H型高血壓患者M(jìn)THFR基因C677T多態(tài)性與Hcy及血脂水平的關(guān)系*

邱 巍，陳素梅，劉東聲

徐州醫(yī)科大學(xué)附屬宿遷醫(yī)院檢驗(yàn)科/江蘇省宿遷市檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇宿遷 223800

高血壓是一種與心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)的疾病，血壓水平與心血管風(fēng)險(xiǎn)呈連續(xù)、獨(dú)立、直接的正相關(guān)關(guān)系[1]。目前，在我國(guó)高血壓人群中，最主要的并發(fā)癥是腦卒中，其次是冠心病、心力衰竭、左心室肥厚、心房顫動(dòng)和終末期腎病等[2]。研究表明，我國(guó)心血管疾病發(fā)病率持續(xù)上升且病死率仍居首位，高于腫瘤及其他疾病，其危險(xiǎn)因素主要包括高血壓、血脂異常、糖尿病、慢性腎臟病、代謝綜合征、睡眠障礙和大氣污染等[3]。高血壓作為心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素，常伴有高同型半胱氨酸(Hcy)、高血脂[4]。而高Hcy與葉酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)的基因多態(tài)性相關(guān)[5]。本研究分析H型高血壓患者M(jìn)THFR基因C677T多態(tài)性與血清Hcy及血脂水平的關(guān)系，并對(duì)H型高血壓患者進(jìn)行年齡與性別的分組研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年12月在徐州醫(yī)科大學(xué)附屬宿遷醫(yī)院診斷為H型高血壓的患者404例，年齡22～95歲，其中男297例、平均年齡(59.52±12.95)歲，女 107 例、平均年齡(67.08± 12.99)歲。梁榮珍等[6]發(fā)現(xiàn)MTHFR基因突變與老年高血壓患者的Hcy和血脂水平有一定相關(guān)性，故本研究將研究對(duì)象按年齡分為<65歲和≥65歲進(jìn)行不同基因型間Hcy和血脂水平的比較。入選標(biāo)準(zhǔn)：符合《高血壓基層診療指南：2019年》中高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]；符合《H型高血壓診斷與治療專(zhuān)家共識(shí)》中空腹Hcy≥10 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：繼發(fā)性高血壓；合并嚴(yán)重的肝腎功能不全；存在嚴(yán)重心腦血管疾病及嚴(yán)重臟器疾??；正在服用會(huì)影響Hcy和血脂的藥物。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均知情同意。

1.2儀器與試劑 ABI 7500 PCR儀(美國(guó)賽默飛世爾公司生產(chǎn))；Eppendorf 5424R離心機(jī)(德國(guó)艾本德公司生產(chǎn))；Beckman AU5800(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司生產(chǎn))；MTHFR基因677C/T檢測(cè)試劑盒(深圳泰樂(lè)德醫(yī)療有限公司生產(chǎn))；血清Hcy檢測(cè)試劑盒(深圳泰樂(lè)德醫(yī)療有限公司生產(chǎn))；血脂四項(xiàng)檢測(cè)試劑盒(廣州科方生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn))。

1.3方法

1.3.1血清Hcy及血脂水平檢測(cè) 所有入組者禁食12 h后，空腹采集促凝靜脈血5 mL及EDTA-K2抗凝的全血2 mL，促凝血經(jīng)3 000 r/min離心15 min后檢測(cè)血清Hcy、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。

1.3.2基因分型 按照MTHFR基因677C/T檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)EDTA-K2抗凝的全血標(biāo)本進(jìn)行基因分型。取25 μL全血標(biāo)本放于1.5 mL離心管內(nèi)，提取基因組DNA。反應(yīng)體系：10 μL R5、0.25 μL R6、5.75 μL雙蒸水和4 μL的陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照或待檢樣本DNA。程序設(shè)置如下：50 ℃ 2 min 1個(gè)循環(huán)；95 ℃ 2 min 1個(gè)循環(huán)；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，45個(gè)循環(huán)。熒光信號(hào)的收集定為FAM和VIC，數(shù)據(jù)的采集定在60 ℃，通過(guò)收集到的熒光信號(hào)進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1患者血脂、Hcy水平 404例患者血清Hcy水平為(18.13±6.09)mmol/L，TC水平為(4.65±1.00)mmol/L，TG水平為(1.89±0.41)mmol/L，HDL-C水平為(1.33±0.28)mmol/L，LDL-C水平為(2.74±0.78)mmol/L。

2.2基因型分組 對(duì)入組的404例患者進(jìn)行MTHFR C677T基因分型：TT型130例，占32.18%；CT型184例，占45.54%；CC型90例，占22.28%。CC型為野生型，CT型為雜合突變型，TT型為純合突變型。突變基因型為274例，占67.82%。不同基因型患者一般資料見(jiàn)表1。

表1 不同基因型患者一般資料

2.3不同基因型患者Hcy和血脂水平比較 TT型患者血清Hcy水平均明顯高于CT、CC型(P<0.05)，而CC型患者血清Hcy水平與CT型比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。TT型患者血清TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平與CT、CC型比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.4按年齡、性別分組的不同基因型患者Hcy和血脂水平比較 <65歲和≥65歲TT型患者的血清Hcy水平與CT、CC型比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；≥65歲TT型患者血清HDL-C水平與CT、CC基因型比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而≥65歲TT型患者血清TC、TG、LDL-C水平與CT、CC型比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。男、女TT型患者的血清Hcy水平與CT、CC型比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而男、女TC、TG、HDL-C、LDL-C水平在不同基因型間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表2 不同基因型患者Hcy和血脂水平比較

表3 年齡分組不同基因型患者Hcy和血脂水平比較

表4 性別分組不同基因型患者Hcy和血脂水平比較

3 討 論

Hcy是一種含硫氨基酸，為蛋氨酸和半胱氨酸代謝過(guò)程中的重要中間產(chǎn)物，在血漿中主要與清蛋白以二硫鍵形式結(jié)合[7]。Hcy有3種代謝途徑：第一，是在維生素B6參與的胱硫醚縮合酶(CBS)和胱硫醚酶催化下生成半胱氨酸；第二，是甜菜堿作為甲基供體，由甜菜堿Hcy甲基轉(zhuǎn)移酶甲基化成為蛋氨酸；第三，是在5-甲基四氫葉酸和維生素B12的輔助下，由甲硫氨酸合成酶催化成蛋氨酸[5]。5-甲基四氫葉酸是MTHFR還原5，10-亞甲基四氫葉酸的產(chǎn)物，也是血清中葉酸的主要存在形式。因此，葉酸缺乏或MTHFR活性下降都會(huì)導(dǎo)致血清Hcy水平升高。

目前，對(duì)于MTHFR基因多態(tài)性與Hcy及血脂水平相關(guān)性的研究多集中在C677T位點(diǎn)。MTHFR基因的677位密碼子胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)置換后，導(dǎo)致222處密碼子的氨基酸丙氨酸被纈氨酸取代，攜帶等位基因T的突變型CT型和TT型都會(huì)導(dǎo)致MTHFR活性下降，引起葉酸代謝障礙和血清Hcy水平升高[7]。較多的研究認(rèn)為純合突變型TT型患者血清Hcy水平顯著高于雜合突變型CT型和野生型CC型[8-11]。MTHFR基因 C677T多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性研究結(jié)論存在差異。梁榮珍等[6]研究顯示，MTHFR基因C677T的TT型患者有較高的Hcy水平，明顯高于CT型和CC型，TC、TG、LDL-C水平也明顯高于CT型和CC型；而本研究的結(jié)論為MTHFR基因C677T的TT型患者Hcy水平明顯高于CT、CC型，≥65歲的TT型患者血清HDL-C水平高于CT、CC型，而≥65歲的TT型患者血清TC、TG、LDL-C水平與CC、CT型間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與該研究結(jié)論不一致。原因可能是前者的研究對(duì)象集中在老年患者，而本研究中研究對(duì)象各年齡段均有分布，老年人的血脂代謝異常要明顯重于年輕人。有研究表明，TT型患者Hcy水平高于CT、CC型，而CT型患者Hcy水平與CC型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，各基因型的TC、TG、HDL-C及LDL-C水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[12-13]。而劉爽等[14]的研究表明，MTHFR基因C677T多態(tài)性與Hcy有相關(guān)性，與血脂水平無(wú)相關(guān)性，MTHFR基因A1298C和MRTT基因A66G位點(diǎn)與Hcy和血脂水平均無(wú)相關(guān)性。這些研究證實(shí)了在H型高血壓患者中MTHFR基因C677T基因多態(tài)性與Hcy水平相關(guān)，TT型患者有較高的Hcy水平，而MTHFR基因C677T基因多態(tài)性與血脂無(wú)關(guān)。本研究的結(jié)論與眾多研究的結(jié)果保持一致，在對(duì)年齡分組的分析中發(fā)現(xiàn)≥65歲的TT型患者血清HDL-C水平顯著高于CT和CC型，說(shuō)明MTHFR基因C677T基因多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性可能與年齡有關(guān)，但還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量證實(shí)該結(jié)論。