miRNA對(duì)三陰性乳腺癌診斷價(jià)值的Meta分析

周杰超

廣東省江門(mén)市五邑中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東江門(mén) 529000

目前乳腺癌已成為女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅全球女性健康，三陰性乳腺癌(TNBC)相對(duì)于其他類型的乳腺癌具有發(fā)病年齡早、癌細(xì)胞容易發(fā)生轉(zhuǎn)移、治療后復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，早期診斷能提高患者的生存率和改善預(yù)后。2015版美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)(ACS)乳腺癌篩查指南推薦乳腺癌一般風(fēng)險(xiǎn)女性應(yīng)從45歲起常規(guī)進(jìn)行乳房影像學(xué)篩查[1]，我國(guó)的乳腺癌發(fā)病率逐年上升且發(fā)病高峰期比歐美國(guó)家有所提前，《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2019年版)》建議乳腺癌一般風(fēng)險(xiǎn)女性篩查起始年齡為40歲，由于X線對(duì)40歲以下女性乳腺癌的篩查效果欠佳，需與乳腺超聲聯(lián)合檢測(cè)提高靈敏度[2]。目前常用的腫瘤標(biāo)志物糖類抗原153(CA153)對(duì)早期乳腺癌的診斷靈敏度不高[3]，其他惡性腫瘤中也可見(jiàn)到CA153表達(dá)水平升高，然而臨床需要高靈敏度和高特異度的指標(biāo)來(lái)提高早期乳腺癌的篩查能力，大量研究表明，微小RNA(miRNA)檢測(cè)技術(shù)對(duì)診斷早期乳腺癌具有較高的靈敏度和特異度[4]，且隨著檢測(cè)方法的快速發(fā)展，miRNA檢測(cè)技術(shù)日益成熟[5]。miRNA是小分子非編碼單鏈RNA，長(zhǎng)度一般為20～25個(gè)堿基，miRNA與另一種蛋白復(fù)合物形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體，通過(guò)與其靶基因信使RNA(mRNA)分子的3′端非翻譯區(qū)域互補(bǔ)匹配，最終抑制mRNA分子的轉(zhuǎn)錄翻譯，miRNA具有重要的基因表達(dá)調(diào)控功能。miRNA在乳腺癌細(xì)胞的表達(dá)、增殖、遷移中都扮演著重要的調(diào)控角色[6]。鑒于公開(kāi)發(fā)表的有關(guān)miRNA診斷乳腺癌的文獻(xiàn)多為單中心、樣本量小、研究結(jié)果差異大，本文對(duì)這些研究進(jìn)行綜合分析，以評(píng)價(jià)miRNA對(duì)TNBC的診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1文獻(xiàn)來(lái)源 以“乳腺癌(breast cancer)、三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer)、miRNA、microRNA、微小RNA”等為主題、主題或(和)關(guān)鍵詞、題名或關(guān)鍵詞組成相應(yīng)高級(jí)檢索信息或條件檢索中英文數(shù)據(jù)庫(kù)，包括萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)、維普網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)服務(wù)系統(tǒng)、PubMed、Web of Science、Embase、Cochrane Library。檢索時(shí)間為建庫(kù)至 2021年6月29日。

1.2文獻(xiàn)的選擇標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)采用病例對(duì)照研究，凡是文獻(xiàn)中提到有“病例對(duì)照”的中英文文獻(xiàn)，無(wú)論是否采用盲法和分配隱藏，均納入；(2)經(jīng)病理組織細(xì)胞學(xué)確診為乳腺癌，或經(jīng)《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2019年版)》或《美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)乳腺癌篩查指南(2015年版)》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)診斷為乳腺癌；(3)干預(yù)措施為采用miRNA檢測(cè)診斷乳腺癌；(4)研究對(duì)象未使用過(guò)抗腫瘤藥物；(5)真陽(yáng)性例數(shù)(TP)、假陰性例數(shù)(FN)、假陽(yáng)性例數(shù)(FP)及真陰性例數(shù)(TN)可以通過(guò)文獻(xiàn)直接得出或計(jì)算得出；(6)檢驗(yàn)方法為實(shí)時(shí)熒光PCR(qRT-PCR)法等。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)綜述、Meta分析、未具體說(shuō)明的文獻(xiàn)；(2)動(dòng)物試驗(yàn)文獻(xiàn)；(3)非病例對(duì)照研究；(4)組間均衡性差，基線不一致，兩組無(wú)法比較的文獻(xiàn)；(5)重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；(6)干預(yù)措施不是采用miRNA檢測(cè)診斷乳腺癌；(7)研究對(duì)象使用過(guò)抗腫瘤藥物的、凡是文獻(xiàn)中提到有合并其他腫瘤或癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的(乳腺癌轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)除外)；(8)無(wú)健康或良性對(duì)照組，研究對(duì)象無(wú)具體的年齡和性別等基本描述；(9)TP、FP、TN、FN數(shù)據(jù)不全；(10)經(jīng)QUADAS-2文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分得分較低的文獻(xiàn)。

1.3納入文獻(xiàn)的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法、發(fā)表偏倚分析與數(shù)據(jù)提取 采用質(zhì)量評(píng)價(jià)工具QUADAS-2對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，采納得分≥7分的文獻(xiàn)，如2名研究者的評(píng)價(jià)意見(jiàn)不一致時(shí)，交由第3名人員進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用Review Manager 5.3對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行發(fā)表偏倚分析，剔除發(fā)表偏倚明顯的文獻(xiàn)。文獻(xiàn)提取的數(shù)據(jù)為第一作者、發(fā)表年份、國(guó)家地區(qū)、種族、性別、年齡、對(duì)照組類型、檢測(cè)標(biāo)本類型、檢測(cè)方法、TP、 FN、 FP及TN等。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 Meta分析使用軟件MetaDiSc1.4和STATA15.1完成。主要分析的效應(yīng)量為靈敏度、特異度、陽(yáng)性似然比、陰性似然比、綜合受試者工作特征(SROC)曲線的曲線下面積(AUC)診斷比值比(DOR)、Fagan列線圖、Spearman相關(guān)系數(shù)、發(fā)表偏倚等，采用I2檢驗(yàn)評(píng)估異質(zhì)性，I2<25%為輕度異質(zhì)性，25%～75%為中度異質(zhì)性，>75%為高度異質(zhì)性，當(dāng)I2<25%時(shí)采用固定效應(yīng)模型合并各效應(yīng)量，當(dāng)I2≥25%時(shí)采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并各效應(yīng)量。

2 結(jié) 果

2.1納入文獻(xiàn)的基本信息及質(zhì)量評(píng)價(jià) 通過(guò)選定數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到文獻(xiàn)(n=6 887 082)，進(jìn)一步將以上所有數(shù)據(jù)庫(kù)高級(jí)檢索詞之間的關(guān)系改為與、并且、AND之后檢索,剔除重復(fù)文獻(xiàn)，閱讀文獻(xiàn)題目和摘要后剔除不相關(guān)主題文獻(xiàn),再進(jìn)行全文閱讀，剔除非病例對(duì)照研究、無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算TP、FP、TN、FN和研究組或?qū)φ战M病例不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn),最終納入7篇文獻(xiàn)，其中包含9項(xiàng)研究，均為英文文獻(xiàn)，納入的文獻(xiàn)均為病例對(duì)照分組，納入文獻(xiàn)的研究組和對(duì)照組在年齡、病程等方面基線統(tǒng)一，總共有647例患者被納入，其中研究組218例，對(duì)照組429例。納入對(duì)象的年齡為21～90歲。納入文獻(xiàn)的基本資料見(jiàn)表1。QUADAS-2文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)分顯示本次納入文獻(xiàn)的質(zhì)量評(píng)分均較高，從Review Manager 5.3對(duì)納入文獻(xiàn)的發(fā)表偏倚分析中得出，本次研究納入的文獻(xiàn)均為發(fā)表偏倚不明顯的文獻(xiàn)。

表1 文獻(xiàn)的基本資料

2.2異質(zhì)性分析 閾值效應(yīng)分析顯示，SROC曲線平面圖不呈“肩臂”狀分布，Spearman相關(guān)系數(shù)為-0.211,P=0.586，不存在閾值效應(yīng)引起的異質(zhì)性。非閾值效應(yīng)分析表明，DOR森林圖顯示數(shù)據(jù)排列不沿同一直線，Cochran-Q=32.45，P<0.001，I2=75.3%，提示本研究可能存在由非閾值效應(yīng)引起的異質(zhì)性。將數(shù)據(jù)按研究人群的地區(qū)、年齡分布、對(duì)照組類型、檢測(cè)標(biāo)本類型、檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)估，根據(jù)P值大小，逐個(gè)剔除，發(fā)現(xiàn)上述效應(yīng)量與異質(zhì)性均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Deeks′漏斗圖顯示回歸線呈雙側(cè)對(duì)稱，P=0.23，提示納入研究的發(fā)表偏倚不明顯。

2.3各效應(yīng)量合并分析 采用相對(duì)應(yīng)的模型合并標(biāo)準(zhǔn)對(duì)9項(xiàng)研究進(jìn)行各效應(yīng)量合并后得到，miRNA合并的靈敏度為0.86(95%CI：0.81～0.91)，特異度為0.86(95%CI：0.82～0.89)，陽(yáng)性似然比為4.65(95%CI：2.75～7.86)，陰性似然比為0.15(95%CI：0.06～0.35)，DOR為46.40(95%CI：13.08～164.66)，AUC為0.945 8，Q=0.885 0，SROC曲線見(jiàn)圖1。

2.4Fagan列線圖分析 Fagan列線圖分析顯示，對(duì)檢測(cè)前有25%概率患TNBC的患者來(lái)說(shuō)，當(dāng)miRNA檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)，患TNBC的概率為75%，miRNA檢測(cè)陰性時(shí)，則檢測(cè)后患病概率降低為2%。對(duì)于檢測(cè)前有50%概率患TNBC的患者，當(dāng)miRNA檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)，其患TNBC的概率為90%，miRNA檢測(cè)陰性時(shí)，檢測(cè)后患病概率降低為6%。對(duì)于檢測(cè)前有75%概率患TNBC的患者，當(dāng)miRNA檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)，其患TNBC的概率為96%，miRNA檢測(cè)陰性時(shí)，檢測(cè)后患病概率降低為16%。見(jiàn)圖2。

注：每個(gè)圓點(diǎn)代表一篇文獻(xiàn)，圓點(diǎn)的大小代表文獻(xiàn)中納入的樣本量的大小；②表示SROC曲線，①、③表示95%CI。

注：A為檢測(cè)前概率為25%的Fagan列線圖；B為檢測(cè)前概率為50%的Fagan列線圖；C為檢測(cè)前概率為75%的Fagan列線圖。

3 討 論

隨著乳腺癌的發(fā)病年齡逐漸年輕化，臨床對(duì)于部分無(wú)癥狀的隱匿型乳腺癌往往會(huì)漏診，而大部分乳腺癌患者確診時(shí)已為中晚期階段，TNBC早期診斷更為重要。

NAM等[14]研究表明，術(shù)前CA153水平不能作為T(mén)NBC總生存率(OS)的預(yù)后判斷指標(biāo)，ARAZ等[3]研究表明術(shù)前CA153水平與早期乳腺癌亞型無(wú)關(guān)，王海疆等[15]研究表明CA153在TNBC中的診斷效能一般，LI等[16]研究表明CA153在多種惡性腫瘤中表達(dá)水平升高，可見(jiàn)CA153診斷乳腺癌的靈敏度和特異度都不夠理想，臨床需要具有更高診斷效能的腫瘤標(biāo)志物來(lái)輔助診斷TNBC。

目前液體活檢技術(shù)篩查和輔助診斷乳腺癌的方法尚未廣泛應(yīng)用于臨床，更多還處于科學(xué)研究階段，查閱公開(kāi)發(fā)表的關(guān)于循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)、循環(huán)腫瘤脫氧核糖核酸(ctDNA)、循環(huán)腫瘤游離脫氧核糖核酸(cfDNA)甲基化、miRNA、長(zhǎng)鏈RNA(lncRNA)、環(huán)狀RNA(circRNA)用于乳腺癌診斷和藥物治療靶點(diǎn)研究的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)其中KANDETTU等[17]研究表明，miRNA對(duì)乳腺癌的診斷似乎有很好的潛在價(jià)值，然而目前的研究數(shù)據(jù)對(duì)于miRNA是否可用于乳腺癌的臨床輔助診斷尚未有明確的定論。VOLOVAT等[18]研究表明，在TNBC細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可存在多種miRNA基因異常表達(dá)。OZAWA等[19]研究表明，miRNA檢測(cè)作為一種無(wú)創(chuàng)液體活檢技術(shù)輔助診斷乳腺癌具有很好的優(yōu)勢(shì)。KELLER等[20]研究表明，miRNA在乳腺癌發(fā)生很久之前就可以出現(xiàn)異常表達(dá)。CHEN等[21]研究表明，結(jié)合人工智能構(gòu)建miRNA譜預(yù)測(cè)模型在診斷乳腺癌中達(dá)到84%的準(zhǔn)確性。ZOU等[22]研究表明，在乳腺癌患者和健康人群中檢測(cè)miRNA并篩選出4種miRNA作為研究指標(biāo)，4種miRNA的AUC都大于0.9。SONG等[23]研究表明，以聚二甲基硅氧烷(PDMS)作為高通量平臺(tái)制作一種金納米棒(AuNRs)作為表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)的活性基板，能大大提高miRNA檢測(cè)診斷乳腺癌的靈敏度，為將來(lái)構(gòu)建超靈敏傳感器診斷乳腺癌及實(shí)現(xiàn)乳腺癌生物醫(yī)學(xué)即時(shí)檢測(cè)(POCT)提供支持。GUO等[24]研究表明，血漿miRNA在早期乳腺癌中表達(dá)顯著上調(diào)。FAHIM等[25]研究表明，miRNA簇在炎癥性乳腺癌(IBC)中有1種miRNA表達(dá)顯著上調(diào)，其他3種miRNA表達(dá)顯著下調(diào)。HU等[26]研究表明，干擾miRNA-155能促進(jìn)TNBC細(xì)胞凋亡。LEE等[27]研究表明，miRNA-496在TNBC標(biāo)本中表達(dá)下調(diào)，與早期TNBC患者更高的OS相關(guān)。YANG等[28]研究表明，TNBC組中miRNA-21的表達(dá)水平顯著高于其他乳腺癌亞組和正常組。BAR等[29]研究表明，miRNA-210在TNBC癌細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中均呈高表達(dá)。ANDRADE等[30]研究表明，4種miRNA可作為T(mén)NBC的預(yù)后預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物。CROSET等[31]研究表明，miRNA-30家族成員能降低乳腺癌細(xì)胞侵襲能力，可能是防治TNBC轉(zhuǎn)移的有效手段。因此進(jìn)行大樣本數(shù)據(jù)分析TNBC中miRNA基因譜的表達(dá)具有重要意義。為此，本研究主要探索miRNA在TNBC診斷中的應(yīng)用，為開(kāi)展miRNA檢測(cè)診斷TNBC提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)支持。

從表1可以看出，當(dāng)運(yùn)用單個(gè)miRNA輔助診斷TNBC時(shí)，miR-155和miR-221具有較高的靈敏度，miR-3182和miR-221具有較高的特異度。miR-21,miR-221,miR-210聯(lián)合檢測(cè)均具有較高的靈敏度和特異度，miRNAs合并效應(yīng)量的AUC可達(dá)到0.945 8。由于上述研究的樣本量較少，因此在鑒別TNBC和NTNBC及健康人群時(shí)，以上miRNA的運(yùn)用僅供參考，在實(shí)際臨床應(yīng)用前仍需通過(guò)檢測(cè)大量樣本對(duì)其診斷效能進(jìn)行驗(yàn)證。以上綜合評(píng)價(jià)表明miRNA檢測(cè)對(duì)于TNBC的輔助診斷具有重要的意義和臨床價(jià)值，或許適合作為T(mén)NBC早期診斷的標(biāo)志物。

為提高本次研究的可信度和降低研究風(fēng)險(xiǎn)，本次研究收集的文獻(xiàn)比較全面，收集標(biāo)準(zhǔn)明確，但仍然存在不足之處：(1)僅納入公開(kāi)發(fā)表的文獻(xiàn)，未納入灰色文獻(xiàn)；(2)由于語(yǔ)言限制，本次研究?jī)H分析了中英文文獻(xiàn)；(3)沒(méi)有納入無(wú)法計(jì)算或無(wú)法通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算獲得所需研究數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)；(4)沒(méi)有納入靈敏度或特異度計(jì)算結(jié)果不準(zhǔn)確的文獻(xiàn)。

綜上所述，miRNA檢測(cè)對(duì)TNBC的早期診斷具有重要的意義和臨床應(yīng)用價(jià)值，能為T(mén)NBC早期診斷選擇較好的標(biāo)志物提供參考依據(jù)。然而，在實(shí)際應(yīng)用前仍需大量的臨床樣本研究來(lái)驗(yàn)證其診斷效能。