨著科技的不斷進步，LAMP技術(shù)會與一些其他檢查技術(shù)集成于一體，更廣泛的應(yīng)用于多種微生物的檢測。

6 POCT技術(shù)

POCT技術(shù)又稱為即時檢測技術(shù)，是一種集計算機、納米、生物等于一體的檢測技術(shù)。這種技術(shù)簡易、即時、自動化、智能化，不需要大型的檢測設(shè)備，在養(yǎng)殖現(xiàn)場即可進行檢測，幫助獸醫(yī)即時進行臨床初步檢測。該技術(shù)可檢測鏈球菌、結(jié)核桿菌、艱難梭菌等多種微生物，隨著這種技術(shù)的不斷發(fā)展，相信在我國未來POCT技術(shù)將成為檢測微生物的領(lǐng)頭羊。

7 細菌質(zhì)譜鑒定技術(shù)

細菌質(zhì)譜鑒定技術(shù)是較為先進的一種細菌鑒定技術(shù)，通過鑒定細菌自身特有的蛋白，檢測出細菌的特有的蛋白質(zhì)圖譜，在與數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)進行對比，可較為準(zhǔn)確的鑒定出細菌的種類，甚至亞型。這種技術(shù)可鑒定臨床上常見的多種細菌，如大腸埃希菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、李斯特氏菌等，操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，但是也存在一定的局限性，如果數(shù)據(jù)庫中沒有需檢測細菌的數(shù)據(jù)，鑒定將不能完成。