HPLC法測(cè)定復(fù)方臺(tái)烏片中烏藥醚內(nèi)酯含量

吳龍?jiān)?陳伯成 宋志釗 文志云

1.解放軍第303醫(yī)院，廣西 南寧 530021；2.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022

HPLC法測(cè)定復(fù)方臺(tái)烏片中烏藥醚內(nèi)酯含量

吳龍?jiān)?陳伯成1宋志釗2文志云2

1.解放軍第303醫(yī)院，廣西 南寧 530021；2.廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022

目的：建立復(fù)方臺(tái)烏片中烏藥醚內(nèi)酯的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，以Appollo-C18色譜柱為分離柱，以乙腈-水(48∶52)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm，柱溫為室溫。結(jié)果：烏藥醚內(nèi)酯在0.102～1.224μg范圍內(nèi)，峰面積與其進(jìn)樣量呈良好線性關(guān)系(r=0.9993)，平均回收率為99.6%，RSD為1.71%(n=6)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為控制本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)。

復(fù)方臺(tái)烏片；烏藥醚內(nèi)酯；HPLC

復(fù)方臺(tái)烏片是我院根據(jù)廣西地方民族經(jīng)驗(yàn)方，經(jīng)篩選后進(jìn)行研制的中藥制劑，由九里香、烏藥、兩面針等中藥組成，具有行氣止痛、制酸斂潰之功效，用于慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍。為了控制其質(zhì)量，研究復(fù)方臺(tái)烏片中烏藥指標(biāo)成分烏藥醚內(nèi)酯的含量測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-20ATVP高效液相色譜儀；SPD-20AVP紫外檢測(cè)儀；威瑪龍色譜工作站；Appollo-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；KQ-100VDB雙頻數(shù)控超聲清洗儀。

1.2 材料 烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品(批號(hào)：111562-200603，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；復(fù)方臺(tái)烏片(批號(hào)為：090609、090715、090806)由本院制劑室提供；色譜純乙腈(批號(hào)：LOT084169，費(fèi)舍爾公司)；分析純甲醇(批號(hào)：20090723，廣東光華科技股份有限公司)；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為Appollo-C18(4.6×250mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水(48∶52)；流速為1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm；進(jìn)樣量為10μl；柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按烏藥醚內(nèi)酯計(jì)算應(yīng)不低于3000。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品10.2mg，置25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成408μg/ml的烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品溶液，備用。精密吸取上述對(duì)照品溶液0.5ml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得20.4μg/ml的烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，研細(xì)，混勻，取細(xì)粉約1g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加乙醚50ml，提取4h，濾過(guò)，用適量乙醚沖洗容器及濾渣，合并提取液，回收溶劑，殘?jiān)眉状挤执稳芙猓D(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考察 分別精密吸取上述408μg/ml烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品溶液0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、3.0ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10ul，測(cè)定，計(jì)算，得回歸方程為：Y=1162341X-21662(r=0.9993)。結(jié)果表明：烏藥醚內(nèi)酯在0.102～1.224μg之間的線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別吸取同一供試品溶液(批號(hào)：090609)，連續(xù)進(jìn)樣6次，依次測(cè)定，測(cè)得供試品RSD為0.92%。說(shuō)明精密度較好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)090609)樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，測(cè)定，結(jié)果測(cè)得樣品中烏藥醚內(nèi)酯含量平均值為0.414mg/片，RSD=0.33%(n=6)，說(shuō)明試驗(yàn)的重復(fù)性較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液每隔4h進(jìn)樣一次，連續(xù)5次(即0、4、8、12、16h)測(cè)定，結(jié)果供試品溶液中烏藥醚內(nèi)酯含量的RSD為1.32%，表明供試品溶液在16h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)知含量(0.414mg/片，批號(hào)：090609)的供試品0.25g，精密稱(chēng)定，精密加入408μg/ml烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品溶液0.9ml，揮干溶劑，按供試液制備項(xiàng)下的方法制備。結(jié)果烏藥醚內(nèi)酯平均回收率為99.6%，RSD為1.71%(n=6)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)測(cè)量結(jié)果(n=6)

2.9 樣品測(cè)定 按供試液的制備及檢測(cè)方法，測(cè)定3批復(fù)方臺(tái)烏片中烏藥醚內(nèi)酯含量分別為0.412、0.285、0.330mg/片，結(jié)果見(jiàn)圖1。

3 討論

以乙腈-水為流動(dòng)相，考察多個(gè)比例，最后確定乙腈-水(48∶52)的比例較為適合。采用紫外分光光度計(jì)掃描烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品溶液，結(jié)果烏藥醚內(nèi)酯在235nm處有最大吸收，故最終確定檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中曾經(jīng)考察對(duì)樣品采用超聲提取、索式提取、加熱回流三種不同的提取方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲提取、加熱回流提取提取的烏藥醚內(nèi)酯提出率比較低，索式提取提出較完全。所以擬訂索式提取作為提取方法。對(duì)比甲醇、乙醇、乙醚加甲醇三種不同提取溶劑，結(jié)果用乙醚先除雜，揮干乙醚提取液后再用甲醇溶解提取所得烏藥醚內(nèi)酯含量最高，且雜質(zhì)較少，故采用乙醚加甲醇作為提取溶劑。同時(shí)還考察了不同的提取時(shí)間對(duì)提出率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2h提出率較低，4、6h幾乎一樣，故采用了4h的提取時(shí)間。

廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目(桂科攻11107009-1-9)。

吳龍?jiān)疲敝魅嗡帋?。研究方向：制劑工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

R284.1

A

1007-8517(2015)07-0016-02

2015.01.07)