益母草顆粒HPLC指紋圖譜及4個指標(biāo)成分含量研究

朱子聰 邊雨 高陸 宋德庫 佟志軍

中圖分類號 R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2022）05-0586-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.05.13

摘 要 目的 建立益母草顆粒的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜，并對其中鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷4個指標(biāo)成分進(jìn)行含量測定。方法 采用InertsilTM ODS-3色譜柱，以乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）為流動相進(jìn)行梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長為280 nm，柱溫為25 ℃，進(jìn)樣量為5 μL。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》建立10批益母草顆粒的HPLC指紋圖譜并分析其相似度，通過與對照品圖譜比對進(jìn)行共有峰指認(rèn)。使用SPSS 25.0軟件和SIMCA 13.0軟件進(jìn)行聚類分析和主成分分析;同時，采用HPLC法測定益母草顆粒中鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷4個指標(biāo)成分的含量。結(jié)果 建立了10批益母草顆粒的HPLC指紋圖譜，共匹配出16個共有峰，并指認(rèn)出6號峰為鹽酸益母草堿、13號峰為阿魏酸、14號峰為蘆丁、16號峰為金絲桃苷，10批樣品的相似度均大于0.970。通過聚類分析和主成分分析，10批樣品均被分為4類，分類結(jié)果一致。樣品中鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷的含量分別為122.10～138.82、9.33～10.45、14.12～18.95、5.87～8.06 μg/g。結(jié)論 建立的益母草顆粒HPLC指紋圖譜及4個指標(biāo)成分含量測定方法簡便易行、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可為益母草顆粒的質(zhì)量評價提供參考。

關(guān)鍵詞 益母草顆粒;指紋圖譜;聚類分析;主成分分析;含量測定;鹽酸益母草堿;阿魏酸;蘆丁;金絲桃苷

Study on HPLC fingerprint of Leonurus japonicus granules and the contents of 4 index components

ZHU Zicong1，BIAN Yu2，GAO Lu2，SONG Deku3，TONG Zhijun3（1. College of Pharmacy， Changchun University of TCM， Changchun 130117， China; 2. Jilin Modern TCM Engineering and Research Center Co.， Ltd.， Changchun 130033， China; 3. Jilin Tianlitai Pharmaceutical Co.， Ltd.， Jilin Baishan 134400， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To establish HPLC fingerprint of Leonurus japonicus granules， and to determine the contents of 4 index components such as leonurine hydrochloride， ferulic acid， rutin， hyperoside. METHODS The determination was performed on InertsilTM ODS-3 column with mobile phase consisted of acetonitrile （A）-0.1% formic acid solution （B） in the form of gradient elution; the flow rate was 1.0 mL/min， the detection wavelength was 280 nm， the column temperature was 25 ℃， and the sample size was 5 μL. Similarity Evaluation System of Chromatogram Fingerprint of TCM （2012 edition） was used for establishing the HPLC fingerprints of 10 batches of L. japonicus granules and analyzing their similarities. By comparing with HPLC fingerprints of reference substance， the common peaks were identified. SPSS 25.0 and SIMCA 13.0 software were used for cluster analysis and principal component analysis; the above HPLC method was used for the content determination of 4 index components in L. japonicus granules such as leonurine hydrochloride， ferulic acid， rutin， hyperoside. RESULTS HPLC fingerprints of 10 batches of L. japonicus granules were established， and 16 common peaks were matched， and 4 peaks identified were leonurine hydrochloride （peak 6） ， ferulic acid （peak 13）， rutin （peak 14）， hyperoside （peak 16）; the similarities of 10 batches of samples were all higher than 0.970. The 10 batches of samples could be divided into four categories by cluster analysis and principal component analysis; the classification results were consistent. The contents of leonurine hydrochloride， ferulic acid， rutin and hyperoside were 122.10-138.82 μg/g， 9.33-10.45 μg/g， 14.12-18.95 μg/g， 5.87-8.06 μg/g， respectively. CONCLUSIONS Established HPLC fingerprint of L. japonicus granules and the method for the content determination of 4 index components are simple and easy to operate， and have high precision and good repeatability， which provide reference for the quality evaluation of L. japonicus granules.

KEYWORDS? ?Leonurus japonicus granules; fingerprint; cluster analysis; principle component analysis; content determination; leonurine hydrochloride; ferulic acid; rutin; hyperoside

益母草顆粒為2020年版《中國藥典》（一部）收載品種，由益母草單味中藥組成，具有活血調(diào)經(jīng)的功能，臨床上常用于治療血瘀所導(dǎo)致的月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后惡露不絕等癥[1]。現(xiàn)代研究表明，益母草中主要含有生物堿類、黃酮類、苯丙素類、二萜類、多糖等化學(xué)成分[2-5]。其中，鹽酸益母草堿為生物堿類成分，具有抗血小板聚集的作用;蘆丁、金絲桃苷為黃酮類成分，具有抗心肌缺血、促進(jìn)心肌收縮、抗菌及抗氧化等作用[6];阿魏酸為苯丙素類成分，具有抗氧化、降血脂、抗血栓及抗心肌缺血等作用[7]。近年來的研究主要集中于益母草顆粒中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿的含量測定，未見其他指標(biāo)成分的含量測定和指紋圖譜研究[8-10]，難以科學(xué)、全面地對該藥的質(zhì)量進(jìn)行控制。而指紋圖譜及多指標(biāo)成分檢測能夠提供豐富的化學(xué)成分信息，全面呈現(xiàn)藥材及其制劑的質(zhì)量優(yōu)劣，從而保證其內(nèi)在品質(zhì)的穩(wěn)定性和均一性[11-12]。鑒于此，本研究采用高效液相色譜（HPLC）法建立10批益母草顆粒的指紋圖譜，并結(jié)合聚類分析和主成分分析（principal component analysis，PCA）2種化學(xué)模式識別分析方法，同時通過建立HPLC法測定其中鹽酸益母草堿、蘆丁、金絲桃苷和阿魏酸4個指標(biāo)成分的含量，旨在為全面評價和控制益母草顆粒的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

Ultimate 3000型HPLC儀（配備四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器和Chromeleon 7色譜工作站）購買于美國Thermo Fisher Scientific公司;MS205DU型電子天平購買于梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;HH-S114型恒溫水浴鍋購買于金壇市華龍實(shí)驗(yàn)儀器廠;SD25-12DT型超聲清洗機(jī)購買于寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 藥品與試劑

10批益母草顆粒（記為S1～S10，批號分別為180201、180202、180401、180601、180602、180603、180604、190301、190302、190303，規(guī)格為每袋15 g）均由吉林天力泰藥業(yè)有限公司提供;鹽酸益母草堿（批號111823-201704，純度94.3%）、阿魏酸（批號110773-201614，純度99%）、蘆?。ㄅ?00080-201409，純度91.9%）、金絲桃苷（批號111521-201507，純度94.3%）對照品均購買于中國食品藥品檢定研究院;甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用InertsilTM ODS-3色譜柱（250 mm×4.6 mm，5? ? μm），以乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）為流動相進(jìn)行梯度洗脫（0～20 min，5%A→15%A;20～40 min，15%A→20%A;40～65 min，20%A），流速為1.0 mL/min，柱溫為25 ℃，檢測波長為280 nm，進(jìn)樣量為5 μL。

2.2 混合對照品溶液的制備

稱取鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷對照品各適量，用50%甲醇溶解并稀釋制成質(zhì)量濃度依次為276、164、236、272 μg/mL的單一對照品溶液。精密量取上述單一對照品溶液各適量，置于同一10 mL量瓶中，用50%甲醇定容，搖勻，制得鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷質(zhì)量濃度依次為55、10、100、20 μg/mL的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取益母草顆粒4.0 g，精密稱定，置于150 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密封，稱定質(zhì)量后超聲（功率600 W，頻率40 kHz）處理40 min，冷卻至室溫，再次稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，收集續(xù)濾液，即得。

2.4 指紋圖譜的建立及分析

2.4.1 精密度試驗(yàn) 取益母草顆粒（S6）適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄色譜圖，以鹽酸益母草堿為參照峰（S）計(jì)算各共有峰的相對峰面積和相對保留時間。結(jié)果，各共有峰相對峰面積和相對保留時間的RSD均小于1.00%（n=6），表明該儀器的精密度良好。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取益母草顆粒（S6）適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在室溫（10～30 ℃）下分別放置0、2、4、8、12、18、24 h，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以鹽酸益母草堿為參照峰（S）計(jì)算各共有峰的相對峰面積和相對保留時間。結(jié)果，各共有峰相對峰面積和相對保留時間的RSD均小于2.00%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取益母草顆粒（S6）適量，共稱取6份，分別按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以鹽酸益母草堿為參照峰（S）計(jì)算各共有峰的相對峰面積和相對保留時間。結(jié)果，各共有峰相對峰面積和相對保留時間的RSD均小于2.00%（n=6），表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.4 指紋圖譜的建立及共有峰的指認(rèn) 取10批益母草顆粒各適量，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取上述供試品溶液和“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。將10批益母草顆粒的色譜圖導(dǎo)入《中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》中，以樣品S6的色譜圖為參照圖譜，設(shè)置時間窗寬度為0.10 min，以全譜峰形式進(jìn)行自動匹配生成疊加指紋圖譜，并采用中位數(shù)法生成對照指紋圖譜R。通過與混合對照品溶液圖譜比對，對共有峰進(jìn)行指認(rèn)。結(jié)果顯示，10批益母草顆粒的色譜圖中共匹配出16個共有峰。通過與混合對照品溶液圖譜比對，指認(rèn)出其中4個共有峰，依次為鹽酸益母草堿（6號峰）、阿魏酸（13號峰）、蘆?。?4號峰）、金絲桃苷（16號峰）。10批益母草顆粒的HPLC疊加指紋圖譜和對照指紋圖譜R見圖1，混合對照品溶液的HPLC圖見圖2。

2.4.5 相似度分析 以對照指紋圖譜R為參照圖譜，通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）》軟件分析10批益母草顆粒的相似度。結(jié)果顯示，10批益母草顆粒的相似度均大于0.970，表明不同批次益母草顆粒的相似度良好、質(zhì)量較穩(wěn)定，結(jié)果見表1。

2.5 聚類分析

以10批益母草顆粒的16個共有峰峰面積為變量，通過SPSS 25.0軟件運(yùn)用組間對比法對10批益母草顆粒進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，以平方歐氏距離為標(biāo)尺計(jì)算樣品的相似程度。結(jié)果顯示，當(dāng)平方歐氏距離為10時，10批益母草顆粒樣品可被劃分為4類：第1類為 S4～S6、S8～S10;第2類為S1、S2;第3類為S3;第4類為S7。10批益母草顆粒的聚類分析樹狀圖見圖3。

2.6 PCA

以10批益母草顆粒的16個共有峰峰面積為變量，采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行PCA，PCA得分圖見圖4。模型建立結(jié)果顯示，本研究提取出3個主成分：第1主成分的特征值為9.630、方差貢獻(xiàn)率為60.185%，第2主成分的特征值為3.026、方差貢獻(xiàn)率為18.912%，第3主成分的特征值為1.903、方差貢獻(xiàn)率為11.891%。3個主成分的累計(jì)方差總貢獻(xiàn)率為90.987%，表明3個主成分的提取涵蓋了樣品共有成分的大部分信息，代表性良好，可用于益母草顆粒的質(zhì)量評價。PCA結(jié)果顯示，10批樣品被劃分為4類：第1類為S4～S6、S8～S10;第2類為S1、S2;第3類為S3;第4類為S7。該結(jié)果與聚類分析結(jié)果一致，表明不同批次的樣品可以被區(qū)分開。

2.7 益母草顆粒中4個指標(biāo)成分的含量測定

2.7.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液、“2.3”項(xiàng)下供試品溶液（S6）及空白溶液（50%甲醇）各適量，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖（圖5）。結(jié)果顯示，空白溶液對測定無干擾，4個待測成分的色譜峰均能達(dá)到基線分離，且與相鄰色譜峰間的分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于3 000，說明本方法的系統(tǒng)適用性較好。

2.7.2 線性關(guān)系考察 分別取鹽酸益母草堿對照品溶液（質(zhì)量濃度分別為12.01、18.99、30.88、48.99、78.00、124.81 μg/mL，以50%甲醇制得，下同）、阿魏酸對照品溶液（質(zhì)量濃度分別為1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 μg/mL）、蘆丁對照品溶液（質(zhì)量濃度分別為1.16、2.08、4.04、6.04、8.00、14.99 μg/mL）、金絲桃苷對照品溶液（質(zhì)量濃度分別為1.01、1.99、4.00、6.01、8.00、11.99 μg/mL），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以各對照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X，μg/mL）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制回歸曲線，并求出回歸方程和相關(guān)系數(shù)（r）。結(jié)果，4個待測成分在其相應(yīng)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與其峰面積均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r均大于0.999 0），結(jié)果見表2。

2.7.3 定量限與檢測限 精密吸取“2.2”項(xiàng)下混合對照品溶液適量，用50%甲醇逐級稀釋后，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1對應(yīng)的質(zhì)量濃度分別作為定量限和檢測限。結(jié)果顯示，鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷的定量限依次為24.54、4.00、8.08、8.33 ng/mL，檢測限依次為6.14、1.00、2.01、2.08 ng/mL。

2.7.4 精密度試驗(yàn) 稱取益母草顆粒樣品（S6）適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD值。結(jié)果顯示，鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷峰面積的RSD依次為1.99%、1.14%、1.63%、1.81%（n=6），表明該儀器的精密度較好。

2.7.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱取益母草顆粒樣品（S6）適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在室溫（10～30 ℃）下分別放置0、2、4、8、12、18、24 h，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD值。結(jié)果顯示，鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷峰面積的RSD依次為1.88%、1.54%、0.86%、1.95%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.7.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取益母草顆粒樣品（S6）適量，共稱取6份，分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并以外標(biāo)法計(jì)算樣品中鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷的含量。結(jié)果顯示，4個指標(biāo)成分含量的RSD依次為1.94%、0.78%、1.40%、0.63%（n=6），表明本方法的重復(fù)性較好。

2.7.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的益母草顆粒樣品（S6）2.0 g，共稱取6份，置于10 mL量瓶中，分別按已知成分含量相同的量加入相應(yīng)對照品溶液，然后按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算樣品中鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷的加樣回收率。結(jié)果顯示，4個指標(biāo)成分的平均加樣回收率依次為100.00%、99.29%、97.65%、100.46%，RSD依次為1.98%、1.57%、1.48%、1.45%（n=6），表明本方法的準(zhǔn)確度較好，結(jié)果見表3。

2.7.8 樣品含量測定 分別稱取10批益母草顆粒樣品4.0 g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并以外標(biāo)法計(jì)算樣品中鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷的含量。結(jié)果顯示，10批益母草顆粒中4個指標(biāo)成分的含量依次為122.10～138.82、9.33～10.45、14.12～18.95、5.87～8.06 μg/g，平均含量依次為126.81、9.96、16.96、7.15 μg/g，不同批次樣品間4個指標(biāo)成分的含量變化較小、樣品質(zhì)量較穩(wěn)定，詳見表4。

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法的確定

在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中，筆者考察了甲醇和乙醇（體積分?jǐn)?shù)均為100%）2種提取溶劑對益母草顆粒中有效成分提取效果的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)以甲醇為提取溶劑時，圖譜中色譜峰數(shù)量較多;而以乙醇為提取溶劑時，圖譜中色譜峰數(shù)量較少且峰形較差。因此，本研究最終確定以甲醇為提取溶劑。此外，筆者還依次考察了不同提取方法（超聲提取法和加熱回流提取法）、不同提取時間（20、40、60 min）、不同體積分?jǐn)?shù)的提取溶劑（30%、50%、70%、100%甲醇）、不同提取溶劑用量（10、25、50 mL）對益母草顆粒中有效成分提取效果的影響。結(jié)果，用25 mL 50%甲醇溶解并稀釋樣品，然后在功率600 W、頻率40 kHz的條件下超聲提取40 min所得提取物的圖譜中色譜峰數(shù)量較多且分離效果較好，故最終確定將上述條件作為本研究中供試品溶液的制備方法。

3.2 色譜條件的選擇

在色譜條件的優(yōu)化過程中，筆者前期采用二極管陣列檢測器在190～400 nm波長范圍內(nèi)檢視供試品溶液的光譜圖，對不同檢測波長下樣品色譜峰的數(shù)量、峰形及基線穩(wěn)定性等進(jìn)行比較分析。結(jié)果，在波長280 nm處，色譜信息豐富、峰形較好，且基線穩(wěn)定，能夠反映樣品中化學(xué)組分的全貌，故本研究最終選擇280 nm作為檢測波長。同時，筆者比較了不同流動相體系（甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液和乙腈-水）、不同生產(chǎn)廠家和品牌的色譜柱（InertsilTM ODS-3柱、Welch XB-C18柱和Agilent ZORBAX SB-Aq柱）、不同流速（0.8、1.0、1.2? mL/min）、不同柱溫（25、30、35 ℃）以及不同進(jìn)樣量（5、10 μL）對各成分分離效果的影響。結(jié)果顯示，當(dāng)流動相為乙腈-0.1%甲酸溶液、色譜柱為InertsilTM ODS-3、流速為1.0 mL/min、柱溫為25 ℃和進(jìn)樣量為5 μL時，所得圖譜中各色譜峰間的分離度均相對較好、基線平穩(wěn)，且色譜峰數(shù)量較多，故本研究最終選擇上述色譜條件開展實(shí)驗(yàn)。

3.3 聚類分析與PCA結(jié)果分析

本研究利用聚類分析與PCA相結(jié)合的方法，對不同批次益母草顆粒樣品進(jìn)行了聚類鑒別和判別分析。聚類分析是通過各觀察樣品或變量之間親疏關(guān)系統(tǒng)計(jì)量（距離）的分析比較，可將性質(zhì)相近的事物歸在同一類，而將性質(zhì)差別比較大的事物歸在不同類，側(cè)重于找出樣品或變量之間的共性[13-14]。PCA是在基本保留原始變量信息的前提下，利用降維技術(shù)將原多個具有一定相關(guān)性的指標(biāo)組合成少數(shù)幾個相互無關(guān)的綜合指標(biāo)，側(cè)重于全面反映多個原始指標(biāo)所提供的信息[11-12]。在聚類分析中，10 批益母草顆粒樣品被聚為4大類：第1類為 S4～S6、S8～S10，第2類為S1、S2，第3類為S3，第4類為S7。同時，在PCA中，3個主成分的累計(jì)方差總貢獻(xiàn)率為90.987%，同樣聚為4大類，與PCA結(jié)果一致。

3.4 指紋圖譜及含量測定結(jié)果分析

鹽酸益母草堿是益母草的主要有效成分，在指紋圖譜中，其色譜峰響應(yīng)值較大、分離良好，且其平均峰面積約占共有峰總峰面積的13%，保留時間較為穩(wěn)定且適中，峰純度高，故本研究選擇其作為益母草顆粒指紋圖譜的參照峰（S）。本研究建立了10批益母草顆粒樣品的指紋圖譜，通過分析發(fā)現(xiàn)，10批樣品指紋圖譜相似度均在0.970以上，表明同一廠家、不同批次益母草顆粒樣品的化學(xué)成分組成基本相同。經(jīng)全譜峰模式自動匹配后共生成16個共有峰，并通過與混合對照品溶液色譜圖比對，指認(rèn)出了其中4個成分，依次為鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁和金絲桃苷。為進(jìn)一步比較不同批次益母草顆粒之間的質(zhì)量差異，本研究選擇指認(rèn)出的4種成分建立了含量測定方法。含量測定結(jié)果顯示，鹽酸益母草堿在益母草顆粒中的含量相對較高;但總體而言，不同批次益母草顆粒樣品中這4個指標(biāo)成分的含量差異性不明顯，產(chǎn)品批間穩(wěn)定性較好，表明企業(yè)在藥材選擇及生產(chǎn)工藝上進(jìn)行了嚴(yán)格控制，從而保證了產(chǎn)品整體質(zhì)量的穩(wěn)定性和均一性。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道，鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷4個成分均具有抗心肌缺血的活性[15-18]，而益母草顆粒具有活血調(diào)經(jīng)的功效，推測這4個成分可能與該藥活血調(diào)經(jīng)作用密切相關(guān)，可為下一步的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考。

綜上所述，本研究成功建立了益母草顆粒的HPLC指紋圖譜，并測定了其中鹽酸益母草堿、阿魏酸、蘆丁、金絲桃苷4個指標(biāo)成分的含量;所建方法簡便易行、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可用于益母草顆粒的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S]. 2020年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：1518.

[ 2 ] 李錕，王樹真，李樂，等.益母草的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].廣東化工，2014，41（2）：54-55.

[ 3 ] 張雪，宋玉琴，楊雨婷，等.益母草活血化瘀化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].藥物評價研究，2015，38（2）：214- 217.

[ 4 ] 熊亮，彭成.基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）的基本條件研究益母草和趕黃草的Q-Marker[J].中草藥，2016，47（13）：2212-2220.

[ 5 ] 喬晶晶，吳啟南，薛敏，等.益母草化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2018，49（23）：5691-5704.

[ 6 ] 李聘，陸治名，張百霞.益母草中黃酮類成分的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究與教育，2017，34（4）：63-68.

[ 7 ] 李建芳.益母草藥學(xué)研究進(jìn)展[J].內(nèi)科，2013，8（5）：533- 536.

[ 8 ] 王寧莉，張書華，王麗霞.益母草顆粒中鹽酸水蘇堿與鹽酸益母草堿的含量測定[J].延安大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2015，13（2）：4-6，10.

[ 9 ] 李偉，張建軍，王小花，等. HPLC-ELSD測定益母草顆粒中鹽酸水蘇堿的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2018，24（23）：100-103.

[10] 伍濤，肖裕章，李成洪，等. HPLC-DAD法測定益母草顆粒中鹽酸水蘇堿含量的方法[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2020，55（3）：23-28，37.

[11] 劉東方，趙麗娜，李銀峰，等.中藥指紋圖譜技術(shù)的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J].中草藥，2016，47（22）：4085-4094.

[12] 馬麗娜，張巖，陶遵威.色譜分析技術(shù)在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用[J].藥物評價研究，2012，35（1）：58-62.

[13] 李新蕊.主成分分析、因子分析、聚類分析的比較與應(yīng)用[J].山東教育學(xué)院學(xué)報，2007（6）：23-26.

[14] 孫立麗，王萌，任曉亮.化學(xué)模式識別方法在中藥質(zhì)量控制研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中草藥，2017，48（20）：4339- 4345.

[15] 熊鶯，楊解人.益母草堿對大鼠急性心肌缺血損傷心肌肌鈣蛋白T的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（2）：21-24.

[16] 楊家榮，張密霞，常亮堂，等.川芎嗪、阿魏酸及其配伍對心肌缺血再灌注模型大鼠的保護(hù)作用及對黏附分子的影響[J].中草藥，2008，39（7）：1054-1056.

[17] 趙一燦，張麗華，趙文，等.蘆丁對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].鄭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2017，52（5）：562-566.

[18] 李國棟，薛濤，黃學(xué)鋒.金絲桃苷對心肌缺血再灌注損傷大鼠的心臟保護(hù)作用[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2020，36（22）：3721-3724.

（收稿日期：2021-10-05 修回日期：2021-12-27）

（編輯：林 靜）

2588501705217