IELISA檢測(cè)IgG在布魯氏菌病監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用

姜勇波 高曉麗 黃明 曹建濱 楊夢(mèng)莉 李曉紅

布魯氏菌病（brucellosis）簡(jiǎn)稱布病，屬于一種人畜共患疾病[1]，發(fā)病后患者將表現(xiàn)出多汗、肝脾腫大、發(fā)熱、關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量及身心健康。研究表明[2]，布魯氏菌病主要發(fā)病原因?yàn)椴剪斒蠗U菌感染，因此提示積極采取有效措施提高布魯氏菌抗體檢出率對(duì)及時(shí)診斷病情具有積極意義?；诖耍恼逻x取于2015年3月—2017年10月布魯氏菌病監(jiān)測(cè)工作中，以養(yǎng)殖牛羊和屠宰為職業(yè)，伴有發(fā)熱、乏力、關(guān)節(jié)痛等布魯菌病疑似癥狀人員，確診的90例布魯氏菌病患者作為本次研究對(duì)象。探討IELISA檢測(cè)IgG應(yīng)用于布魯氏菌病監(jiān)測(cè)工作中的具體價(jià)值，以期為提高此病正確檢出率提供可靠依據(jù)，以達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早防治的目的，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取于2015年3月—2017年10月布魯氏菌病監(jiān)測(cè)工作中確診的90例布魯氏菌病患者作為本次研究對(duì)象，90例患者均經(jīng)臨床檢查確診布魯氏菌病，其中男52例、女38例，年齡19～71歲、平均（45.61±0.17）歲。

布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]：（1）具有布魯氏菌病感染體接觸史；（2）發(fā)生多汗、發(fā)熱、骨關(guān)節(jié)疼痛、乏力、肌肉疼痛等布魯氏菌病相關(guān)癥狀；（3）虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）陽性；（4）試管凝集試驗(yàn)（SAT）1：100（++）及以上。

樣本納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）確診發(fā)生布魯氏菌??；（2）對(duì)本次研究所需IELISA檢測(cè)IgG具有良好耐受性；（3）對(duì)本次研究?jī)?nèi)容完全知情；（4）本次研究前自愿、獨(dú)立簽署知情同意協(xié)議。

樣本排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他細(xì)菌感染性疾??；（2）對(duì)本次研究中所需IELISA檢測(cè)IgG無法耐受；（3）拒不簽署知情同意協(xié)議；（4）妊娠、產(chǎn)褥、哺乳等特殊生理時(shí)期女性布魯氏菌病患者。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 90例布魯氏菌病患者均接受IELISA檢測(cè)IgG，指定高年資、高職稱實(shí)驗(yàn)室醫(yī)師嚴(yán)格按照儀器試劑相關(guān)規(guī)定完成操作。記錄90例布魯氏菌病患者IELISA檢測(cè)IgG結(jié)果，將所得數(shù)據(jù)輸入統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件并與確診結(jié)果做對(duì)比分析。

1.2.2 IELISA方法 采集待檢者血清作為本次檢測(cè)樣本，微量板孔需經(jīng)抗原包被，制作固相載體后將血清于板孔處加入，固相載體中存在的抗原與其所含抗體特異性結(jié)合并形成免疫復(fù)合物。將多余物質(zhì)去除后加入IgG抗體（經(jīng)酶標(biāo)記），使之與前述免疫復(fù)合物反應(yīng)后行洗板處理。將多余結(jié)合物除去并將底物加入，此時(shí)可見反應(yīng)后生成有顏色產(chǎn)物，于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)量光密度值（optical density，OD），IgG與OD450值呈正相關(guān)（正比），利用繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方法得出標(biāo)本中IgG水平，顏色強(qiáng)度、特異性抗體含量表現(xiàn)為正相關(guān)性（正比）。IgG值陰性標(biāo)準(zhǔn)為20 U/mL及以下，即IgG值檢測(cè)結(jié)果在20 U/mL以上則提示此標(biāo)本為陽性。

2 結(jié)果

90例布魯氏菌病患者均順利完成IELISA檢測(cè)IgG，本次研究未見因故中斷、自愿退出等異常情況。經(jīng)分析可知，90例布魯氏菌病患者經(jīng)IELISA檢測(cè)IgG陽性人數(shù)86例、陽性率為95.56%。

3 討論

布魯氏菌病是一種傳染變態(tài)反應(yīng)性人畜共患慢性傳染病，既往由于牛羊等動(dòng)物中布魯氏菌病發(fā)病率較高，因此已引起畜牧獸醫(yī)行業(yè)高度關(guān)注[4]。布魯氏桿菌的感染途徑包括消化道、皮膚黏膜等，人類從事擠奶、肉類加工、接觸皮毛等途徑均可感染布魯氏桿菌[5]。由于近年來食品市場(chǎng)對(duì)牛羊肉、奶制品等需求量增加，人感染布魯氏桿菌幾率隨之上升，而病情嚴(yán)重者不僅喪失勞動(dòng)能力，甚至導(dǎo)致終身殘疾，對(duì)家庭及社會(huì)造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)[6]。因此提示，積極采取有效措施加強(qiáng)布魯氏菌病監(jiān)測(cè)工作已成為現(xiàn)階段相關(guān)醫(yī)務(wù)人員共同關(guān)注的重點(diǎn)。

細(xì)菌分離培養(yǎng)是現(xiàn)階段臨床用于診斷布魯氏菌病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但此法存在培養(yǎng)條件苛刻、采樣難度大、實(shí)驗(yàn)人員感染風(fēng)險(xiǎn)高等弊端[7]，且對(duì)慢性布魯氏菌病患者經(jīng)此法檢出率較低，應(yīng)引起相關(guān)醫(yī)護(hù)人員注意。傳統(tǒng)布魯氏菌抗體檢測(cè)技術(shù)包括虎紅平板凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）、試管凝集試驗(yàn)等[8]，但由于SAT、RBPT存在一定的假陰性、假陽性情況[9]，而CFT操作復(fù)雜、對(duì)操作者要求較高且無法檢測(cè)綿羊種布魯氏菌[10]，因此上述方法均不利于臨床推廣。

IELISA是目前用于人間布魯氏菌病監(jiān)測(cè)工作的檢測(cè)方法之一，利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板表面將特定抗體/抗原吸附，從而使聚苯乙烯微量反應(yīng)板表面局部發(fā)生用酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)，將流離成分利用洗滌法洗滌并檢測(cè)獲得結(jié)果[11]。IELISA兼具放射免疫實(shí)驗(yàn)、熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)，結(jié)果可同時(shí)用酶標(biāo)儀測(cè)定或肉眼直接觀察，具有安全可靠、特異性及敏感性均較高等特點(diǎn)。文章對(duì)90例布魯氏菌病患者分析可知，其經(jīng)IELISA檢測(cè)IgG陽性率為95.56%，此結(jié)論與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究結(jié)果相符。布魯氏菌病以男性發(fā)病率較高，高危職業(yè)涉及畜牧養(yǎng)殖業(yè)、獸醫(yī)、農(nóng)牧民等[12]，IELISA檢測(cè)IgG對(duì)人間布魯氏菌病的監(jiān)測(cè)工作具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

綜上，IELISA 檢測(cè)有較高的準(zhǔn)確率，方法簡(jiǎn)便、快速、自動(dòng)化，適合于大樣本篩查和布魯氏菌病的監(jiān)測(cè)工作。但應(yīng)注意的是，IELISA檢測(cè)IgG步驟復(fù)雜，不方便實(shí)際工作中針對(duì)少量標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。此外，雖然IELISA操作簡(jiǎn)單，但對(duì)儀器要求較高，因此不適用于各級(jí)基層機(jī)構(gòu)應(yīng)用。