不同廠家六味地黃濃縮丸的質(zhì)量分析

詹國平，朱麗芳，蔡家寶，黃曉瑜，詹成思

(深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518067)

六味地黃丸大多用于滋補(bǔ)腎陰，主要是由牡丹皮，熟地黃，茯苓，酒茱萸，山藥以及澤瀉六味藥材組成，對頭暈耳鳴，腎陰虧損，腰膝酸軟患者具有顯著效果。而六味地黃濃縮丸是一類由常規(guī)丸劑改制成的現(xiàn)代劑型類型，其將現(xiàn)代藥劑技術(shù)及傳統(tǒng)中醫(yī)藥共同聯(lián)系起來，不僅保留了傳統(tǒng)湯劑中的優(yōu)勢，還將現(xiàn)代制藥技術(shù)原有的先進(jìn)性進(jìn)行有效體現(xiàn)[1]。近年來，伴隨著中藥濃縮丸制劑技術(shù)不斷完善，六味地黃濃縮丸的臨床使用量越來越大，國內(nèi)有諸多廠家均生產(chǎn)此類藥物[2]。2010年版《中國藥典》中規(guī)定的質(zhì)量控制指標(biāo)景關(guān)注于馬錢苷與丹皮酚其含量檢測方法為高效液相色譜法，在使用過程中方法準(zhǔn)確性較高，但在檢測時(shí)采用不同液相色譜法分別檢測丹皮酚以及馬錢苷含量使后期檢測時(shí)費(fèi)時(shí)較長，同時(shí)過程較為繁雜，會由于操作步驟較多產(chǎn)生分析誤差，而牡丹皮是六味地黃丸中主要原材料，區(qū)別于其他五味藥材生產(chǎn)過程中提取的是丹皮酚進(jìn)行入藥，因此需要觀測丹皮酚在生產(chǎn)過程中的轉(zhuǎn)移規(guī)律，有效控制生產(chǎn)質(zhì)量情況，而熟地黃中5-羥甲基糠醛含量較高，該類物質(zhì)對人體具有一定毒素反應(yīng)，在食品中多數(shù)作為危害因子進(jìn)行控制。因此本研究參考2015版《中國藥典》測定市售5個(gè)不同廠家生產(chǎn)的六味地黃濃縮丸，對各項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行差異分析，基于現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對藥品質(zhì)量控制的作用進(jìn)行評估，能在一定程度上科學(xué)系統(tǒng)的指導(dǎo)臨床用藥[3-4]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月—2020年12月市售5個(gè)不同廠家生產(chǎn)的六味地黃濃縮丸作為研究對象，并通過2015版《中國藥典》規(guī)定項(xiàng)下溶出度、含量測定以及裝量差異等相關(guān)內(nèi)容對不同廠家的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行分析研究。

1.2 方法

1.2.1 儀器與材料

(1)儀器MSA225S-000-DU型電子天平、Agilent1260型高效液相色譜儀、ZB-1C型智能崩解儀(北京醫(yī)療設(shè)備四廠)、ZRS-8G型智能溶出儀、HHS21—4S型數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋、JBT/D—GXST380/26型超聲波清洗器以及DHG-9070A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海昕儀儀器儀表有限公司)。

(2)試劑馬錢苷對照品(批號：111640-200901)以及丹皮酚對照品(批號：0708-9704)，甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純；MilliP<0.052ore純水機(jī)制備超純水。

(3)材料佛慈六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z62020664，蘭州佛慈制藥股份有限公司)、同仁堂六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z19993068，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠)、仲景六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z41022128，仲景宛西制藥股份有限公司)、九芝堂六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z43020145，九芝堂股份有限公司)以及修正六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z22023388，通藥制藥集團(tuán)股份有限公司)等5個(gè)不同廠家的六味地黃濃縮丸。

1.2.2 水分測定

(1)依據(jù)烘干法進(jìn)行測定，選取2～5g供試品，將其在干燥且恒重的扁形稱量瓶內(nèi)妥善放置，厚度≤5mm，并對其進(jìn)行精密的稱重，之后將瓶蓋緩緩打開，置于105℃的條件下進(jìn)行5h干燥處理，并及時(shí)把瓶蓋蓋緊，放置在干燥器內(nèi)，進(jìn)行30min左右的冷卻處理，再次精密稱定，105℃干燥1h，再次冷卻稱重，連續(xù)兩次稱重相差<5mg即停止。依據(jù)減失之后的實(shí)際重量來系統(tǒng)計(jì)算供試品中的含水量，計(jì)算公式：Q=K×W+R+V×T

(2)溶散時(shí)限的檢測，要采取供試品6丸，放置在適當(dāng)孔徑的吊籃玻璃管中，增加擋板后需要啟動崩解儀進(jìn)行檢測。

1.2.3 含量測定

對照品溶液的制備：選取適量的馬錢苷對照品、莫諾苷對照品及丹皮酚對照品適量，精密稱定，加入50%甲醇，制成每lmL含有馬錢苷、莫諾苷各40μg、含丹皮酚90μg的混合溶液，即得20μg馬錢苷的對照品溶液。

(1)馬錢苷含量測定

色譜條件：色譜柱Agilent EclipsePlusC18柱(100mm×4.6mm，3.5μm)；流動相：四氫呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液(1：4：8：87)；柱溫設(shè)置為40℃，檢測波長數(shù)值設(shè)置為236nm；流速數(shù)值設(shè)置為1.0mL/min。

供試品溶液的制備：選取本品適量，全部研細(xì)，取出0.5g左右，精密稱定，于具塞錐形瓶中放置，對其進(jìn)行精密量取之后，將25mL濃度為50%的甲醇溶液緩緩加入，并進(jìn)行密塞處理，之后對實(shí)際重量進(jìn)行測量，并給予其1h加熱回流處理，放冷之后，再次測量重量，經(jīng)由50%甲醇溶液把已經(jīng)減失掉的重量重新補(bǔ)足，精密抽取續(xù)濾液10mL放置在中性氧化硅柱上，其指標(biāo)為4g，200目，鋁柱內(nèi)徑為1cm，并使用10mL濃度為40%的甲醇進(jìn)行洗脫后續(xù)收集流出液以及洗脫液，蒸干后需要將殘?jiān)扇舛?0%甲醇進(jìn)行溶解，并轉(zhuǎn)移到10mL量瓶中等待使用，完成后利用50%甲醇稀釋到相應(yīng)刻度，并將其充分搖勻，然后進(jìn)行濾過，最終續(xù)濾液取出，即得。

測定法：依次對供試品及對照品溶液進(jìn)行嚴(yán)密吸取，均需10μL，之后于液相色譜儀內(nèi)緩緩注入，并對其實(shí)施測定，即得。

(2)丹皮酚含量測定

色譜條件：色譜柱：Agilent EclipsePlusC18柱；流動相：甲醇-水(70：30)；柱溫為處于室溫狀態(tài)下；檢測波長數(shù)值設(shè)置為274nm；流速數(shù)值設(shè)置為1.0mL/min。

供試品溶液的制備：選取本品適量，全部研細(xì)，取出0.5g左右，精密稱定，于具塞錐形瓶中放置，對其進(jìn)行精密量取之后，將50mL濃度為50%的甲醇溶液緩緩加入，并進(jìn)行密塞處理，之后對實(shí)際重量進(jìn)行測量，需要對供試品溶液進(jìn)行超聲處理，維持儀器參數(shù)為250W，頻率保持35kHz，持續(xù)處理半小時(shí)，放冷之后，再次測量重量，并采取50%甲醇溶液補(bǔ)足已經(jīng)解釋掉的重量，將其充分搖勻后濾過處理，最終續(xù)濾液取出，即得。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)觀察分析五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸重量差異情況。

(2)觀察分析五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸含量測定情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

由研究可以發(fā)現(xiàn)，不同廠家生產(chǎn)的六味地黃濃縮丸在重量并未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其全部符合2015版《中國藥典》相關(guān)規(guī)定，見表1。

表1 五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸重量差異情況

本研究發(fā)現(xiàn)，不同廠家馬錢苷以及丹皮酚的含量均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表2。

表2 五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸含量測定情況

3 討論

3.1 六味地黃丸質(zhì)量控制情況

六味地黃丸是目前應(yīng)用廣泛的中成藥之一，主要是由熟地黃，山藥，澤瀉，茯苓，牡丹皮以及酒茱萸組成。熟地黃能夠滋陰補(bǔ)精，澤瀉能夠去除濕氣，山藥可以健脾養(yǎng)胃，酒茱萸能夠養(yǎng)肝收斂，牡丹皮可以清瀉肝火，茯苓能夠滲濕，幫助山藥健脾，該藥物使用時(shí)補(bǔ)瀉結(jié)合，但以補(bǔ)為主。六味地黃丸還能用于治療頭暈耳鳴，骨蒸潮熱，消渴等癥狀?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，六味地黃丸在使用時(shí)能夠提高自身免疫功能，起到抗低溫，抗衰老的效果，因此需要重視六味地黃丸質(zhì)量控制情況，提高藥效。

3.2 六味地黃丸原材料作用分析

六味地黃丸中各類藥材對患者機(jī)體均具有一定價(jià)值，藥方中牡丹皮可長時(shí)間放置，使用時(shí)能夠起到解毒、潤喉的作用，同時(shí)還能增強(qiáng)免疫細(xì)胞功能。中藥材牡丹皮主要成分為丹皮酚被規(guī)定為六味地黃丸質(zhì)量分析控制的主要指標(biāo)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明丹皮酚以及牡丹皮中存在的糖類成分能夠起到降溫，消炎，解熱的效果。

六味地黃丸另一配方為酒茱萸具有止汗、補(bǔ)腎、壯陽的效果，同時(shí)還能抑制血小板聚集，該類中藥材中含有馬錢苷、熊果酸以及莫諾苷等有效成分，在對酒茱萸進(jìn)行質(zhì)量控制時(shí)，以上有效成分均被作為酒茱萸的常規(guī)檢測成分。研究表明，2005年起《中國藥典》將馬錢苷作為六味地黃丸的主要質(zhì)量控制指標(biāo)，該有效成分能夠起到抗癌、抗輻射的效果，還能止咳化痰。

熟地黃又被稱之為熟地以及地黃，地黃可分為生地和熟地，男性患者多服用熟地黃，女性患者多服用生地黃，熟地黃在使用過程中能夠治療月經(jīng)不調(diào)及頭暈等癥狀，起到補(bǔ)血益腎的效果。熟地黃中重要化學(xué)成分包括毛蕊花糖苷、氨基酸等，糖類成分高于生地黃。由于熟地黃中糖類會脫水生成果糖以及5-羥甲基糠醛，研究分析表明，藥材中5-羥甲基糠醛含量較多，會對機(jī)體產(chǎn)生毒理反應(yīng)，因此需要嚴(yán)格控制六味地黃丸研究。

山藥應(yīng)用時(shí)可起到化痰止咳，補(bǔ)脾養(yǎng)胃的效果，現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)研究證明，山藥在使用過程中能夠增強(qiáng)免疫功能，并且含有大量蛋白質(zhì)和維生素。同時(shí)山藥中主要成分為淀粉，日常生活中使用能夠增加脾胃消化吸收能力，防止出現(xiàn)便秘，其他化學(xué)成分包括山藥堿、尿囊素以及氨基酸等，尿囊素能夠促進(jìn)細(xì)胞生長，并且加速皮膚組織生長，能夠治療皮膚創(chuàng)傷。

茯苓能夠治療頭痛，膝關(guān)節(jié)積液等癥狀，起到解毒效果。該類中藥材主要化學(xué)成分包括茯苓酸，去氫茯苓酸等，由于茯苓中化學(xué)成分較為復(fù)雜，同時(shí)含量較少，目前對該類藥材質(zhì)量分析研究不多。

澤瀉具有較好利尿功能，促進(jìn)尿素以及氯化鈉排出體外，還能降低膽固醇，起到降血脂的效果，分析原因在于澤瀉能夠抑制小腸脂化膽固醇的能力，與茯苓相同，澤瀉化學(xué)成分較為復(fù)雜，含量較少，因此質(zhì)量控制分析研究較少。

3.3 六味地黃濃縮丸的質(zhì)量控制情況

通過以上六味地黃丸中藥材成分介紹表明中成藥臨床效果較好，同時(shí)廣泛應(yīng)用使六味地黃丸質(zhì)量控制效果重要性提高。而目前六味地黃制劑類型較多，包括濃縮丸，軟膠囊，片劑，口服液等多種形式，其中六味地黃濃縮丸使用率較高，因此質(zhì)量控制是其研究重點(diǎn)。當(dāng)前中藥材的來源具有一定的復(fù)雜性，且中藥材科屬種類、環(huán)境以及栽培采收等方式均存在差異，因此不同批次藥材原料的質(zhì)量會具有明顯的差異性[5]。依據(jù)2015年版《中國藥典》中關(guān)于藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)不同廠家的六味地黃丸其水分、容散時(shí)限及含量等多個(gè)環(huán)節(jié)均同有關(guān)規(guī)定相符合。藥典中規(guī)定其水分不能超過9.0%，且不同廠家六味地黃濃縮丸并未存在顯著差異性；同時(shí)溶散時(shí)限不能大于120min，且不同廠家之間具有較大差異，其全部符合2015版《中國藥典》相關(guān)規(guī)定，同時(shí)不同廠家馬錢苷以及丹皮酚的含量均存在明顯差異，表明不同廠家不同批次的藥品中馬錢苷以及丹皮酚的含量是不一致的[6]。研究發(fā)現(xiàn)，不同廠家馬錢苷以及丹皮酚的含量均存在明顯差異，其中依據(jù)含量的多少順序依次為：仲景六味地黃濃縮丸>同仁堂六味地黃濃縮丸>九芝堂六味地黃濃縮丸>佛慈六味地黃濃縮丸>修正六味地黃濃縮丸，這可能是因?yàn)椴煌瑥S家所應(yīng)用的中藥材存在差異。因?yàn)楫?dāng)前中藥材的來源相對比較復(fù)雜且存在明顯的差異性，其栽培、環(huán)境及采收加工方式差異較大，因此使得批次不同的藥材原料在質(zhì)量上出現(xiàn)一定程度的差異性。同時(shí)藥材質(zhì)量合格，但制劑工藝并不恰當(dāng)或者是未依據(jù)規(guī)程完成操作，導(dǎo)致未徹底提取藥材有效成分，進(jìn)而使六味地黃濃縮丸含量存有差異。

綜上所述，當(dāng)前市售六味地黃濃縮丸在質(zhì)量上已經(jīng)達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的基本要求，但在具體指標(biāo)上存在明顯的差異性，因此需要有效提高藥品質(zhì)量控制范圍，保證后期患者用藥安全性。