柏蛇濕疹膏提取液抗氧化活性的研究

朱雨晴 俞彩霞 朱杰 金姬 周文燦

【摘 要】目的：以柏蛇濕疹膏提取液，并對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行驗(yàn)證。方法：柏蛇濕疹提取液測(cè)定清除ABTS+·和超氧自由基的活性，驗(yàn)證其抗氧化能力。結(jié)果：柏蛇濕疹膏提取液具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，其抗氧化能力低于Vc，略優(yōu)于鹽酸小柴堿單劑。結(jié)論：證實(shí)柏蛇濕疹膏具有一定的體外抗氧化活性。

【關(guān)鍵詞】中藥膏方，柏蛇濕疹膏，抗氧化活性

Study on antioxidant activity of extract of cypress snake eczema ointment

Zhu Yuqing， Yu Caixia， Zhu Jie， Jin Ji， Zhou Wencan

Hangzhou Fuyang maternal and child health care hospital， Hangzhou， Zhejiang 311400， China

【Abstract】Objective： to take the extract of cypress snake eczema ointment and verify its antioxidant activity. Methods： the scavenging activities of ABTS +· and superoxide free radicals were measured to verify its antioxidant ability. Results： the extract of Baishe eczema ointment had strong antioxidant activity in vitro. Its antioxidant capacity was lower than Vc and slightly better than that of xiaochaine hydrochloride. Conclusion： it is confirmed that Baishe eczema ointment has certain antioxidant activity in vitro.

【Key？Words】Traditional Chinese medicine ointment， cypress snake eczema ointment， antioxidant activity

根據(jù)我院皮膚科臨床治療的數(shù)據(jù)分析、療效結(jié)果，中藥濕疹方劑柏蛇濕疹膏，是基礎(chǔ)源于我院皮膚科治療濕疹的經(jīng)典中藥處方，由黃柏、蛇床子、馬齒莧、金銀花四味中藥組成。其臨床治療效果明確，特別是在治療兒童濕疹方面，安全性更高，療效也更加顯著。其中黃柏（Cortex Phellodendri）為蕓香科植物黃皮樹以及黃檗的干燥樹皮[1]，生物堿類為其主要有效成分，以小檗堿（Berberine）含量最高[2]。探討柏蛇濕疹膏提取液體外抗氧化活性，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1.1 儀器

Sartorius BD 211D十萬分之一電子平（塞多利斯）；Sartorius BS 110S萬分之一電子天平（塞多利斯）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生），SHZ-D（Ⅲ）型循環(huán)水真空泵（邦西儀器科技公司）。

1.2 材料與試劑

柏蛇濕疹膏提取液，由我院藥學(xué)部制備（處方由等量的黃柏、蛇床子、馬齒莧、金銀花組成），鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定院，含量測(cè)定用，批號(hào)：0726-201908）。磷酸溶液，甲醇，無水乙醇，抗壞血酸，ABTS，過硫酸鉀，鄰苯三酚，氯化亞鐵，鐵氰化鉀，Tris溶液，鹽酸等均購自華東醫(yī)藥股份有限公司。

2.1 ABTS自由基清除能力測(cè)定

ABTS+·清除率測(cè)定方法參照Li[3]等，稍作改進(jìn)，流程見圖1。設(shè)置組別：陽性對(duì)照組、小檗堿組和提取液組，分別對(duì)應(yīng)加入5個(gè)濃度梯度的Vc、鹽酸小檗堿和柏蛇濕疹膏提取液。設(shè)置平行實(shí)驗(yàn)3次。

計(jì)算公式：清除率（%）=[A0-A/A0]×100%

A734nm可用于測(cè)定ABTS+·濃度，A734nm數(shù)值減小的幅度可用于反映清除能力的強(qiáng)弱，減小幅度越大，則表示總抗氧化的能力越強(qiáng)。Vc為常用的抗氧化劑，對(duì)細(xì)胞新陳代謝中形成的有毒自由基和其他活性氧（ROS）[4]具有較好的清除作用。柏蛇濕疹膏提取液對(duì)ABTS自由基清除率見表1?？梢姲厣邼裾罡鄬?duì)ABTS+·較強(qiáng)，但不及Vc，優(yōu)于鹽酸小檗堿。清除能力隨著樣品濃度的增大而增強(qiáng)。

2.2 超氧自由基清除能力測(cè)定

參考Marklund[5]等方法稍作改進(jìn)。設(shè)置組別：陽性對(duì)照組、小檗堿組和提取液組，分別對(duì)應(yīng)加入5個(gè)濃度梯度的Vc、鹽酸小檗堿和柏蛇濕疹膏提取液。具體設(shè)計(jì)如下：

空白組：5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚+4 mL H2O

陽性組：4 mL 0.12 mg/mL Vc+5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚

對(duì)照組1：4 mL柏蛇濕疹膏+6 mL H2O

對(duì)照組2：4 mL鹽酸小檗堿+6 mL H2O

樣品組1：4 mL柏蛇濕疹膏+5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚

樣品組2：4 mL鹽酸小檗堿+5 mL Tris-HCl+1 mL鄰苯三酚

超氧自由基清除率計(jì)算公式：清除率（%）= [1-（A樣品-A對(duì)照）/A空白]×100%

本實(shí)驗(yàn)中的超氧自由基來源于鄰苯三酚自氧化。超氧自由基是活性氧中的一種，大量超氧自由基的產(chǎn)生會(huì)使人體過氧化，進(jìn)而會(huì)引發(fā)多種與氧化有關(guān)的疾病。柏蛇濕疹膏提取液對(duì)超氧自由基清除率見表2?？梢姲厣邼裾罡鄬?duì)超氧自由基具有較強(qiáng)的清除能力，但不及Vc，優(yōu)于鹽酸小檗堿。清除能力隨著樣品濃度的增大而增強(qiáng)。

機(jī)體在新陳代謝中會(huì)產(chǎn)生活性氧自由基簇（ROS），主要包括超氧陰離子自由基（O2-）和羥自由基（·OH）。ROS可調(diào)節(jié)細(xì)胞間的信號(hào)傳遞和細(xì)胞生長等，但一旦過量則將有羥基產(chǎn)生。羥基會(huì)與細(xì)胞的類脂膜、DNA和蛋白等反應(yīng)[6-7]。由ROS介導(dǎo)的細(xì)胞膜脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)，以及DNA和蛋白質(zhì)的氧化損傷與炎癥[8]、衰老[9]、動(dòng)脈粥樣硬化[10]、癌癥和神經(jīng)變性疾病等多種慢性病理狀態(tài)都密切相關(guān)。以上述工藝條件制備的柏蛇濕疹膏，通過驗(yàn)證清除ROS的能力，來初步探討其對(duì)于濕疹治療的作用機(jī)制。

由試驗(yàn)結(jié)果可知，柏蛇濕疹膏具有較強(qiáng)的ABTS+·和超氧自由基清除能力。中藥多靶點(diǎn)間相互協(xié)同作用發(fā)揮藥效，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)柏蛇濕疹膏復(fù)方的抗氧化能力優(yōu)于鹽酸小檗堿單藥。由此可見中藥在協(xié)同作用后藥效得到充分提高，但復(fù)方的作用機(jī)制還有待探討，若能對(duì)柏蛇濕疹膏抗氧化作用機(jī)制進(jìn)行深入研究，將有助于進(jìn)一步開發(fā)其藥用價(jià)值。

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