新化合物Elixir-X對肝切及輻射所致衰老小鼠的抗衰老作用*

姚含秉 羅文佳 衛(wèi)思麗 梁英民

(1.陜西圓夢生命科學(xué)研究院，陜西 西安 710015；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712046；3.西安國際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院，陜西 西安 710015)

衰老(Senescence，Ageing)或稱老化，是指隨著年齡的增長在動物包括人積累的一系列生理、心理和社會變化。衰老帶給個體的是細(xì)胞代謝能力和組織細(xì)胞更新、修復(fù)能力的減弱，組織結(jié)構(gòu)的退行性改變，抵抗外物入侵和維持自身組織穩(wěn)態(tài)能力的下降，各方面生理功能的減退以及帶來的負(fù)面心理和社會行為的改變。細(xì)胞衰老的機(jī)制一般認(rèn)為有兩種：一是復(fù)制性衰老(Replicative senescence)，一般在正常細(xì)胞增殖50代后出現(xiàn)，另一種是細(xì)胞受到毒素、輻射等外界因素刺激后細(xì)胞的過早性老化(Premature senescence)。細(xì)胞的這些改變正是機(jī)體衰老和老年相關(guān)疾病的基礎(chǔ)。衰老的組織細(xì)胞不能正常執(zhí)行其功能，而干細(xì)胞也因?yàn)槔匣荒苎a(bǔ)充因衰老而喪失功能的細(xì)胞，造成組織器官功能的下降；另一方面，衰老細(xì)胞會釋放多種衰老相關(guān)因子，促使周圍細(xì)胞級聯(lián)衰老，進(jìn)一步造成組織器官的衰老，引發(fā)如動脈粥樣硬化等一些老齡化疾病。近年有多項(xiàng)研究表明，如果能通過逆轉(zhuǎn)衰老細(xì)胞或者促使衰老細(xì)胞凋亡有效地清除衰老細(xì)胞，可以防止老齡相關(guān)疾病的發(fā)生，延長機(jī)體壽命[1]。

目前，研究具有殺死衰老的細(xì)胞功能以減少或阻止衰老的藥物已經(jīng)成為熱點(diǎn)[2]。從2015年起，各類文獻(xiàn)中已經(jīng)記載了包括小分子、抗體在內(nèi)的20余種抗衰老物質(zhì)[3-5]。此類物質(zhì)大多針對人類內(nèi)皮細(xì)胞，具有清除衰老細(xì)胞、幫助正常細(xì)胞存活的作用。其中白藜蘆醇、二甲雙胍成為研究的焦點(diǎn)[6]。Elixir-X是本課題組從蜂巢中提取的全新化合物，目前已經(jīng)可通過人工合成。在初期的藥理研究中，課題組以Elixir-X作用于線蟲，發(fā)現(xiàn)其可以延長線蟲至少兩倍以上的壽命，同時可增加衰老線蟲的活力。因此猜測，Elixir-X可能具有潛在的抑制老化、延長機(jī)體壽命的能力。本研究就對這一化合物的抗衰老潛力作一探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物 Elixir-X為蜂巢提取物，成微黃色結(jié)晶粉末，已經(jīng)可以人工分離提取。Elixir-X為俄羅斯阿爾泰國立大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究所所長Ivan Smirnov教授提供，并在國際醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成了分離提取及技術(shù)轉(zhuǎn)讓。依據(jù)前期研究資料濃度為11 mg/mL。配制方法：將11 g Elixir-X分別溶解于1 L生理鹽水中。水溫控制在+25℃到40℃，需在帶加熱磁力攪拌器中工作30 min，濃度為11 g/L；將溶解物置于冷卻裝置中24 h，溫度控制在+3℃到+4℃；靜置一夜，待用。

白藜蘆醇為白色精細(xì)粉末，來源于蓼科植物虎杖的根莖，HPLC檢測純度為98%，由西安冠宇生物技術(shù)有限公司提供，批號為501-36-0。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物 C57小鼠(8周齡)90只，由第四軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供，許可證號：SCXK-(軍)2015-0007。本研究遵循動物倫理要求，并經(jīng)本研究院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 SA-β-Gal(CST，9860S)；DMF(CST，12767)；姬姆薩染液(凱基生物，KGA227)；組織固定液(谷歌生物，G1101)；小鼠灌胃針(上海醫(yī)療器械有限公司)；小鼠手術(shù)器械(上海醫(yī)療器械有限公司)；Ki-67(Abcam，ab15580)；PBS(Gibco，10010023)；OCT包埋劑(Sakura，4583)；冰凍刀片(FEATHER，C-35)；防脫載玻片(Thermo Scientific，P4951)；蓋玻片(鑫緣實(shí)驗(yàn)耗材有限公司)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶測試盒(南京建成，C009-2)；谷草轉(zhuǎn)氨酶測試盒(南京建成，C010-1); 人血清白蛋白試劑盒(鈺博生物，YB-E750)；總膽紅素試劑盒(康朗生物，KL4556)。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 精密電子天平(上海梅特勒-托利多，PL-203)；超聲細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物，JY92-IIn)；臺式高速冷凍離心機(jī)(Heal Force，Neofuge 15R)；純水儀(青島富勒姆科技，F(xiàn)BZ2001-UP-P)；渦旋混合器(Servicebio，MX-F)；超低溫冰箱(海爾，DW-86L626)；恒溫水浴鍋(天力醫(yī)療，TL-420D)；全自動研磨儀(Servicebio，KH-III)；多功能酶標(biāo)檢測儀(BioTeK，Epoch)；全自動生化分析儀(深圳雷杜生命科技，Chemray 240)；倒置相差顯微鏡(Leica，DMI8)；激光共聚焦顯微鏡(Leica，SP8)；掃描電子顯微鏡(日立，S-3400)。

1.2 方法

1.2.1 Elixir-X對肝臟切除術(shù)小鼠的自然衰老的影響

1.2.1.1 分組、造模、給藥 從40只C57小鼠中隨機(jī)選取30只，禁食不禁水一晚，次日清晨腹腔注射1%戊巴比妥鈉使其麻醉，腹部中央用碘伏消毒，正中切口，充分暴露肝臟，同時剪開鐮狀韌帶至下腔靜脈，擠出肝臟。以棉簽抬起左外葉，剪開韌帶使肝左外葉游離，取1號手術(shù)線結(jié)扎并切除左外葉，同時以此法切除肝左中葉和右中葉，共切除接近70%肝臟。用棉簽清除腹腔內(nèi)出血，查看有無活動性出血，用0號手術(shù)線分別縫合腹膜和腹壁。小鼠背部皮下注射5 mL無菌5%葡萄糖溶液，放入37℃恒溫孵箱中待其復(fù)蘇后移入鼠房正常飼養(yǎng)，觀察小鼠的存活狀態(tài)[7]。將造模成功的小鼠隨機(jī)分為模型組、Elixir-X組及白藜蘆醇組，每組10只，未造模的10只小鼠則作為空白對照組。于造模術(shù)后第5天開始給藥，Elixir-X組給予濃度為0.32 g/kg/Day的Elixir-X溶液，白藜蘆醇組給予濃度為25 mg/kg/Day的白藜蘆醇溶液，模型組及空白對照組給予等量的生理鹽水，各組均經(jīng)過灌胃給藥，連續(xù)給藥7 d。

1.2.1.2 檢測指標(biāo) 血清采集及肝生化指標(biāo)檢測：給藥結(jié)束后，所有組別小鼠禁食不禁水12 h，以摘眼球采血法收集各組小鼠血液于1.5 mL離心管中，靜止30 min，放入離心機(jī)中以3000 r/min離心15 min，收集上層血清，用做ALT、AST、ALB、TBIL的檢測，操作步驟依照說明書進(jìn)行。

以β-Gal酶染色檢測衰老細(xì)胞數(shù)量：給藥結(jié)束后，所有組別小鼠禁食不禁水12 h，清理腹部鼠毛后，剪開胸腔以暴露心臟，剪開右心耳，將頭皮針刺入左心室，用PBS(pH7.4)灌注去除血液，再以4%多聚甲醛灌注固定后，收集肝臟組織，浸泡在4℃的4%的多聚甲醛中過夜，次日以30%的蔗糖溶液進(jìn)行4℃低溫脫水過夜，修剪組織塊以O(shè)CT包埋劑進(jìn)行-80℃冷凍包埋，而后進(jìn)行冰凍切片；將冰凍切片室溫復(fù)溫半小時，用室溫PBS浸洗3次，每次5 min，待水分晾干后滴加β-Gal染色液，放入濕盒，密封排除殘余CO2后，置于37℃恒溫箱中孵育16 h，20×多視野拍照取像，利用Image J軟件進(jìn)行SAβGal陽性細(xì)胞的計數(shù)統(tǒng)計。

電鏡法檢測肝血竇恢復(fù):取4%多聚甲醛固定的肝臟組織，用5%碳酸鈉沖洗表面異物后以四氧化鋨固定組織，用乙醇脫水后，再醋酸戊酯，置換脫水劑，然后在臨界點(diǎn)(37℃，218 Pa)干燥器一氧化二氮置換劑置換脫水劑，進(jìn)行臨界干燥。將干燥的樣品用粘合劑粘在金屬樣品臺上，然后置于真空蒸發(fā)器中噴鍍一層50～300 ?厚的金屬膜后，置于電鏡下進(jìn)行10K×拍照取像。

組織化學(xué)染色觀察肝組織再生：取OCT包埋的肝臟組織，切厚度為8 μm切片，選擇經(jīng)過處理的載波片進(jìn)行貼片，室溫放置30 min后，放入4℃丙酮固定10 min，PBS浸洗3次，每次5 min。后用3%過氧化氫孵育5～10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS浸洗2次，每次5 min，以5%正常山羊血清(PBS稀釋)室溫封閉10 min，傾去血清后滴加1∶500稀釋的Ki-67一抗4℃過夜孵育，次日用PBS沖洗3次，每次5 min；滴加1∶1000稀釋的生物素標(biāo)記二抗，37℃孵育30 min。用PBS沖洗3次，每次5 min；滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素室溫孵育20 min；PBS沖洗3次，每次5 min；以DAB進(jìn)行顯色劑顯色后用流水充分沖洗，復(fù)染，封片，在倒置相差顯微鏡下進(jìn)行40×拍照取像。

1.2.2 Elixir-X對60CO輻照小鼠的誘導(dǎo)性衰老的影響

1.2.2.1 分組、造模、給藥 從50只C57小鼠中隨機(jī)挑選40只，麻醉后放于固定盒中，使其腹部暴露于5Gy60CO γ射線下照射，其余部分用鉛磚屏蔽，輻照8 min 12 s，皮源距70 cm[8]。將輻照后的小鼠隨機(jī)分成4組：模型組、白藜蘆醇組、Elixir-X高劑量組及Elixir-X低劑量組，每組10只，未輻射的10只為空白對照組。于輻照后的第二天開始給藥，Elixir-X高、低劑量組分別給予0.64 g/kg、0.32 g/kg Elixir-X溶液，白藜蘆醇組給予濃度為25 mg/kg的白藜蘆醇溶液，空白對照組和模型組給予等量的生理鹽水，以上均經(jīng)灌胃每日給藥1次，連續(xù)給藥21天。

1.2.2.2 指標(biāo)檢測 血清采集及肝生化指標(biāo)檢測：檢測方法與1.2.1.2中相同。

以β-Gal酶染色的檢測衰老細(xì)胞數(shù)量：檢測方法與1.2.1.2中相同。

HE染色觀察小腸絨毛結(jié)構(gòu)：取4%多聚甲醛固定的小腸組織，修剪5 mm樣本，放入包埋盒中，流水沖洗30 min，由低濃度到高濃度的梯度酒精脫水后，置于二甲苯中透明，然后將透明后的組織塊置于溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫，待石蠟完全浸入組織塊后進(jìn)行包埋，冷卻凝固成塊即可；將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上，切成8 μm薄片，后再貼到載玻片上，放入45℃恒溫箱中烘干；用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經(jīng)由高濃度到低濃度梯度酒精脫蠟后放入蒸餾水中，然后放入蘇木精水溶液中染色5 min，放入酸水及氨水中分色，各5 s；流水沖洗1 h后入蒸餾水片刻。入70%和90%酒精中脫水各10 min。入酒精伊紅染色液染色3 min；染色后的切片經(jīng)過純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明；將已透明的切片滴上樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，在倒置相差顯微鏡下拍照取像。

組織化學(xué)染色觀察小腸隱窩干細(xì)胞再生：操作步驟同Elixir-X對肝臟切除術(shù)小鼠自然衰老的影響。

2 結(jié)果

2.1 Elixir-X對肝臟切除術(shù)小鼠自然衰老的影響

2.1.1 Elixir-X對肝臟切除術(shù)小鼠肝臟功能恢復(fù)的影響 與空白對照組相比，模型組小鼠血清中ALT、AST、ALB、TBIL水平顯著升高(均P<0.05)，證明肝臟切除術(shù)的小鼠模型是成功的，能滿足實(shí)驗(yàn)需要；與模型組相比，白藜蘆醇組檢測結(jié)果雖有變化，但不明顯(P>0.05)，而Elixir-X組血清中ALT、AST、ALB、TBIL水平顯著降低(P<0.05)，這提示Elixir-X對肝臟切除引起的小鼠肝損傷有一定的恢復(fù)作用，見表1。

表1 Elixir-X對肝臟切除術(shù)小鼠肝臟功能恢復(fù)的影響

2.1.2 Elixir-X能有效清除肝臟切除術(shù)小鼠肝臟衰老細(xì)胞 β-Gal的染色結(jié)果顯示：與空白對照組相比，模型組的β-Gal著色細(xì)胞顯著增多(P<0.05)。與模型組相比，經(jīng)過給藥處理后，Elixir-X組β-Gal陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少，已趨近于空白對照組(P<0.05)，白藜蘆醇組β-Gal著色細(xì)胞數(shù)量也有顯著下降(P<0.05)。這表明，Elixir-X能有效清除肝再生過程中產(chǎn)生的衰老細(xì)胞，見圖1。

圖1 Elixir-X能有效清除肝臟切除術(shù)小鼠肝臟衰老細(xì)胞

2.1.3 Elixir-X促進(jìn)肝臟切除術(shù)小鼠肝臟細(xì)胞的凋亡 Elixir-X能有效減少衰老細(xì)胞，然而在肝臟的再生過程中會產(chǎn)生大量的衰老細(xì)胞，衰老細(xì)胞又稱為 “僵尸細(xì)胞”，細(xì)胞一旦進(jìn)入衰老，便不會再進(jìn)行分裂、凋亡或者壞死，并且會產(chǎn)生衰老相關(guān)分泌表型進(jìn)一步促進(jìn)衰老過程。借助TUNEL技術(shù)，進(jìn)一步探討Elixir-X對衰老細(xì)胞干預(yù)作用。結(jié)果顯示，Elixir-X干預(yù)過程中，凋亡細(xì)胞顯著減少，這提示Elixir-X可能通過促進(jìn)衰老細(xì)胞的凋亡來達(dá)到目的，見圖2。

圖2 Elixir-X促進(jìn)肝臟切除術(shù)小鼠肝臟細(xì)胞凋亡

2.1.4 Elixir-X清除肝臟切除術(shù)小鼠肝臟衰老細(xì)胞促進(jìn)肝再生過程 前面結(jié)果提示，Elixir-X在顯著恢復(fù)肝臟功能的同時又能有效清除再生過程中產(chǎn)生的衰老細(xì)胞，然而肝臟在再生恢復(fù)過程中，產(chǎn)生的衰老細(xì)胞抑制了肝臟的再生過程，若衰老細(xì)胞減少，再生過程或?qū)⒌玫酱龠M(jìn)，故本研究采用IHC方法檢測細(xì)胞增殖指標(biāo)Ki-67(40×)，結(jié)果顯示Elixir-X組與白藜蘆醇組的Ki-67的染色斑明顯增多，顯著促進(jìn)肝臟再生過程的同時，利用掃描電鏡對肝血竇的形態(tài)進(jìn)行取像(10K×)。結(jié)果表明，Elixir-X組和白藜蘆醇組的肝血竇結(jié)構(gòu)更完整，肝血竇的再生得到促進(jìn)。這提示Elixir-X能在恢復(fù)肝臟功能的同時，有效清除掉再生過程中產(chǎn)生的衰老細(xì)胞，進(jìn)而達(dá)到促進(jìn)肝臟再生的功能，見圖3。

圖3 Elixir-X清除肝臟切除術(shù)小鼠肝臟衰老細(xì)胞促進(jìn)肝再生過程

2.2 Elixir-X對60CO輻照小鼠誘導(dǎo)性衰老的影響

2.2.1 Elixir-X對60CO輻照小鼠肝臟功能恢復(fù)的影響 C57小鼠經(jīng)60CO輻照后，模型組ALT、AST、ALB、TBIL高于空白對照組(P<0.05)；與模型組相比，Elixir-X組ALT、AST、ALB、TBIL的分泌量大幅度降低，白藜蘆醇組也能明顯恢復(fù)肝臟功能(均P<0.05)。結(jié)果提示，Elixir-X促進(jìn)輻照后肝臟功能的恢復(fù)，見表2。

表2 Elixir-X對60CO輻照小鼠肝臟功能恢復(fù)的影響

2.2.2 Elixir-X能有效清除60CO輻照小鼠衰老的腸隱窩干細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)過程中，不同組小鼠的個體差異很大，通過對不同處理組小鼠體重的統(tǒng)計，與空白對照組相比，模型組體重下降幅度最大(P<0.05)。與模型組相比，白藜蘆醇組和Elixir-X-低劑量組小鼠體重恢復(fù)較慢，而Elixir-X-高劑量組已恢復(fù)到正常水平(均P>0.05)(圖4A)。生存分析的結(jié)果也提示白藜蘆醇、Elixir-X都能明顯提升輻照小鼠的生存質(zhì)量，然Elixir-X高劑量效果更顯著(圖4B)。同時取小腸組織進(jìn)行切片染色，β-Gal的染色結(jié)果顯示模型組的β-Gal著色細(xì)胞相較于空白對照組顯著增多(P<0.05)，白藜蘆醇、Elixir-X處理后，β-Gal著色細(xì)胞數(shù)量明顯減少，且輻照后小鼠小腸中衰老的細(xì)胞具為腸隱窩干細(xì)胞，與模型組相比，結(jié)果有顯著性差異(P<0.05)(圖4C)。同時在經(jīng)過了白藜蘆醇和Elixir-X干預(yù)處理后，凋亡的細(xì)胞顯著減少(圖4D)，表明Elixir-X能有效的清除60CO輻照小鼠產(chǎn)生的衰老細(xì)胞。

圖4 Elixir-X能有效清除60CO輻照小鼠衰老的腸隱窩干細(xì)胞

2.2.3 Elixir-X通過促進(jìn)60CO輻照小鼠腸隱窩干細(xì)胞再生刺激小腸絨毛恢復(fù) 與空白對照組相比，經(jīng)過60CO輻照后(模型組)，小鼠腸絨毛結(jié)構(gòu)完全損傷，而白藜蘆醇處理后小鼠的腸絨毛結(jié)構(gòu)也明顯得到恢復(fù)。與模型組相比，Elixir-X也能有效恢復(fù)輻照損傷后的小腸絨毛，促進(jìn)腸吸收，見圖5A。而Ki-67的IHC結(jié)果顯示，60CO輻照嚴(yán)重影響了腸隱窩干細(xì)胞的再生功能，在經(jīng)過Elixir-X處理后，腸隱窩干細(xì)胞的再生功能得到恢復(fù)，進(jìn)而促進(jìn)了小腸絨毛的恢復(fù)，見圖5B。Elixir-X通過促進(jìn)腸隱窩干細(xì)胞的再生，進(jìn)而刺激60CO輻照小鼠小腸絨毛恢復(fù)，完成小腸吸收功能。

圖5 Elixir-X通過促進(jìn)60CO輻照小鼠腸隱窩干細(xì)胞再生刺激小腸絨毛恢復(fù)

3 討論

老化帶給個體的是一系列衰減性改變，致使生理功能的減退，病理狀態(tài)的出現(xiàn)以及負(fù)面的心理和社會行為的改變。衰老與多種人類疾病有關(guān)[9]，最為突出的是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病[10]，如阿爾茲海默癥；以及循環(huán)系統(tǒng)相關(guān)疾病[11]，包括動脈粥樣硬化、高血壓等疾病。當(dāng)然腫瘤發(fā)生和演進(jìn)過程中的多個步驟也與細(xì)胞的老化機(jī)制相關(guān)[12]。整體水平衰老表現(xiàn)的基本原因是細(xì)胞水平的老化，細(xì)胞衰老是細(xì)胞周期停滯的一種永久狀態(tài)，它在發(fā)育期間和損傷后促進(jìn)組織重塑[13]，但也可能導(dǎo)致再生潛能和組織功能的下降，導(dǎo)致衰老生物體的炎癥和腫瘤發(fā)生。著名生物醫(yī)學(xué)工程師詹妮弗·埃利塞夫發(fā)表言論稱：“只要去除衰老的細(xì)胞，就能刺激新的組織產(chǎn)生，它會迅速啟動一些組織的自然修復(fù)機(jī)制?！苯暧卸囗?xiàng)研究表面，如果能通過逆轉(zhuǎn)衰老細(xì)胞或者促使衰老細(xì)胞凋亡來有效地清除衰老細(xì)胞，可以防止老齡相關(guān)疾病的發(fā)生，延長機(jī)體壽命[14]。

已經(jīng)確定衰老細(xì)胞在衰老和與年齡有關(guān)的疾病中具有致病作用。因此，可以預(yù)見的是，特異性殺死衰老細(xì)胞的藥物的開發(fā)對減緩衰老表型，治療與年齡有關(guān)的合并癥和提高適應(yīng)力具有顯著的治療作用[15]。許多具有senolytic作用的化合物已經(jīng)在體外和體內(nèi)進(jìn)行了研究，效果十分顯著，能有效清除衰老的細(xì)胞[16]?？顾ダ纤幬颷17]大致可分為中藥類(如當(dāng)歸、人參和蜂王漿等)[18]、小分子類(如二甲雙胍、白藜蘆醇、原花青素和雷帕霉素)[19]和多肽類(如花生粕多肽)[20]。本研究通過切除小鼠肝臟，模擬自然衰老過程，文獻(xiàn)報道肝臟切除術(shù)后，肝細(xì)胞進(jìn)入復(fù)制性衰老，將再生的負(fù)擔(dān)轉(zhuǎn)移到肝臟細(xì)胞上[21]，這個過程中，會產(chǎn)生大量復(fù)制性衰老細(xì)胞，抑制了肝臟的再生過程[22-23]，衰老的延緩或者抑制能明顯的刺激肝臟的再生功能[24]。Elixir-X處理后，肝臟切除小鼠的肝臟功能很快恢復(fù)到正常水平，而且衰老的細(xì)胞顯著減少，衰老明顯被抑制。同時，在這一過程中肝臟組織中的Ki-67表達(dá)也明顯增多，肝臟的再生得到加速，肝血竇的重建也得到加速，使肝臟快速的完成再生。本研究同時利用60CO輻照C57小鼠進(jìn)行模擬老化性衰老過程[25]，結(jié)果顯示經(jīng)Elixir-X處理后，無論高濃度還是低濃度都能顯著清除小腸絨毛中的衰老細(xì)胞，降低衰老程度，并且對γ射線輻照后的肝功能損傷有顯著的修復(fù)作用。通過HE進(jìn)行組織染色，觀察到經(jīng)過Elixir-X處理的小鼠，小腸絨毛的結(jié)構(gòu)明顯恢復(fù)，提示Elixir-X促使小鼠恢復(fù)了腸吸收功能，同時本研究也觀察到了Elixir-X組小鼠的體重恢復(fù)到正常水平，并且Ki-67的組化染色中Elixir-X組的表達(dá)明顯增多，且Ki-67表達(dá)位置與衰老細(xì)胞的位置定位在小腸的隱窩內(nèi)，屬于小腸的腸隱窩干細(xì)胞。

4 結(jié)論

Elixir-X一方面能明顯清除肝臟損傷后的再生過程中產(chǎn)生的自然衰老細(xì)胞，通過凋亡衰老細(xì)胞促進(jìn)肝血竇的重建，恢復(fù)肝臟的功能，加速完成再生進(jìn)程；另一方面Elixir-X針對60CO輻照引起的老化性衰老亦有顯著的抑制作用，通過清除衰老的腸隱窩干細(xì)胞，促使其更新再生，加速完成小腸絨毛結(jié)構(gòu)，回復(fù)小腸的吸收功能，并且對輻照損傷后的肝臟功能恢復(fù)亦有顯著效果。