RGS6表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌預(yù)后的影響

吳小勤,，黃宏寶，吳雪銘，蘇群英，王興枝子，龍勤琴，黃小英，龍喜帶

【摘要】 目的 探討G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白6（regulator of G protein signaling 6，RGS6）表達(dá)與肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）預(yù)后的關(guān)系。

方法 收集HCC腫瘤組織樣本100例，通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)RGS6在腫瘤組織中的表達(dá)情況，采用Kaplan-Meier生存法和Cox回歸模型分析RGS6表達(dá)對(duì)HCC預(yù)后的影響。

結(jié)果 腫瘤組織中RGS6表達(dá)減少與更高腫瘤分級(jí)、微血管侵犯、腫瘤生長(zhǎng)、Ki67高分值等病理特征密切相關(guān)（P<0.05）;Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示腫瘤組織中RGS6表達(dá)減少的患者具有更低的生存率（P=0.027），多因素Cox回歸分析均顯示具有RGS6表達(dá)減少的患者死亡風(fēng)險(xiǎn)增加，具體風(fēng)險(xiǎn)值（HR）為157.747（95%CI=5.769～4313.674，P=0.003）。

結(jié)論 RGS6表達(dá)是一個(gè)影響HCC預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)，RGS6表達(dá)影響HCC預(yù)后的可能機(jī)制與其影響腫瘤分化、生長(zhǎng)、血管浸潤(rùn)等相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 肝細(xì)胞癌;RGS6表達(dá);腫瘤預(yù)后

中圖分類(lèi)號(hào)：R735.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.02.008

Effects of RGS6 expression on the prognosis of hepatocellular carcinoma

[HJ2][HJ]

WU Xiaoqin1a，2， HUANG Hongbao1b， WU Xueming1a，2， SU Qunying1a，2， WANG Xingzhizi1a，2，

LONG Qinqin1a，2， HUANG Xiaoying1a，2， LONG Xidai1a，2

（1a.Clinical Pathological Diagnosis & Research Center，1b. Reproductive Medicine Center， 1. Affiliated Hospital of

Youjiang Medical University for Nationalities， Baise 533000， Guangxi， China; 2.Key Laboratory of Molecular

Pathology[Hepatobiliary Diseases] of Guangxi， Baise 533000， Guangxi， China）

[HJ2][HJ]

【Abstract】 Objective To explore association between the expression of regulator of G protein signaling 6 （RGS6） and the prognosis of hepatocellular carcinoma （HCC）.

Methods A total of 100 tumor tissue samples with HCC were collected and the RGS6 expression in these tumor tissues was tested by immunohistochemistry method.The effects of RGS6 expression on HCC prognosis were analyzed by Kaplan-Meier survival method and Cox regression model.

Results The decrease of RGS6 expression in tumor tissues was associated with pathological features such as higher tumor grade，microvascular invasion， tumor growth and higher Ki67 score， etc （P<0.05）. Results from Kaplan-Meier survival method showed that patients with decreasing RGS6 expression in tumor tissues had a lower survival rate （P=0.027）， multivariable Cox regression analysis exhibited that decreasing RGS6 expression increased the death risk of patients， and specific risk value was 157.747（5.769-4313.674， P=0.003）.

Conclusion RGS6 expression is an independent index affecting the prognosis of HCC， and the possible mechanism of which is related to its influence on tumor differentiation， growth and vascular infiltration， etc.

【Key words】 HCC; RGS6 expression; tumor prognosis

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）是消化系統(tǒng)中常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在全球排名第6位，死亡率位于第4[1]，該腫瘤發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，早期診斷困難，無(wú)有效的治療手段。目前，臨床上依然以手術(shù)治療為主和化療為輔，但預(yù)后不佳[2]。因此，尋找有效的預(yù)后預(yù)測(cè)標(biāo)志物仍是當(dāng)前研究領(lǐng)域有待解決的重要課題。而G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白6（regulator of G protein signaling 6，RGS6）是G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)通路負(fù)性調(diào)節(jié)因子家族的重要成員，具有促進(jìn)GTP酶活性并加速GTP水解而調(diào)節(jié)G蛋白信號(hào)通路的重要作用[3～4]。近年來(lái)，有研究表明RGS6在膀胱癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等多種腫瘤及中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)疾病中出現(xiàn)不同程度的表達(dá)異常，提示可能參與腫瘤及某些疾病的發(fā)生與發(fā)展[5～10]。但是，RGS6表達(dá)是否影響HCC的預(yù)后并不清楚。本研究采用免疫組化檢測(cè)RGS6在HCC中的表達(dá)情況，并根據(jù)免疫組化結(jié)果探討RGS6表達(dá)與HCC患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院進(jìn)行手術(shù)治療并符合下列入選標(biāo)準(zhǔn)的HCC患者：術(shù)前未進(jìn)行放療與化療、病理組織活檢確診為HCC、具有完整的臨床病理資料與生存隨訪資料、具有足夠用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)的石蠟包埋組織樣本。在2016年1月至2021年6月期間，收集到符合入選標(biāo)準(zhǔn)的HCC患者共100例。所有研究對(duì)象均接受了生存隨訪，隨訪截止日期為2021年6月30日。當(dāng)前研究獲得了病例收集醫(yī)院的倫理審批同意。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)

RGS6在HCC腫瘤組織中的表達(dá)水平通過(guò)免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)分析，其中RGS6抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司（產(chǎn)品編號(hào)：bs-19862R），二抗由邁新生物科技有限公司提供。免疫組織化學(xué)檢測(cè)為標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)流程，具體包括檢測(cè)石蠟組織的脫蠟、水化、抗原修復(fù)、抗體孵育、顯色分析等過(guò)程，為保準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)立陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照，并采用雙盲法進(jìn)行分析。根據(jù)染色程度和強(qiáng)度評(píng)價(jià)RGS6蛋白質(zhì)的表達(dá)量，其中染色強(qiáng)度分為0～3分：無(wú)染色為0分，弱染色為1分，中度染色為2分，強(qiáng)染色為3分;染色程度分為0～3分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總檢細(xì)胞百分比的0～10%、11%～40%、41%～70%和71%～100%分別為0分、1分、2分和3分，以染色強(qiáng)度與程度的乘積作為RGS6表達(dá)量。為便于分析，我們以所有樣本的RGS6平均表達(dá)量5分作為高低表達(dá)分組的依據(jù)，即≥5分為高表達(dá)組，<5分為低表達(dá)組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有統(tǒng)計(jì)分析通過(guò)R軟件（version 4.0.3）來(lái)完成。計(jì)量資料不服從正態(tài)分布，采用“中位數(shù)（P25，P75）”表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)（n）和百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，RGS6表達(dá)對(duì)HCC預(yù)后的影響通過(guò)Kaplan-Meier生存法和Cox生存回歸模型來(lái)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 RGS6表達(dá)與HCC病理特征的關(guān)系

我們首先分析了HCC腫瘤組織中RGS6表達(dá)與HCC臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：與具有高RGS6表達(dá)的患者相比，低RGS6表達(dá)者腫瘤分化程度更低，微血管浸潤(rùn)概率更高（表1），反映腫瘤生長(zhǎng)速度的Ki67分值和腫瘤直徑也更大（圖1和表1）。

2.2 RGS6表達(dá)對(duì)HCC生存曲線的影響

Kaplan-Meier生存曲線結(jié)果顯示（圖2），與高RGS6表達(dá)者相比，低RGS6表達(dá)者具有更低的總體生存率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.027）。

2.3 RGS6表達(dá)對(duì)HCC死亡風(fēng)險(xiǎn)的影響

為了明確RGS6表達(dá)是否是一個(gè)獨(dú)立的HCC預(yù)后指標(biāo)，我們完成了多因素Cox生存回歸分析，將所有變量納入分析模型中。結(jié)果顯示：以高RGS6表達(dá)者為參照，具有低RGS6表達(dá)的HCC患者所面臨的死亡風(fēng)險(xiǎn)增加約157倍（校正HR為157.747，95%可信區(qū)間為5.769～4313.674，P值為0.003）。

3 討 論

RGS6作為一種G蛋白信號(hào)通路的負(fù)性調(diào)控因子，在胚胎發(fā)育和細(xì)胞分化過(guò)程中起重要作用，它的表達(dá)失調(diào)涉及腸癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌等多種腫瘤的演進(jìn)，在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展進(jìn)程中起到類(lèi)似腫瘤抑制基因的作用[11～12]。例如，在結(jié)直腸癌中，有研究者觀察到RGS6上調(diào)具有抗腫瘤作用，在膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌中也有類(lèi)似發(fā)現(xiàn)。并且還有研究發(fā)現(xiàn)RGS6參與心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展[13～18]，因此，我們猜想，RGS6在HCC的發(fā)生發(fā)展中是否也起到同樣或是相似的抑癌作用，我們?cè)噲D通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證并闡明這一想法。在我們的研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)HCC腫瘤組織中RGS6的升高與HCC患者的良好預(yù)后相關(guān)，這種RGS6影響HCC預(yù)后不受其他臨床病理特征的影響，這說(shuō)明RGS6是一個(gè)影響HCC的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志物，并且RGS6是HCC的保護(hù)因素，在HCC的發(fā)生發(fā)展中起到限制腫瘤生長(zhǎng)的作用。而RGS6調(diào)節(jié)腫瘤預(yù)后的機(jī)制卻很復(fù)雜，可能涉及如下幾個(gè)方面：① RGS6在腫瘤形成的免疫微環(huán)境中通過(guò)調(diào)節(jié)趨化因子、細(xì)胞轉(zhuǎn)化及誘導(dǎo)細(xì)胞死亡等方式發(fā)揮抗腫瘤作用[19～26]。② RGS6能負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖。我們當(dāng)前的研究也發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中RGS6表達(dá)與Ki67、腫瘤大小等腫瘤增殖標(biāo)志相關(guān)，表達(dá)水平增加可以抑制腫瘤增殖。③ RGS6表達(dá)水平高低與HCC腫瘤細(xì)胞的分化程度相關(guān)，高RGS6表達(dá)者具有更高的腫瘤分化，后者與好的腫瘤預(yù)后相關(guān)。因而，RGS6有望成為HCC預(yù)后的新指標(biāo)和免疫治療新靶點(diǎn)[27～28]。

總之，我們的研究發(fā)現(xiàn)RGS6有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義地影響HCC預(yù)后，是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)志物，這種影響也許與RGS6表達(dá)調(diào)節(jié)腫瘤分化與增殖密切相關(guān)。值得注意的是我們的研究是基于一個(gè)相對(duì)較小的樣本所獲得的結(jié)論，它的推廣需要通過(guò)更大樣本和功能性試驗(yàn)加以確認(rèn)。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2021-08-26 修回日期：2021-09-12）

（編輯：梁明佩）