馬桑葉藥材質(zhì)量標準的初步研究*

陳桃香，吳海燕，黃申琴，胡成剛

(貴州中醫(yī)藥大學藥學院，貴州 貴陽 550025)

馬桑來源于馬?？浦参锺R桑CoriariasinicaMaxim多年生落葉小喬木或灌木植物，又稱醉魚草、扶桑。目前對馬桑的研究相對較少，現(xiàn)有的研究中表明它具有一定的藥用價值，馬桑具有清熱解毒、活血、祛風通絡的功效，葉用于燙傷、黃水瘡、腫毒等，研究表明馬桑的葉中含有的槲皮素Q、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖(Q-Ara)等成分具有抗炎的功效[1]。馬桑資源豐富，廣泛分布于地中海以東至日本、新西蘭、中南美洲。在我國很多省份和地區(qū)皆有馬桑的分布，例如河南、四川、貴州、云南、湖南、陜西、甘肅等[2]。目前，筆者未見國家及地方標準收載馬桑，調(diào)研發(fā)現(xiàn)多數(shù)民族地區(qū)以馬桑葉入藥，為適應中藥材質(zhì)量監(jiān)督管理要求，加強該藥材質(zhì)量的控制，本實驗建立了相關(guān)質(zhì)量標準，為其規(guī)范使用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV-2700紫外可見分光光度計(島津儀器有限公司)；MODEL BX43F 光學顯微鏡(配成像系統(tǒng))；電子天平(型號：FA1004N，廠家：上海菁海儀器有限公司)；電熱鼓風干燥箱(型號：GZX-9070MBE，廠家：上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)；恒溫水浴鍋(型號：HWS-24型，廠家：上海一恒科學儀器有限公司)；暗箱式紫外分析儀(型號：ZF-20D，廠家：鞏義市予華儀器有限責任公司)；真空干燥箱(上海博迅實業(yè)有限公司)；人工智能氣候箱(型號：RQX-400B，廠家：常山市華普達教學儀器公司)；硅膠G薄層板。

1.2 材料

馬桑藥材均采自貴州省，共10個批次(詳細信息見表1)，由貴州中醫(yī)藥大學藥學院標本館胡成剛教授鑒定為馬?？岂R桑屬植物馬桑CoriariasinicaMaxim的葉。槲皮素對照品(批號：C09S8Y43412，廠家：上海源葉生物科技有限公司，純度≥98%)，乙醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、三氯化鋁均為分析醇。

表1 樣品信息表Tab.1 Sample information

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別

本品為橢圓形或闊橢圓形，葉對生，紙質(zhì)至薄革質(zhì)，長3～10 cm，先端急尖，基部圓形，全緣，兩面無毛或沿脈上疏被毛，基出3脈，弧形伸至頂端，在葉面微凹，葉背突起；葉短柄，長1～3 mm，疏被毛，紫色，基部具墊狀突起物。

2.2 顯微鑒別

葉粉末呈黃綠色。顯微鏡下觀察呈黃綠色，可見少量單細胞和多細胞的非腺毛，有各種導管及纖維束，組織細胞及葉碎片少許，表面可見平軸式氣孔，可以作為鑒定馬桑藥材真?zhèn)蔚蔫b定依據(jù)。見圖1。

圖1 馬桑藥材粉末顯微鑒定圖Fig.1 Microscopic identification of the powder ofmedicinal Coriaria sinica leaves

2.3 TLC鑒別

2.3.1 供試品、對照品溶液的制備

精密稱取馬桑藥材粉末5 g，置于250 mL的圓底燒瓶中，加60 mL60%乙醇，加熱回流提取兩次，每次1 h，過濾，合并濾液，即為供試品溶液[3]。另外精密稱取槲皮素對照品5 mg，用60%乙醇溶液制成1 mL含0.5 mg的對照品溶液。

2.3.2 方法

按照2015版《中國藥典》四部通則薄層色譜法(通則0502)[4]，分別吸取槲皮素對照品溶液和馬桑藥材的供試品溶液適量，點于已經(jīng)活化及飽和后的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干后，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，置于365 nm紫外光燈下檢視，在硅膠板上，槲皮素對照品溶液與不同產(chǎn)地的馬桑樣品在相應位置顯示清晰顏色相同的熒光斑點，分離效果及重復性良好，具體見圖2。

圖2 十個產(chǎn)地馬桑葉藥材薄層鑒別圖Fig.2 TLC identification of medicinal Coriaria sinica leaves from 10 producing areas

2.4 檢查與浸出物的測定

按照2015版《中國藥典》中各通則項下的實驗要求，通則0832水分測定法(烘干法)、2302灰分測定法(總灰分和酸不溶性灰分測定法以稀鹽酸測定酸不溶性灰分)、2201浸出物測定法(熱浸法測定醇溶性浸出物，以75%乙醇為溶劑)測定[4]，結(jié)果見表2。

表2 樣品水分、總灰分酸不溶性灰分和浸出物含有測定結(jié)果(%，n=3)Tab.2 Determination results of the contents of moisture，total ash，acid-insoluble ash and extract(%，n=3)

2.5 槲皮素的含量測定

2.5.1 對照品溶液的制備

取槲皮素對照品適量，精密稱定，加60%乙醇溶液制成每1 mL中含3.2 μg槲皮素對照品溶液。

2.5.2 供試品溶液的制備

精密稱取馬桑粉末0.5 g，加60%乙醇超聲0.5 h，冷卻補重，過濾，移取0.1 mL續(xù)濾液置25 mL的容量瓶中，定容，即可得到供試品溶液[5]。

2.5.3 檢測波長選擇

將對照品溶液、供試品溶液分別在400～700 nm波長范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)供試品在274 nm處的吸收峰與對照品在257 nm處吸收峰的峰形相似，與結(jié)合所查文獻資料槲皮素含量測定所選擇波長254 nm及256 nm相比較，選擇257 nm作為馬桑葉中槲皮素含量測定的波長。

2.5.4 線性關(guān)系考察

精密稱取槲皮素標準品2 mg，置于100 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶解，定容至刻度搖勻。分別取2 mL、3 mL、5 mL、10 mL、12 mL、16 mL置于25 mL容量瓶定容至刻度。按照紫外分光光度法(《中國藥典》2015年版四部)，在257 nm的波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標，槲皮素質(zhì)量濃度為橫坐標，得到線性回歸方程為Y=61.631X+0.0867(r=0.9997)，槲皮素質(zhì)量濃度在1.6～12.8 μg/mL范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.5.5 精密度實驗

取“2.5.1”項下制備的槲皮素對照品溶液適量，在紫外分光光度計257 nm波長下連續(xù)測定6次，RSD值為0.34%，儀器精密度良好。

2.5.6 穩(wěn)定性實驗

取“2.5.2”項下供試品溶液分別在10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min內(nèi)測定吸光度，槲皮素含量為0.25%，RSD值為0.25%，表明樣品溶液在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.7 重復性實驗

取馬桑粉末(過二號篩)6份，精密稱定，按照“2.5.2”項下的方法制備供試品，測得槲皮素含量為2.57%，RSD值為2.32%，表明該方法重復性良好。

2.5.8 加樣回收實驗

精密稱取已知槲皮素含量的馬桑粉末6份各0.25g，置于錐形瓶中，分別加入槲皮素對照品0.7 mg，按照上述“2.5.2”項下方法提取，測定其吸光度，計算槲皮素含量及回收率，槲皮素回收率在95.41%～100.33%范圍內(nèi)，平均回收率為97.63%，RSD值小于3%，結(jié)果見表3。

表3 槲皮素回收率結(jié)果(n=6)Tab.3 Quercetin recovery results(n=6)

2.5.9 樣品含量測定

精密稱取各產(chǎn)地馬桑粉末0.5 g，平行3份，按“2.5.2”項下的方法操作，測其吸光度，計算槲皮素含量，實驗結(jié)果表明不同產(chǎn)地的馬桑藥材的2-甲氧基1，4-萘醌的含量差異較大，其中，含量最高的為銅仁松桃采集的樣品，含量為0.35%；含量最低的為花溪區(qū)采集的樣品，含量為0.202%，10個批次樣品平均含量為0.28%，結(jié)果見表4。

表4 不同產(chǎn)地鳳仙花的含量測定(n=3)Tab.4 Content determination of quercetin in medicinal Coriariasinica leaves from different producing areas(n=3)

3 結(jié)論與討論

本次研究分別從定性鑒別、定量測定兩部分對馬桑進行了研究，馬桑藥材比較常見，外觀辨識度較高，因此主要對馬桑粉末進行顯微鑒定，并對10批次的馬桑藥材水分、總灰分、酸不溶性灰分及浸出物進行測定，最終擬定馬桑藥材各檢查指標含有量為水分不超過17.0%，總灰分不超過11.0%，酸不溶性灰分不超過0.72%，醇溶性浸出物不低于33.0%。

在實驗研究中，對薄層展開劑、溫度、濕度等條件進行考察，選擇以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)為展開劑，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，常溫常濕條件下，置于365 nm紫外光燈下檢視。同時，考察了提取溶劑濃度、提取時間、料液比等3個單因素，在單因素考察的基礎上，運用正交實驗設計方法優(yōu)選出馬桑中槲皮素成分提取的最佳提取方法為60%乙醇，料液比為1∶12，提取時間為1 h。根據(jù)文獻報道及紫外掃描顯示，最大吸收波長選擇257 nm作為其檢測波長。