發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程的影響

張玉鳳，田慎重，岳壽松，宋效宗，張培蘋，邊文范，董亮，高建國，王恒濤

（1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所／農(nóng)業(yè)農(nóng)村部廢棄物基質(zhì)化利用重點實驗室／山東省植物營養(yǎng)與肥料重點實驗室／山東省新型肥料與精準(zhǔn)施用技術(shù)創(chuàng)新中心，山東 濟南 250100；2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)作物種質(zhì)資源研究所，山東 濟南 250100；3.煙臺市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，山東 煙臺 264001；4.山東中新農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，山東 臨沭 276700）

規(guī)模化、集約化養(yǎng)殖導(dǎo)致畜禽糞便大量積累，短期難以有效處理，進(jìn)而帶來的污染問題成了制約畜禽養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要因素。據(jù)統(tǒng)計，一個年出欄10萬羽雞的養(yǎng)殖場，年產(chǎn)雞糞約達(dá)3600 t［1］。由于雞飼料養(yǎng)分含量高，而雞的消化能力弱，40%～70%的營養(yǎng)物被排出體外，因此雞糞含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)［2］。在微生物作用下，雞糞分解會產(chǎn)生有害氣體，易對人和動物造成危害。而且為促進(jìn)雞的生長發(fā)育、增強抗病能力，通常在飼料中添加含有Cu、Zn、As等重金屬元素的添加劑。研究發(fā)現(xiàn)，雞糞含有大量重金屬元素［3，4］，施入農(nóng)田后造成土壤重金屬累積和農(nóng)產(chǎn)品超標(biāo)［5－7］，對人體健康構(gòu)成潛在危害。

目前，堆肥是畜禽糞污無害化處理的重要手段之一。腐熟的堆肥產(chǎn)品不僅能夠培肥土壤，還可以部分替代化肥［8］。由于雞糞的C／N約為10，低于好氧發(fā)酵最適C／N為25～30的條件，為了加快堆肥發(fā)酵速度，需要添加C／N比高的有機物料。有機物料盡量選用周邊易得原料，因此各地的發(fā)酵物料各異，相應(yīng)的發(fā)酵參數(shù)需要調(diào)節(jié)。本研究選用菌渣、糠醛渣和糖渣為發(fā)酵輔料，主要原因是菌渣中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、菌體蛋白、酶等可以再利用的成分［9］；糠醛渣和糖渣C／N比較高，而且具有改善鹽堿土壤的功能［10，11］。大量研究表明，接種外源微生物是加速高溫好氧堆肥進(jìn)程的另一有效途徑。因為堆肥是在微生物的作用下使糞便腐殖化的過程，堆肥過程中各種變化都與微生物的活動密切相關(guān)［12，13］。Zhao等［14］發(fā)現(xiàn)接種放線菌可加速雞糞堆肥中木質(zhì)纖維素降解，促進(jìn)堆肥腐熟。

由于發(fā)酵物料不同，需要針對發(fā)酵物料的種類篩選出適宜菌種，以保證發(fā)酵效果。針對上述問題，本課題組研制出兩種菌劑，通過設(shè)置接種菌劑和不接種菌劑處理，以發(fā)酵過程溫度、種子發(fā)芽指數(shù)等為考核指標(biāo)，評價兩種菌劑的發(fā)酵效果，以期篩選出雞糞為主料，糠醛渣、糖渣和菌渣為輔料的發(fā)酵菌劑。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）雞糞：蛋雞糞便。（2）糖渣：制糖工業(yè)的副產(chǎn)品。（3）糠醛渣：玉米芯、玉米稈、稻殼等農(nóng)副產(chǎn)品中的聚戊糖成分水解生產(chǎn)糠醛產(chǎn)生的廢棄物。（4）菌渣：栽培草菇的下腳料。（5）微生物發(fā)酵菌劑：共2種，其中菌劑1為定向篩選的高效降解纖維素及木質(zhì)素的曲霉菌和酵母菌混合菌種，其摻入比例為0.05%（W／W），菌劑2為暹羅芽孢桿菌（Bacillus siamensis，有效活菌數(shù)≥0.50億／g）。試驗材料基本理化性質(zhì)見表1。

表1 堆肥材料的基本理化性質(zhì)

1.2 試驗設(shè)計及方法

試驗設(shè)置3個處理，即T1：雞糞＋輔料；T2：雞糞＋輔料＋菌劑1；T3：雞糞＋輔料＋菌劑2。重復(fù)3次。輔料為菌渣、糠醛渣、糖渣混合物，各物料干重比為雞糞∶糠醛渣∶菌渣∶糖渣＝1.4∶1.2∶1.7∶1.0?；旌衔锪铣跗谔嫉燃s為25∶1，含水量為60%，pH值7.2。

試驗于2018年4月20日至6月6日進(jìn)行。采用槽式發(fā)酵工藝，將雞糞與糖渣、菌渣、糠醛渣、發(fā)酵菌劑等物料充分混合，然后運至發(fā)酵槽中，堆成高約1.2 m、寬2.0 m、長3.0 m的堆體進(jìn)行發(fā)酵。

1.3 測定項目及方法

從發(fā)酵第1 d開始，于每天上午9∶30—10∶30測定堆體中間位置上中下部溫度、含水量、氧氣含量等指標(biāo)。當(dāng)含水量低于30%時開始補充水分至50%；氧氣含量低于5%時要翻堆；溫度達(dá)到60℃以上時也要立即翻堆。同時記錄周圍環(huán)境溫度，以便有效控制堆肥進(jìn)程和產(chǎn)品質(zhì)量。

分別于發(fā)酵第1、5、12、21、37、47天采用5點法在堆體不同部位取樣，取樣量為500 g左右，混勻后測其pH值、有機碳、氮、磷、鉀含量［15］及總腐植酸［16］、發(fā)芽指數(shù)［17］，測第47天樣品的糞大腸菌［18］、蛔蟲卵［19］、重金屬［15］和抗生素［20］?？股赜缮綎|省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所檢測。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Excel 2010和SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和單因素方差分析（P＜0.05）、LSD法多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中溫度變化的影響

由圖1看出，雞糞好氧發(fā)酵過程中T2、T3處理的溫度基本高于T1。T1、T2、T3處理達(dá)到50℃的時間分別為第5、2、2天，且維持50℃以上高溫時間分別為42、45、45 d，均超過10 d，達(dá)到GB／T 7959—2012［21］糞便無害化衛(wèi)生要求；高于55℃的時間維持25 d以上，符合NY／T 3442—2019［22］的標(biāo)準(zhǔn)。初步表明，添加發(fā)酵菌劑能使高溫期提前3 d，發(fā)酵溫度高于不接種菌劑處理。兩種菌劑在對溫度的影響方面基本無差異。

圖1 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中溫度變化的影響

2.2 雞糞發(fā)酵過程中堆肥浸出液對小麥種子發(fā)芽指數(shù)的影響

由圖2看出，4個發(fā)酵時期堆肥浸提物的小麥發(fā)芽指數(shù)均表現(xiàn)為T2處理顯著高于T1和T3；37 d和47 d時，T3也顯著高于T1。從發(fā)芽指數(shù)變化趨勢看，隨著發(fā)酵時間延長，發(fā)芽指數(shù)逐漸提高，37 d時T2和T3處理分別達(dá)到73.35%和63.91%；47 d時T1、T2和T3處理分別達(dá)到58.34%、87.36%和80.14%。表明接種菌劑促進(jìn)雞糞發(fā)酵，37 d時可以達(dá)到基本無害程度，47 d時菌劑1處理達(dá)到完全無毒［23］。不接種菌劑的T1處理47 d時才達(dá)到基本無毒害程度。說明接種菌劑能使發(fā)酵時間縮短10 d，菌劑1的效果優(yōu)于菌劑2。

圖2 雞糞發(fā)酵過程中堆肥浸出液對小麥種子發(fā)芽指數(shù)的影響

2.3 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中pH值變化的影響

由圖3看出，不同處理間相比，在發(fā)酵1～12、47 d時T2處理pH值均高于T1、T3，T3處理在5～21 d期間的pH值則低于T1、T2。1～21 d期間，不同處理間差異較大。T2、T3處理pH值變幅大于T1。與第1天相比，之后3個處理的pH值均降低，12～47 d的pH值在6.8～7.1之間。pH值的變化主要是由氨氮產(chǎn)生、揮發(fā)和蛋白類有機物質(zhì)的降解導(dǎo)致的，其變化主要發(fā)生在發(fā)酵前期即1～21 d。

圖3 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中pH值變化的影響

2.4 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中氮磷鉀含量及其總量變化的影響

試驗結(jié)果表明，不同處理間氮磷鉀養(yǎng)分含量差異不顯著。由圖4A看出，3個處理的氮含量1～21 d逐漸增加，之后趨于平穩(wěn)。由圖4B看出，T1處理的P2O5含量5～21 d逐漸增加，其余時段變幅較小；T2處理1～12 d逐漸增加，之后趨于平穩(wěn)；T3處理隨著時間推進(jìn)逐漸增加，但是增幅較小。從圖4C看出，3個處理的K2O含量基本呈現(xiàn)1～37 d逐漸上升，37～47 d趨于平穩(wěn)。說明本試驗條件下，發(fā)酵過程中氮、鉀含量變化主要在1～37 d間。

圖4 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中氮磷鉀含量及其總量變化的影響

從氮磷鉀總量看，3個處理基本呈現(xiàn)1～37 d逐漸上升，37～47 d趨于平穩(wěn)態(tài)勢，且處理間差異不明顯。與第1天相比，之后3個處理的氮磷鉀總量均升高，增幅為5.4%～23.0%。發(fā)酵12 d后氮磷鉀總量在4.3%以上。

2.5 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中有機碳含量變化的影響

由圖5看出，3個處理間相比，5～12 d間T2的有機碳含量顯著低于T1和T3。從變化幅度看，T2最大，其次是T3，T1最小。從有機碳變化趨勢看，3個處理1～12 d基本呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，21～47 d變化平穩(wěn)，有機碳含量均在27%以上。與第1天相比，之后3個處理的有機碳均降低，降幅為9.8%～21.4%。有機碳含量反映了微生物分解有機物料中半纖維素、纖維素的能力，但它又是微生物本身所依賴的碳源與能源。所以本試驗發(fā)酵條件下，有機物質(zhì)變化主要在1～12 d間，接種菌劑1有利于有機物質(zhì)的分解和轉(zhuǎn)化。

圖5 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中 有機碳含量變化的影響

2.6 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中總腐植酸含量變化的影響

由圖6看出，雞糞發(fā)酵1～5 d其總腐植酸含量3個處理間差異不顯著，12～47 d均為T2最高，T3次之，T1最低。從變化趨勢看，3個處理無明顯規(guī)律，變化均較大。與第1天相比，T1處理第5天升至最高，其余時間呈波浪式下降，降幅為2.2%～13.6%；T2處理12、37、47 d均升高，增幅分別為10.7%、10.7%、14.9%；T3處理除發(fā)酵21 d略降外其它時間均升高，增幅為7.2%～17.1%。說明接種菌劑顯著增加發(fā)酵物料的總腐植酸含量，且菌劑1的效果優(yōu)于菌劑2。

圖6 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中 總腐植酸含量變化的影響

2.7 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中C／N變化的影響

圖7顯示，T2處理的C／N值5～12 d顯著低于T1和T3，其余時間三者間差異不顯著。整個發(fā)酵過程中C／N值基本呈現(xiàn)先下降后趨于平穩(wěn)的趨勢，其中，菌劑1發(fā)酵12 d后C／N值穩(wěn)定在約16，而菌劑2和不接種處理自21 d始穩(wěn)定在約16。表明好氧發(fā)酵過程是C／N值逐漸降低的過程，21 d后C／N值基本穩(wěn)定，即發(fā)酵基本結(jié)束，菌劑1的變化幅度最大。

圖7 發(fā)酵菌劑對雞糞好氧發(fā)酵過程中C／N變化的影響

2.8 發(fā)酵菌劑對雞糞堆肥中糞大腸菌、蛔蟲卵和抗生素的影響

測定結(jié)果（表2）表明，所有處理的糞大腸菌群數(shù)≤3個／g，蛔蟲卵死亡率為100%，符合NY 525—2012［15］和NY 884—2012［24］中的要求，即糞大腸菌群數(shù)≤100個／g，蛔蟲卵死亡率≥95%。所有處理均未檢出土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素。表明本試驗雞糞發(fā)酵47 d后的堆肥可以安全施用。

表2 發(fā)酵菌劑對雞糞堆肥中糞大腸菌、蛔蟲卵和抗生素的影響

2.9 發(fā)酵菌劑對雞糞堆肥中重金屬含量的影響

由表3看出，所有處理的重金屬含量均符合NY 525—2012和NY 884—2012中的要求，即砷≤15 mg／kg、汞≤2 mg／kg、鉛≤50 mg／kg、鎘≤3 mg／kg、鉻≤150 mg／kg。不同處理間比較，T2處理的砷、汞、鉛、鎘、鉻含量較T1均降低，其中鉛含量差異達(dá)到顯著水平；T3處理的砷、鎘含量較T1、T2均顯著降低，汞、鉛、鉻含量升高，但是不同處理間差異不顯著。

表3 發(fā)酵菌劑對雞糞堆肥中重金屬含量的影響 （mg／kg）

3 討論

3.1 雞糞發(fā)酵產(chǎn)物的安全性

雞糞發(fā)酵產(chǎn)物的安全性是人們最關(guān)注的問題。好氧發(fā)酵的目的是減少或去除糞便中的病原體、抗生素、重金屬等有害物質(zhì)，控制蚊蠅滋生、防止惡臭擴散，加快大分子有機物質(zhì)的分解，使其達(dá)到農(nóng)用標(biāo)準(zhǔn)。評價的主要指標(biāo)有溫度、種子發(fā)芽指數(shù)、C／N值、蛔蟲卵死亡率、糞大腸菌群數(shù)、抗生素、重金屬等，其中溫度變化是反映好氧堆肥發(fā)酵是否正常最直接、最敏感的指標(biāo)。李國學(xué)等［25］研究表明，當(dāng)堆體溫度高于55℃并維持在3 d以上，堆體中的病菌可被殺死。Vinneras等［26］研究表明大多數(shù)病原體在高于45℃下會被迅速殺死。本研究中接種菌劑處理堆溫50℃以上的時間持續(xù)45 d，達(dá)到了GB／T 7959—2012中規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（50℃的時間持續(xù)10 d以上）；高于55℃的時間維持在25 d以上，符合NY／T 3442—2019中要求（55℃以上維持時間不少于7 d）。本研究中接種菌劑處理達(dá)到50℃的時間比不接種處理提前3 d。與已有研究結(jié)果一致，接種復(fù)合菌劑加快了堆體升溫，腐熟時間縮短，最終加速堆體腐熟［27］。

種子發(fā)芽試驗是評價堆肥腐熟度的最終和最具說服力的方法。一般情況下，GI大于50%可認(rèn)為堆肥對種子基本無毒害，GI大于85%可認(rèn)為完全無毒，堆肥完全腐熟［23］。NY／T 3442—2019的質(zhì)量要求GI大于70%。本試驗中雞糞＋輔料處理47 d時GI達(dá)到58.3%，可認(rèn)為堆肥對種子基本無毒害；接種菌劑1處理37 d時GI達(dá)到73.35%，47 d時達(dá)到87.36%，完全無毒性；接種菌劑2處理47 d時GI達(dá)到80.14%，說明接種菌劑能使發(fā)酵時間縮短10 d。

堆肥化過程是C／N值逐漸下降并趨于穩(wěn)定的過程［28，29］，腐熟堆肥的C／N值一般為15左右［30］。竹江良等［31］研究表明加入外源微生物菌劑有利于促進(jìn)C／N值降低，加速豬糞堆肥腐熟進(jìn)程。C／N值逐漸下降的原因主要是微生物消耗大量碳水化合物，總碳含量呈下降趨勢，總氮含量相對增加。本試驗發(fā)酵過程中有機碳也呈現(xiàn)逐漸下降、氮含量逐漸增加的趨勢，堆肥C／N值逐漸下降，1～12 d時接種菌劑1處理的C／N值低于不接種處理，雞糞發(fā)酵到21 d時3個處理的C／N值基本穩(wěn)定在16，兩個菌種間無顯著差異。

本研究結(jié)果表明，所有處理的糞大腸菌群落數(shù)≤3個／g，蛔蟲卵死亡率為100%，砷、汞、鉛、鎘、鉻含量也符合NY 525—2012、NY 884—2012和NY／T 3442—2019中的標(biāo)準(zhǔn)；所有處理均未檢出土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素。

綜合溫度、發(fā)芽指數(shù)、C／N值、糞大腸菌群數(shù)、蛔蟲卵和砷、汞、鉛、鎘、鉻及抗生素等指標(biāo)，本研究中雞糞發(fā)酵產(chǎn)物達(dá)到了NY／T 3442—2019和GB／T 7959—2012中規(guī)定的各項標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)酵產(chǎn)物均在安全范圍內(nèi)，實現(xiàn)了無害化。從堆肥無害化角度看，添加菌劑加快有害物質(zhì)的去除速度，菌劑1的效果優(yōu)于菌劑2，堆肥有效時間為37 d以上。

3.2 雞糞發(fā)酵產(chǎn)物的可利用性

通過好氧發(fā)酵實現(xiàn)畜禽糞便無害化的前提下，盡量降低有效養(yǎng)分損失，提高堆肥質(zhì)量。有機肥在堆制過程中，由于有機物降解、水分散失、揮發(fā)性物質(zhì)損失等，使得堆體變小，干物質(zhì)降低，體現(xiàn)出一定程度的“相對濃縮效應(yīng)”［32］。堆肥過程中全氮含量主要受兩個因素的共同影響，一是NH＋4－N在高溫條件下轉(zhuǎn)化為NH3造成的含量減少，二是有機質(zhì)分解引起的含量增加［30］。胡雨彤等［33］研究表明，豬糞堆肥0～6 d全氮含量下降，說明以NH＋4－N的揮發(fā)為主，后期全氮含量穩(wěn)步升高，則由濃縮效應(yīng)引起。但是本研究中總氮含量1～21 d逐漸增加，37～47 d趨于平穩(wěn)。說明1～21 d有機質(zhì)分解產(chǎn)生的氮高于NH＋4－N揮發(fā)為NH3造成的含量減少。劉超等［34］研究表明，在高溫堆肥結(jié)束時，全磷、全鉀含量比堆肥初始有所增加，原因是堆肥過程中磷素和鉀素不會揮發(fā)損失，而堆體的總干物質(zhì)下降所致。本研究中發(fā)酵5～47 d的P2O5和K2O含量均高于第1天，與劉超等［34］的研究結(jié)果一致。

王曉娟等［35］研究顯示添加菌劑具有促進(jìn)有機碳分解的作用。適宜菌劑用量具有減少氮素?fù)p失，使腐熟提早完成的作用［36］。在堆肥過程中可溶性有機物逐漸被微生物降解，堆肥結(jié)束后，有機質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)較堆肥前下降40%～50%［37］。張雪辰等［38］研究表明，在整個堆肥過程中，隨著腐解進(jìn)行有機碳呈下降趨勢，添加發(fā)酵啟動劑可以促進(jìn)有機質(zhì)的礦化分解。本研究發(fā)酵過程中有機碳含量較第1天降低9.8%～21.4%，添加發(fā)酵菌劑1的效果較明顯。

腐殖質(zhì)是堆肥過程中形成的大分子有機化合物，其主要成分為胡敏酸和富里酸［39，40］，其含有大量官能團，農(nóng)學(xué)效應(yīng)顯著，可以為作物提供營養(yǎng)，改善土壤理化性質(zhì)［41］，是發(fā)酵產(chǎn)品品質(zhì)的重要評價標(biāo)準(zhǔn)。欒潤宇等［32］研究表明，雞糞和稻草秸稈堆肥后腐殖質(zhì)含量升高，這是由于物料不斷分解而生成的。李吉進(jìn)等［42］認(rèn)為好氧發(fā)酵是一個有機質(zhì)降解、腐殖質(zhì)增加且逐漸趨于穩(wěn)定化的過程，發(fā)酵后碳素腐殖化特征明顯。肖禮等［43］發(fā)現(xiàn)豬糞秸稈混合堆肥中接種白腐真菌、氨化和硝化菌劑對堆肥腐熟影響不大，但可有效促進(jìn)有機碳降解。本研究中接種菌劑顯著增加發(fā)酵物料的總腐植酸含量，提高了有機質(zhì)的有效性，且菌劑1的效果優(yōu)于菌劑2。

發(fā)酵產(chǎn)物的用途主要是直接施用到田間或制作商品有機肥或生物有機肥。本研究中發(fā)酵12 d以后氮磷鉀總量在4.3%以上，與NY 525—2012標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的氮磷鉀總量≥5%接近。雖然發(fā)酵過程中pH值均低于第1 d，但是12～47 d的pH值在6.8～7.1之間，符合NY 525—2012、NY 884—2012標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定（pH值5.5～8.5）。3個處理的有機碳含量乘以氧化系數(shù)1.5和換算系數(shù)1.724后均達(dá)到70%以上，符合商品有機肥NY 525—2012和生物有機肥NY 884—2012中有機質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)。所以發(fā)酵產(chǎn)物可以作為制作商品有機肥和生物有機肥的原料。

4 結(jié)論

4.1 從溫度、發(fā)芽指數(shù)、C／N值、糞大腸菌群數(shù)、蛔蟲卵和砷、汞、鉛、鎘、鉻及抗生素等指標(biāo)考慮，本研究中雞糞發(fā)酵產(chǎn)物達(dá)到了NY／T 3442—2019和GB／T 7959—2012中規(guī)定的各項標(biāo)準(zhǔn)，所以發(fā)酵產(chǎn)物均在安全范圍內(nèi)，實現(xiàn)了無害化。

4.2 本研究中雞糞發(fā)酵12 d后氮磷鉀總量在4.3%以上；12～47 d的pH值在6.8～7.1之間；有機碳含量乘以氧化系數(shù)1.5和換算系數(shù)1.724后均達(dá)到70%以上，符合商品有機肥NY 525—2012和生物有機肥NY 884—2012中對pH值和有機質(zhì)含量標(biāo)準(zhǔn)的要求。所以發(fā)酵產(chǎn)物可以作為制作商品有機肥和生物有機肥的原料。

4.3 綜合各項指標(biāo)，接種兩種發(fā)酵菌劑能提高雞糞發(fā)酵速度，發(fā)酵時間縮短10 d，菌劑1的發(fā)酵效果優(yōu)于菌劑2。

4.4 最優(yōu)的發(fā)酵工藝是：各物料的干重比例為雞糞∶糠醛渣∶菌渣∶糖渣＝1.4∶1.2∶1.7∶1.0?；旌衔锪铣跗谔嫉燃s為25∶1，含水量為60%，pH值7.2。摻入0.05%（W／W）菌劑1。堆肥有效時間控制在37 d以上。