飼糧添加酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、血清免疫指標(biāo)和腸道菌群的影響

王詩(shī)琦 陳雪嬌 梁麗萍 楊 寧 宣 麗 李春雨 李洪根 權(quán)志中 劉顯軍*

(1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，沈陽(yáng)110866；2.沈陽(yáng)市康普利德生物科技有限公司，沈陽(yáng)110161；3.遼寧康普利德生物科技有限公司，鐵嶺112600；4.沈陽(yáng)市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研發(fā)服務(wù)中心(沈陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院)，沈陽(yáng)110025；5.遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，沈陽(yáng)110003)

隨著我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2020年無(wú)抗、禁抗政策的發(fā)布，人們對(duì)飼料品質(zhì)提出了更高的要求。酶解蛋白肽是一種通過(guò)酶解工藝將蛋白質(zhì)原料中部分大分子蛋白質(zhì)降解成活性小分子肽和游離氨基酸的產(chǎn)品，產(chǎn)物中還包括大量的生物活性因子，如益生菌、酶類(lèi)和酸類(lèi)等[1]。與普通蛋白質(zhì)飼料相比，酶解蛋白肽能夠促進(jìn)氨基酸吸收和蛋白質(zhì)合成，起到維持腸道健康、提高免疫力和降低料重比等作用，得到廣大飼料企業(yè)的認(rèn)可，因此被列為無(wú)抗時(shí)代下有效的營(yíng)養(yǎng)方案之一，并逐漸成為部分替代飼料中魚(yú)粉、豆粕的重要原料，在動(dòng)物生產(chǎn)養(yǎng)殖上得到廣泛應(yīng)用[2-3]。

目前有關(guān)在家畜飼糧中添加酶解蛋白肽的研究已經(jīng)有很多。Ma等[4]在斷奶仔豬基礎(chǔ)飼糧中添加7.5%和9.0%的酶解豆粕蛋白發(fā)現(xiàn)，與添加金霉素的陽(yáng)性對(duì)照組相比，酶解豆粕蛋白對(duì)斷奶仔豬的抗氧化能力、免疫力和腸道屏障功能均有一定的改善作用，可以作為一種與抗生素一樣有效的功能性飼料添加劑來(lái)降低斷奶仔豬的腹瀉率和提高生長(zhǎng)性能。崔家軍等[5]將添加1%～3%酶解蛋白肽T30的飼糧飼喂給生長(zhǎng)育肥豬，其平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)顯著增長(zhǎng)，同時(shí)血液總蛋白和球蛋白含量也有提高。趙娜等[6]將仔豬基礎(chǔ)飼糧中的10%豆粕用豆粕酶解發(fā)酵物替代，發(fā)現(xiàn)仔豬的生長(zhǎng)性能提高，機(jī)體抗氧化能力增強(qiáng)，腹瀉率降低，同時(shí)試驗(yàn)組仔豬盲腸、大腸中乳酸桿菌數(shù)量顯著提高，十二指腸中總細(xì)菌數(shù)量降低，這有利于乳酸桿菌在腸道內(nèi)形成優(yōu)勢(shì)菌群。

不過(guò)，學(xué)者們圍繞小肽的探究普遍關(guān)注點(diǎn)都是其在動(dòng)物生長(zhǎng)過(guò)程中的作用，極少有人研究動(dòng)物飼糧中小肽的適宜添加水平。因此，本試驗(yàn)通過(guò)在飼糧中添加不同水平的酶解蛋白肽，研究其對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、血清免疫指標(biāo)和腸道菌群的影響，并確定酶解蛋白肽的適宜添加水平，為酶解蛋白肽在生產(chǎn)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用酶解蛋白肽購(gòu)自遼寧某公司，是以高蛋白質(zhì)豆粕為原料，采用組合異步酶解技術(shù)加工而成的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)原料。酶解蛋白肽中相對(duì)分子質(zhì)量小于1 000 ku的肽組分占64.6%，其中小肽含量達(dá)16%，其營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

表1 酶解蛋白肽營(yíng)養(yǎng)成分

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在沈陽(yáng)博?？蒲胸i場(chǎng)進(jìn)行，選取150頭21日齡體重為(7.01±0.17) kg的健康“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬作為試驗(yàn)動(dòng)物，采用單因素隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，按照體重相近、公母一致的原則將150頭斷奶仔豬隨機(jī)分為5個(gè)組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6頭(公母各占1/2)。各組斷奶仔豬分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加0(對(duì)照組)、2%、4%、6%和8%酶解蛋白肽的飼糧。試驗(yàn)所用基礎(chǔ)飼糧按照NRC(1998)標(biāo)準(zhǔn)配制。各組飼糧均等氮等能，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

試驗(yàn)共35 d，其中預(yù)試期7 d、正試期28 d。預(yù)試期飼喂基礎(chǔ)飼糧進(jìn)行過(guò)渡(從粥料過(guò)渡到顆粒料)，正試期按分組飼喂相應(yīng)飼糧。試驗(yàn)期間所有的斷奶仔豬于同一棟豬舍保育床上進(jìn)行分欄飼養(yǎng)，舍內(nèi)溫度維持在25～28 ℃，自由采食和飲水，按照豬場(chǎng)常規(guī)管理和免疫接種，記錄仔豬每天采食和腹瀉情況。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

分別于正試期開(kāi)始、結(jié)束及第14天對(duì)仔豬進(jìn)行稱(chēng)重，記錄每組試驗(yàn)豬每天的飼糧供給和隔天余料情況，計(jì)算各組試驗(yàn)豬ADG、ADFI和料重比(F/G)。試驗(yàn)期間每天觀(guān)察并記錄試驗(yàn)豬的腹瀉情況，根據(jù)糞便情況給予評(píng)分：1分=硬糞；2分=正常糞便；3分=軟糞，部分形成糞便；4分=半液狀、漿糊狀糞便；5分=水樣糞便。將糞便得分為4分、5分者確定為腹瀉，試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算每組腹瀉率。

腹瀉率(%)=100×腹瀉頭次總數(shù)/(試驗(yàn)
仔豬總頭數(shù)×試驗(yàn)總天數(shù))。

1.3.2 血清免疫指標(biāo)測(cè)定

正試期第14天和第28天，分別從每個(gè)組的每個(gè)重復(fù)選取1頭體況良好、接近平均體重的仔豬，前腔靜脈采血，離心分離血清，將收集的血清分裝于離心管中，保存于-20 ℃冰箱中。使用試劑盒檢測(cè)血清中免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)含量，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定的方法進(jìn)行操作。

1.3.3 腸道菌群結(jié)構(gòu)測(cè)定

正試期第28天，采集新鮮且未被污染的糞便，每重復(fù)至少采集3頭，每個(gè)組至少保存3份樣品。糞便采集時(shí)間盡量選擇在仔豬排泄高峰期，仔豬排泄時(shí)，用無(wú)菌采樣器及時(shí)接住，用無(wú)菌牙簽去掉前端1～2 cm，采集5 g左右，用無(wú)菌取樣袋封存，立刻置于冰盒中，迅速凍存。對(duì)于未及時(shí)處理而遺落在地上的糞便，判為已被污染，不予收集。

使用DNA試劑盒(美國(guó)OMEGA公司)提取仔豬糞便的基因組DNA，步驟參照說(shuō)明書(shū)。利用Qubit 3.0 DNA檢測(cè)試劑盒對(duì)基因組DNA精確定量，并采用16S rRNA高通量測(cè)序測(cè)定菌群結(jié)構(gòu)。樣品測(cè)序使用的引物是341F/805R，引物序列為：341F，CCCTACACGACGCTCTTCCGATCTG(barcode)CCTACGGGNGGCWGCAG；805R，GACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCAGACTAC

HVGGGTATCTAATC。測(cè)序區(qū)域?yàn)閂3～V4，測(cè)序平臺(tái)為MiSeq。對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)的高級(jí)信息學(xué)分析，獲得樣品菌群組成及相對(duì)豐度。

1.3.4 糞便中有機(jī)酸含量測(cè)定

各組取糞樣2.0 g，加4 mL蒸餾水，在研磨器中充分研磨后，離心取上清液1 mL，加0.2 mL濃度為25%的偏磷酸，4 ℃下20 000 r/min離心10 min，過(guò)0.45 μm濾膜。采用高效液相色譜法測(cè)定乙酸、丙酸、丁酸和乳酸含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010進(jìn)行整理后，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并利用Tukey’s法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)以平均值(mean)和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，試驗(yàn)第14天，與對(duì)照組相比，飼糧添加6%和8%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬體重(P<0.01)。試驗(yàn)第1～14天，與對(duì)照組相比，飼糧添加6%和8%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬ADFI和ADG(P<0.01)，極顯著降低斷奶仔豬腹瀉率(P<0.01)；飼糧添加6%酶解蛋白肽顯著降低斷奶仔豬F/G(P<0.05)。試驗(yàn)第28天，與對(duì)照組相比，飼糧添加2%～8%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬體重(P<0.01)，其中6%和8%酶解蛋白肽添加組斷奶仔豬體重極顯著高于2%和4%酶解蛋白肽添加組(P<0.01)。試驗(yàn)第15～28天，與對(duì)照組相比，飼糧添加6%和8%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬ADFI和ADG(P<0.01)，顯著或極顯著降低斷奶仔豬F/G(P<0.05或P<0.01)；飼糧添加6%酶解蛋白肽極顯著降低斷奶仔豬腹瀉率(P<0.01)。試驗(yàn)第1～28天，與對(duì)照組相比，飼糧添加6%和8%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬ADFI和ADG(P<0.01)，極顯著降低斷奶仔豬腹瀉率(P<0.01)；飼糧添加6%酶解蛋白肽顯著降低斷奶仔豬F/G(P<0.05)。

2.2 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，試驗(yàn)第14天，與對(duì)照組相比，飼糧添加2%～6%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬血清IgG含量(P<0.01)；飼糧添加2%、4%和8%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬血清IgM含量(P<0.01)，其中2%酶解蛋白肽添加組斷奶仔豬血清IgM含量極顯著高于4%和8%酶解蛋白肽添加組(P<0.01)。試驗(yàn)第28天，與對(duì)照組相比，飼糧添加2%和4%酶解蛋白肽顯著或極顯著提高斷奶仔豬血清IgG含量(P<0.05或P<0.01)，飼糧添加2%～8%酶解蛋白肽顯著或極顯著提高斷奶仔豬血清IgM含量(P<0.05或P<0.01)，且均以2%酶解蛋白肽添加組含量最高。

表3 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

表4 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

2.3 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響

2.3.1 斷奶仔豬腸道菌群豐度等級(jí)曲線(xiàn)

如圖1所示，6%和8%酶解蛋白肽添加組斷奶仔豬腸道菌群物種組成更豐富，8%酶解蛋白肽添加組斷奶仔豬腸道菌群物種分布最均勻。

圖1 斷奶仔豬腸道菌群豐度等級(jí)曲線(xiàn)

2.3.2 斷奶仔豬腸道菌群豐度及多樣性分析

由表5可知，各組斷奶仔豬腸道菌群測(cè)序覆蓋率均在0.99以上，說(shuō)明本次測(cè)序結(jié)果可以代表各組樣本菌群多樣性的真實(shí)情況。與對(duì)照組相比，飼糧添加2%和4%酶解蛋白肽顯著提高斷奶仔豬腸道菌群Chao1指數(shù)(P<0.05)，飼糧添加酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬腸道菌群Ace指數(shù)、Simpson指數(shù)和Shannon指數(shù)均無(wú)顯著影響(P>0.05)。

2.3.3 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

如圖2所示，各組斷奶仔豬腸道菌群在門(mén)水平上相對(duì)豐度大于0.1%的共檢測(cè)出：厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)、放線(xiàn)菌門(mén)(Actinobacteria)、暫定螺旋體門(mén)(candidatus Saccharibacteria)、螺旋菌門(mén)(Spirochaetae)、衣原體門(mén)(Chlamydiae)、變形菌門(mén)(Proteobacteria)、廣古菌門(mén)(Euryarchaeota)、疣微菌門(mén)(Verrucomicrobia)和未分類(lèi)菌門(mén)，其中優(yōu)勢(shì)菌門(mén)是厚壁菌門(mén)。由表6可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加6%酶解蛋白肽顯著提高斷奶仔豬腸道菌群擬桿菌門(mén)相對(duì)豐度(P<0.05)。

表5 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬腸道菌群豐度及多樣性的影響

如圖3所示，除去未分類(lèi)菌屬和其他菌屬，各組斷奶仔豬腸道菌群在屬水平上相對(duì)豐度大于1%的有：狹義梭菌屬(Clostridium_sensu_stricto)、乳酸菌屬(Lactobacillus)、芽殖菌屬(Gemmiger)、普雷沃菌屬(Prevotella)、Terrisporobacter、顫桿菌克屬(Oscillibacter)、優(yōu)桿菌屬(Eubacterium)、Lachnospiracea_incertae_sedis、糞桿菌屬(Faecalibacterium)、巴氏桿菌屬(Barnesiella)、Saccharibacteria_genera_incertae_sedis、梭狀芽孢桿菌Ⅳ屬(ClostridiumⅣ)、Sporobacter、Intestinimonas和衣原體屬(Chlamydia)。由表7可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加4%和8%酶解蛋白肽極顯著提高斷奶仔豬腸道菌群乳酸菌屬相對(duì)豐度(P<0.01)，飼糧添加2%～8%酶解蛋白肽顯著降低腸道菌群Intestinimonas相對(duì)豐度(P<0.05)，飼糧添加4%～8%酶解蛋白肽顯著降低腸道菌群狹義梭菌屬相對(duì)豐度(P<0.05)；此外，飼糧添加8%酶解蛋白肽極顯著提高腸道菌群優(yōu)桿菌屬相對(duì)豐度(P<0.01)，顯著提高Lachnospiracea_incertae_sedis相對(duì)豐度(P<0.05)，顯著降低普雷沃菌屬相對(duì)豐度(P<0.05)；飼糧添加6%和8%酶解蛋白肽顯著或極顯著降低腸道菌群衣原體屬相對(duì)豐度(P<0.05或P<0.01)。

2.3.4 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬糞便中有機(jī)酸含量的影響

由表8可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加2%～8%酶解蛋白肽均極顯著提高斷奶仔豬糞便中乳酸、乙酸和丙酸含量(P<0.01)，其中4%酶解蛋白肽添加組糞便中乳酸含量最高，6%酶解蛋白肽添加組糞便中乙酸和丙酸含量最高。由于糞便中丁酸含量太低，因此均未檢測(cè)到丁酸。

Firmicutes：厚壁菌門(mén)；Bacteroidetes：擬桿菌門(mén)；Candidatus Saccharibacteria：暫定螺旋體門(mén)；Actinobacteria：放線(xiàn)菌門(mén)；Chlamydiae：衣原體門(mén)；Spirochaetae：螺旋菌門(mén)；Proteobacteria：變形菌門(mén)；Euryarchaeota：廣古菌門(mén)；Verrucomicrobia：疣微菌門(mén)；Unclassified：未分類(lèi)；Fibrobacteres：纖維桿菌門(mén)；Synergistetes：互養(yǎng)菌門(mén)；Planctomycetes：浮霉菌門(mén)；Tenericutes：軟壁菌門(mén)；Chloroflexi：綠彎菌門(mén)；Acidobacteria：酸桿菌門(mén)；Deferribacteres：脫鐵桿菌門(mén)；Lentisphaerae：黏膠球形菌門(mén)。

3 討 論

3.1 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

研究表明，當(dāng)給動(dòng)物提供氮源的形式為小分子肽時(shí)，其能夠直接被動(dòng)物體吸收利用，蛋白質(zhì)的體內(nèi)沉積率和動(dòng)物對(duì)飼糧的轉(zhuǎn)化利用率也高于以其他形式氮源，有利于促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)；同時(shí)，由于小分子肽中抗?fàn)I養(yǎng)因子的降低及其較好的適口性，使其有助于提高仔豬采食量，從而提高仔豬生長(zhǎng)性能[1-2]。劉峰等[7]在斷奶仔豬的飼糧中添加2%的玉米肽，可以顯著提高斷奶仔豬的ADG，顯著降低F/G和腹瀉率。張愛(ài)民等[8]研究還顯示，大豆酶解蛋白肽由于其抗?fàn)I養(yǎng)因子的降低及其較好的適口性，能夠起到促進(jìn)斷奶仔豬采食的效果。這與以上研究結(jié)果相似。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在斷奶仔豬飼糧中添加不同水平的酶解蛋白肽可以顯著提高斷奶仔豬ADG和ADFI，顯著降低F/G，且以添加6%和8%酶解蛋白肽時(shí)效果較好。

此外，酶解蛋白肽還可以促進(jìn)小腸發(fā)育，提高免疫力，降低豬腹瀉的發(fā)生率。周相超等[9]將玉米-豆粕進(jìn)行菌酶協(xié)同處理，并以10%的比例替代未處理的原料后飼喂給生長(zhǎng)肥育豬，發(fā)現(xiàn)豬的腹瀉率與添加了抗生素的陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)顯著差異。于海濤等[10]在斷奶仔豬飼糧中添加12.5%的體外酶解豆粕后能夠降低腹瀉率和糞便評(píng)分。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加酶解蛋白肽可顯著降低斷奶仔豬腹瀉率，且當(dāng)飼糧中添加6%酶解蛋白肽時(shí)效果最好。

3.2 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

免疫球蛋白是一種具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)的球蛋白，是動(dòng)物體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要組成部分，包括IgM和IgG等[11]。某些小肽可以刺激機(jī)體分泌消化酶，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，提高血清免疫球蛋白含量，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫力。Xu等[12]研究了抗菌肽對(duì)健康仔豬和攻毒仔豬的影響，結(jié)果表明，抗菌肽能夠顯著改善仔豬生長(zhǎng)性能，提高血清IgM和IgG含量，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。Ma等[4]研究發(fā)現(xiàn)，與普通豆粕相比，給斷奶仔豬飼喂酶解豆粕后，血清IgM和免疫球蛋白A含量顯著提高，免疫力增強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加酶解蛋白肽可提高斷奶仔豬血清IgG和IgM含量，這說(shuō)明在飼糧中添加酶解蛋白肽可提高斷奶仔豬免疫性能，進(jìn)而改善斷奶仔豬的健康狀況。

3.3 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響

仔豬腸道的健康對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)起著至關(guān)重要的作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，6%和8%酶解蛋白肽添加組斷奶仔豬腸道菌群豐度更高，這說(shuō)明飼糧添加6%和8%酶解蛋白肽有利于提高斷奶仔豬腸道菌群的物種豐富度。alpha多樣性分析可以反映腸道菌群的豐度和多樣性，覆蓋率數(shù)值越高，表示樣本中序列沒(méi)有被測(cè)出的概率越低，進(jìn)而能夠判斷出測(cè)序結(jié)果是否能夠代表樣本的真實(shí)情況；Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)可以大致反映物種總數(shù)；Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)能夠反映樣品中菌群的多樣性，Shannon指數(shù)越大，Simpson數(shù)值越小，表示群落多樣性越高[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加2%和4%酶解蛋白肽能夠顯著提高斷奶仔豬腸道菌群Chao1指數(shù)，這說(shuō)明酶解蛋白肽能夠豐富腸道菌群，提高菌群物種數(shù)量；且當(dāng)添加水平為4%和6%時(shí)，Shannon指數(shù)升高、Simpson指數(shù)降低，表明腸道菌群多樣性有所提高。以上結(jié)果提示，飼糧添加酶解蛋白肽能夠提高斷奶仔豬腸道菌群多樣性，從而增強(qiáng)腸道屏障體系防御能力，保護(hù)仔豬斷奶時(shí)的腸道健康，這也可能是酶解蛋白肽能夠提高斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的原因之一。

表6 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬腸道菌群在門(mén)水平上相對(duì)豐度的影響

本試驗(yàn)對(duì)腸道菌群在門(mén)水平和屬水平上進(jìn)行了分析。在門(mén)水平上的結(jié)果顯示，厚壁菌門(mén)占79.67%，為最主要菌門(mén)；第2位是擬桿菌門(mén)，占12.10%。這兩者是斷奶仔豬腸道菌群中的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)，且在仔豬斷奶之前厚壁菌門(mén)豐度最高，而在斷奶后擬桿菌門(mén)逐漸增加成為最主要的門(mén)類(lèi)[14]。在屬水平上的結(jié)果顯示，飼糧添加酶解蛋白肽能夠顯著降低斷奶仔豬腸道菌群Intestinimonas、狹義梭菌屬和衣原體屬相對(duì)豐度，這三者均屬于腸道有害菌。大腸桿菌過(guò)多，會(huì)和腸道內(nèi)的氨基酸、蛋白質(zhì)作用釋放胺，從而刺激黏膜，加速毒素吸收，提高滲透壓，嚴(yán)重可導(dǎo)致畜禽出現(xiàn)下痢[15-16]；梭菌屬可產(chǎn)生毒素危害機(jī)體[17]；衣原體屬可導(dǎo)致動(dòng)物呼吸系統(tǒng)疾病。酶解蛋白肽的加入可以抑制這3種有害菌的增殖，減少仔豬發(fā)病概率[18]。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，飼糧添加酶解蛋白肽能夠增加腸道有益菌的數(shù)量，即顯著提高腸道菌群中乳酸菌屬和Lachnospiracea_incertae_sedis相對(duì)豐度。乳酸菌屬可產(chǎn)生乳酸，降低腸道環(huán)境pH，從而阻止胃腸內(nèi)一些致病菌的生長(zhǎng)繁殖[19]；毛螺菌屬可利用腸道內(nèi)葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生乙酸等有機(jī)酸，有利于增加腸道內(nèi)有機(jī)酸含量[20-21]。

此外，本試驗(yàn)在對(duì)斷奶仔豬飼糧中添加酶解蛋白肽后糞便中有機(jī)酸含量的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，乳酸、乙酸和丙酸含量均有極顯著升高，這可能與酶解蛋白肽導(dǎo)致的腸道有益菌的增殖有關(guān)。糞便中有機(jī)酸含量越高，表示小腸中有機(jī)酸的分泌量越高，分解發(fā)酵過(guò)程越旺盛。另外，有機(jī)酸還可以改善小腸形態(tài)，提高腸道緊密連接蛋白水平，促進(jìn)飼糧養(yǎng)分的消化吸收，進(jìn)而提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能[22]，這也部分解釋了本試驗(yàn)中飼糧添加酶解蛋白肽能夠促進(jìn)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能提高的結(jié)果。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下，飼糧添加酶解蛋白肽能夠降低斷奶仔豬腹瀉率，提高免疫性能，從而提高生長(zhǎng)性能，且以添加水平為6%～8%時(shí)效果較優(yōu)；這種對(duì)斷奶仔豬的改善效果與豐富腸道菌群多樣性，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，即增加有益菌數(shù)量、降低有害菌數(shù)量有關(guān)。

Unclassified：未分類(lèi)；Acetanaerobacterium：厭氧發(fā)酵產(chǎn)氫細(xì)菌屬；Clostridium_sensu_stricto：狹義梭菌屬；Holdemania：霍爾德曼氏菌屬；Prevotella：普雷沃菌屬；Faecalitalea：屎豆屬菌；Lactobacillus：乳酸菌屬；Enterorhabdus：腸桿菌屬；Butyricicoccus：丁酸球菌屬；Oscillibacter：顫桿菌克屬；Gemmiger：芽殖菌屬；Eubacterium：優(yōu)桿菌屬；Dorea：多爾氏菌屬；Barnesiella：巴氏桿菌屬；Methanobrevibacter：甲烷短桿菌屬；Clostridium Ⅳ：梭狀芽孢桿菌Ⅳ屬；Flavonifractor：黃桿菌屬；Ruminococcus2：瘤胃球菌2屬；Faecalibacterium：糞桿菌屬；Coprococcus：糞球菌屬；Olsenella：歐陸森氏菌屬；Roseburia：羅氏菌屬；Megasphaera：巨球型菌屬；Chlamydia：衣原體屬；Romboutsia：羅姆布茨菌屬；Senegalimassilia：塞內(nèi)加爾馬西利亞屬；Paraprevotella：帕拉普氏菌屬；Clostridium Ⅺ：梭狀芽孢桿菌Ⅺ屬；Phascolarctobacterium：考拉桿菌屬；Blautia：布勞特氏菌屬；Macellibacteroides：屠場(chǎng)桿狀菌屬；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Erysipelothrix：丹毒絲菌屬；Treponema：密螺旋體屬；Slackia：史雷克氏菌屬；Clostridium ⅩⅣa：梭狀芽胞桿菌ⅩⅣa屬；Bulleidia：布雷德菌屬；Collinsella：柯林斯菌屬；Others：其他。

表7 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬腸道菌群在屬水平上相對(duì)豐度的影響

續(xù)表7項(xiàng)目Items酶解蛋白肽添加水平Enzymatic protein peptide supplemental levels/%02468均值標(biāo)準(zhǔn)誤SEMP值P-valueSaccharibacteria_genera_incertae_sedis0.560.900.720.557.061.100.501梭狀芽孢桿菌Ⅳ屬 Clostridium Ⅳ1.190.921.041.063.210.840.519Sporobacter1.430.610.622.851.700.530.548Intestinimonas2.39a1.44b0.95b0.59b0.53b0.080.032衣原體屬 Chlamydia1.40Aa1.04Aa2.19Aa0.38Ab0.29Bb0.660.006其他 Others17.6916.1813.0420.419.458.780.481

表8 酶解蛋白肽對(duì)斷奶仔豬糞便中有機(jī)酸含量的影響