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    以PLA、PHBV為碳源的生物絮團(tuán)技術(shù)在海水養(yǎng)殖中的應(yīng)用

    2022-03-10 05:14:06李曉蕊宋協(xié)法周廣軍董登攀
    漁業(yè)現(xiàn)代化 2022年1期
    關(guān)鍵詞:絮團(tuán)碳氮比鹽度

    李曉蕊,宋協(xié)法,周廣軍,董登攀

    (1 中國海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,山東 青島 266003;2 煙臺市海洋經(jīng)濟(jì)研究院,山東 煙臺 264004)

    生物絮團(tuán)(Biofloc Technology,BFT)是以異養(yǎng)細(xì)菌為主,同時與原生動物、藻類等水體成分混合形成的具有調(diào)節(jié)水質(zhì)功能的絮狀懸浮物[1]。在生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中,需要通過外加碳源以維持異養(yǎng)細(xì)菌的生長,碳源的種類和數(shù)量很大程度上決定了絮體的形成[2]。傳統(tǒng)碳源如葡萄糖[3]、米糠[4]、木薯粉[5]、蜜糖[6]、玉米淀粉[7]、淀粉[8]、甘蔗渣[9]等降解速度快,需要頻繁添加,容易出現(xiàn)碳源不足或過量情況,對養(yǎng)殖水體造成新的污染,對系統(tǒng)處理造成過高的負(fù)荷。生物可降解聚合物如3-羥基丁酸-co-3-羥基戊酸共聚物(poly3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate,PHBV)、聚-β-羥丁酸(poly-hydroxybutyrate,PHB)、聚己內(nèi)酯(polycaprolactone,PCL)可緩慢釋放有機(jī)碳源,被證明能夠?yàn)樯镄鯃F(tuán)建立提供穩(wěn)定的有機(jī)碳源[10-11]。研究表明,生物絮團(tuán)系統(tǒng)中添加PHB,可促進(jìn)羅非魚(Oreochromismossanbicus)[12]、南美白對蝦(Litopenaeusvannamei)[13]等的生長和抗病性的提高,但在碳源添加規(guī)律和海水養(yǎng)殖中的應(yīng)用卻鮮有研究。若將生物可降解聚合物作為碳源用于海水養(yǎng)殖中,鹽度對其有機(jī)碳的釋放勢必是最為關(guān)鍵的一環(huán)。本研究選取聚乳酸(PLA)和3-羥基丁酸-co-3-羥基戊酸共聚物(PHBV) 作為外加碳源,探究在模擬海水生物絮團(tuán)養(yǎng)殖中,不同鹽度下,碳源有機(jī)碳釋放規(guī)律,以及PLA與PHBV對于海水生物絮團(tuán)養(yǎng)殖中水質(zhì)、微生物群落多樣性及其結(jié)構(gòu)的影響,為生物可降解聚合物作為外加碳源的生物絮團(tuán)技術(shù)在海水養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)裝置

    本研究采用6個PE材料反應(yīng)器(下口入水,上口出水)并聯(lián)運(yùn)行的方式,每個反應(yīng)器有效容積約2 L,內(nèi)部懸掛添加PLA或PHBV 20 g,設(shè)置水體鹽度為10、20、30,共設(shè)6個試驗(yàn)組,反應(yīng)器鹽度設(shè)置如表1。反應(yīng)器內(nèi)采用納米管持續(xù)曝氣,保證水體中溶氧為5.30~6.00 mg/L ,利用加熱棒將溫度控制在21.87±0.29℃,試驗(yàn)用水為人工配制的海水養(yǎng)殖廢水。

    表1 生物反應(yīng)器條件設(shè)置

    1.2 人工配制的海水養(yǎng)殖廢水

    殘飼糞便取自威海圣航水產(chǎn)科技有限公司的大菱鲆養(yǎng)殖系統(tǒng),經(jīng)自然風(fēng)干后于烘箱內(nèi)65℃烘干12 h,烘干后的殘飼糞便使用研磨機(jī)粉碎。配水時取500 g溶于少量水后發(fā)酵3 d,經(jīng)300目篩絹過濾,將浸出液倒入體積約65 L的水桶中混勻,棄去殘渣,測定水質(zhì)指標(biāo)后按照比例用來自青島近海經(jīng)砂濾的純凈海水稀釋作為試驗(yàn)用水[14]。

    1.3 試驗(yàn)過程

    1.3.1 反應(yīng)器搭建

    反應(yīng)器采用納米管曝氣,利用蠕動泵(設(shè)置水力停留時間為5 d)補(bǔ)充自然蒸發(fā)水和養(yǎng)殖物耗水,設(shè)置海水養(yǎng)殖廢水中的氨氮質(zhì)量濃度為2 mg/L,為加快反應(yīng)器中生物絮團(tuán)的產(chǎn)生,分別在反應(yīng)器中加入2 g復(fù)合芽孢桿菌,穩(wěn)定4 d。

    1.3.2 探究PLA與PHBV的碳源添加規(guī)律

    設(shè)備穩(wěn)定4 d后,從第5天開始,進(jìn)行樣品采集和檢查。根據(jù)水體中各項指標(biāo)的變化,通過加入碳酸鈉控制水體中的pH在8.0以上,通過后期添加相應(yīng)的PLA或PHBV以調(diào)節(jié)C/N(用COD表示水體中的碳含量,用氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮的總和表示水體中的氮含量)。在試驗(yàn)進(jìn)行到45 d時對水體中的沉積生物絮團(tuán)清理,試驗(yàn)持續(xù)90 d。

    1.3.3 樣品采集與檢測

    1.3.3.1 水質(zhì)檢測

    每3 d在早上9:00到9:30采用取樣管分別在反應(yīng)器周邊和中心選取5個點(diǎn)進(jìn)行取樣,每次取樣50 mL,使用離心機(jī)離心(4 000 r/min)5 min后進(jìn)行水質(zhì)指標(biāo)檢測。使用YSI檢測水環(huán)境中的溫度、鹽度、pH、溶氧(DO)。總氨氮、亞硝酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽以及化學(xué)需氧量(COD)指標(biāo)測定參照GB 173784—2007《海洋監(jiān)測規(guī)范海水分析》[15],總氨氮檢測方法為納氏試劑法,亞硝酸鹽檢測方法為鹽酸萘乙二胺法,硝酸鹽檢測方法為鋅鎘還原法,磷酸鹽檢測方法為磷鉬藍(lán)分光光度法,COD檢測方法為高錳酸鉀氧化法。

    1.3.3.2 生物絮團(tuán)指標(biāo)測定

    取100~200 mL水樣使用沉淀漏斗(量程1 000 mL,精度0.01,Nalgene)經(jīng)過30 min沉淀,統(tǒng)計生物絮團(tuán)沉積量[2],總固體顆粒懸浮物采用CJ/T 52—1999《城市污水懸浮固體的測定》[16],取水樣50~100 mL,使用0.45 μm混合濾膜抽濾后,于105℃烘箱烘干后稱重。

    1.3.3.3 微生物群落分析

    試驗(yàn)前期(11月15日)、中期(12月20日)、后期(1月27日)系統(tǒng)穩(wěn)定時在6個反應(yīng)器周邊和中心取生物絮團(tuán)質(zhì)量濃度較高的底層水樣,置于沉淀漏斗中,取沉淀物進(jìn)行抽濾后,留取抽濾后濾膜,共取樣18個。

    利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測抽提的基因組DNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,按指定測序區(qū)域,合成帶有barcode的特異引物。為保證后續(xù)數(shù)據(jù)分析的準(zhǔn)確性及可靠性,盡可能使用低循環(huán)數(shù)擴(kuò)增;保證每個樣本擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)一致。隨機(jī)選取具有代表性的樣本進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),確保在最低循環(huán)數(shù)中使絕大多數(shù)樣本能夠擴(kuò)增出質(zhì)量濃度合適的產(chǎn)物。構(gòu)建Miseq文庫,進(jìn)行Miseq測序。

    1.4 數(shù)據(jù)記錄與處理

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel與SPSS 20.0記錄和處理,并作圖。微生物群落分析使用Flash 1.2.11進(jìn)行pair-end雙端序列拼接處理,使用Qiime 1.9.1生成各分類學(xué)水豐度表,進(jìn)行beta多樣性距離計算,使用Uparse 7.0.1090和Usearch 7.0進(jìn)行OTU聚類與OTU統(tǒng)計分析,使用RDP Classifier 2.11進(jìn)行序列分類注釋,使用Mothur 1.30.2進(jìn)行alpha多樣性分析,微生物數(shù)據(jù)庫選擇SILVA132 rRNA數(shù)據(jù)庫,利用Fastp 0.19.6進(jìn)行質(zhì)控。

    2 結(jié)果

    2.1 不同鹽度下以PLA與PHBV為碳源的系統(tǒng)中水質(zhì)指標(biāo)的變化

    不同鹽度下以PLA與PHBV為碳源的系統(tǒng)中,水質(zhì)指標(biāo)氨氮、硝酸鹽、亞硝酸鹽和磷酸鹽質(zhì)量濃度及相關(guān)性見表2,變化情況見圖1。

    表2 不同鹽度下以PLA與PHBV為碳源的系統(tǒng)中水質(zhì)指標(biāo)

    圖1 不同鹽度下以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中水質(zhì)參數(shù)的變化

    在試驗(yàn)前期,無論是以PLA還是以PHBV為外加碳源的系統(tǒng)中,鹽度越低,氨氮質(zhì)量濃度越低,說明試驗(yàn)前期,低鹽度系統(tǒng)更有利于生物絮團(tuán)系統(tǒng)處理水體中的氨氮,低鹽度系統(tǒng)中,PLA、PHBV試驗(yàn)組前期環(huán)境平均氨氮質(zhì)量濃度最低,分別為12.82 mg/L、8.08 mg/L;在試驗(yàn)中期,氨氮質(zhì)量濃度趨于穩(wěn)定,鹽度不再成為生物絮團(tuán)處理氨氮的影響因素;在試驗(yàn)后期,氨氮質(zhì)量濃度與系統(tǒng)鹽度的關(guān)系呈現(xiàn)出與前期相反的變化趨勢,高鹽度系統(tǒng)中,PLA、PHBV試驗(yàn)組前期環(huán)境平均氨氮質(zhì)量濃度最低,分別為4.20 mg/L、3.22 mg/L;在試驗(yàn)全過程,以PHBV為外加碳源的系統(tǒng)相較于以PLA為外加碳源的系統(tǒng)在同一鹽度組中,都呈現(xiàn)出較好的氨氮處理效果。硝酸鹽質(zhì)量濃度與亞硝酸鹽在試驗(yàn)全過程都呈現(xiàn)出上升趨勢,硝酸鹽質(zhì)量濃度呈直線上升,亞硝酸鹽質(zhì)量濃度在后期變化較平緩,其中,中鹽度系統(tǒng)中增長速度最快。在試驗(yàn)全過程,磷酸鹽能夠有效被處理,最終保持在0.01 mg/L以下。

    2.2 不同鹽度以PLA與PHBV為碳源的系統(tǒng)中碳源的釋放規(guī)律

    不同鹽度以PLA與PHBV為碳源的系統(tǒng)中,碳氮比變化見圖2。

    圖2 不同鹽度下以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中碳氮比的變化

    在試驗(yàn)全過程,無論是以PLA還是以PHBV為外加碳源的系統(tǒng),碳氮比都高于4,能夠?yàn)橄到y(tǒng)提供足夠的有機(jī)碳源。在試驗(yàn)初期,以PHBV為外加碳源的系統(tǒng)碳氮比要高于同鹽度組以PLA為外加碳源的,與氨氮處理效率相對應(yīng);在試驗(yàn)中期,除以PLA為外加碳源高鹽度系統(tǒng)碳氮比一直在上升外,其他系統(tǒng)都出現(xiàn)了一定程度的下降;在試驗(yàn)后期,除以PHBV為外加碳源中鹽度系統(tǒng)碳氮比一直在下降外,其他系統(tǒng)都出現(xiàn)了上升,最終以PLA為外加碳源的系統(tǒng)碳氮比都高于同鹽度組以PHBV為外加碳源的系統(tǒng)。在試驗(yàn)全過程,無論是以PLA還是以PHBV為外加碳源的系統(tǒng),低鹽度組與高鹽度組的碳氮比較高,中鹽度組的碳氮比較低。

    2.3 不同鹽度下以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中生物絮團(tuán)形成

    PLA與PHBV作為外加碳源都會促進(jìn)生物絮團(tuán)的形成。每一個系統(tǒng)中總固體顆粒懸浮物量都呈現(xiàn)出先增后減的趨勢。

    圖3 不同鹽度下以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中生物絮團(tuán)沉積量的變化

    圖4 不同鹽度下以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中總固體顆粒懸浮物量的變化

    以PLA為外加碳源低鹽度、以PLA為外加碳源中鹽度、以PHBV為外加碳源低鹽度、以PHBV為外加碳源高鹽度系統(tǒng)中,生物絮團(tuán)沉積量的變化呈現(xiàn)出與總固體顆粒懸浮物相同的先增后減的變化趨勢,以PLA為外加碳源的高鹽度系統(tǒng)和以PHBV為外加碳源的中鹽度系統(tǒng)生物絮團(tuán)沉積量呈現(xiàn)出一直上升的變化趨勢。

    2.4 不同鹽度下以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中微生物群落多樣性及結(jié)構(gòu)分析

    2.4.1 微生物群落的多樣性指數(shù)分析

    對樣品的進(jìn)行微生物群落多樣性指數(shù)分析(表3),所有樣品的覆蓋率(coverage)在99.5%以上,說明能夠覆蓋99.5%以上的細(xì)菌。樣品多樣性指數(shù)(Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù))可以得到以PLA為外加碳源的試驗(yàn)組與以PHBV為外加碳源的試驗(yàn)組多樣性相差不大,整體多樣性較低,Chao1指數(shù)表明,兩組試驗(yàn)菌群豐度相差不大,整體較低。

    表3 微生物群落中生物覆蓋和多樣性指數(shù)對比

    2.4.2 微生物群落結(jié)構(gòu)分析

    通過對樣品進(jìn)行門水平的細(xì)菌門類及其相對豐度的分析,共獲得9個重要菌門(圖5),分別為變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidota)、放線菌門(Actinobacteriota)、綠彎菌門(Chloroflexi)、疣微菌門(Verrucomicrobiota)、藍(lán)藻門(Cyanobacteria)、類浮霉?fàn)罹T(Planctomycetota)、髕骨細(xì)菌門(Patescibacteria),占群落微生物數(shù)量的99%以上,其中變形菌門(Proteobacteria)為優(yōu)勢菌,占群落微生物的40%,以PLA為外加碳源的系統(tǒng)中的優(yōu)勢菌豐度占比略大于以PHBV為外加碳源的系統(tǒng),兩種外加碳源系統(tǒng)中變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidota)和放線菌門(Actinobacteriota)4種菌豐度占有絕對優(yōu)勢,為80%~90%。

    圖5 以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中優(yōu)勢菌門及其相對豐度

    圖6所示,在屬水平上,有50%左右的細(xì)菌屬于無法分類和豐度極低的細(xì)菌。在以PLA為外加碳源系統(tǒng)和以PHBV為外加碳源系統(tǒng)中,優(yōu)勢菌群均為芽孢桿菌屬(Bacillus),豐度占比在20%左右,以PLA為外加碳源系統(tǒng)要略高于以PHBV為外加碳源系統(tǒng)。此外,在以PLA為外加碳源系統(tǒng)中,未分類微桿菌科(umclassified-Microbacteriaceae)、鼠尾菌屬(Muricauda)、象牙白棲東海菌屬(Donghicola)、Roseibaca、海桿菌屬(Marinobactersp.)、Methyloligellaceae豐度較高,在以PHBV為外加碳源系統(tǒng)中未分類微桿菌科(umclassified-Microbacteriaceae)、鼠尾菌屬(Muricauda)、Roseibaca豐度較高。

    圖6 以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中優(yōu)勢菌屬及其相對豐度

    圖7所示,在以PLA為外加碳源的系統(tǒng)中,除在低中高鹽度的系統(tǒng)中都有約30%~40%的無法分類和豐度極低的物種外,在低鹽度系統(tǒng)和中鹽度系統(tǒng)中,芽孢桿菌屬(Bacillus)都為優(yōu)勢菌屬,豐度為20%~30%,中鹽度系統(tǒng)中芽孢桿菌屬(Bacillus)豐度略高于低鹽度系統(tǒng),在高鹽度系統(tǒng)中芽孢桿菌屬(Bacillus)與象牙白棲東海菌屬(Donghicola)豐度相差不多,在15%左右,芽孢桿菌屬(Bacillus)豐度明顯低于低中鹽度系統(tǒng)。

    圖7 以PLA為碳源的系統(tǒng)中優(yōu)勢菌屬及其相對豐度

    圖8所示,在以PHBV為外加碳源的系統(tǒng)中,在低中高鹽度的系統(tǒng)中都有約30%~40%的無法分類和豐度極低的物種外,在低中高鹽度系統(tǒng)中,芽孢桿菌屬(Bacillus)都為優(yōu)勢菌屬,豐度為15%~25%,其中芽孢桿菌屬(Bacillus)豐度較高的為低鹽度和高鹽度系統(tǒng),在中鹽度系統(tǒng)中,未分類微桿菌科(unclassified-Microbacteriaceae)為相對豐度第二高的菌科,約為5%。

    圖8 以PHBV為碳源的系統(tǒng)中優(yōu)勢菌屬及其相對豐度

    3 討論

    3.1 不同鹽度下以PLA與PHBV分別為碳源的系統(tǒng)中水質(zhì)指標(biāo)的變化

    通過試驗(yàn)結(jié)果可以得知,低鹽度的環(huán)境有利于生物絮團(tuán)系統(tǒng)的建立,這表現(xiàn)在無論是以PHBV還是以PLA為碳源的系統(tǒng)中,低鹽度的系統(tǒng)在試驗(yàn)初期的氨氮處理和保持效果優(yōu)于中高鹽度,這一結(jié)果表明鹽度在海水生物絮團(tuán)養(yǎng)殖中是不可或缺的重要條件且會對生物絮團(tuán)系統(tǒng)的建立速度產(chǎn)生影響,中后期3種鹽度系統(tǒng)中氨氮的處理和保持效果逐漸趨于一致,說明鹽度只會對生物絮團(tuán)系統(tǒng)的建立速度產(chǎn)生影響而不會對后期處理效果產(chǎn)生影響。亞硝酸鹽和硝酸鹽在兩種碳源的中鹽度系統(tǒng)中的異??焖僭鲩L同樣說明中鹽度系統(tǒng)對于亞硝酸鹽和硝酸鹽的轉(zhuǎn)化過程相較于低高鹽度系統(tǒng)處理速度更加緩慢。氨氮、亞硝酸鹽和硝酸鹽的變化證明PHBV碳源的釋放和處理效率要高于PLA碳源。生物絮團(tuán)系統(tǒng)中磷酸鹽的變化也說明在生物絮團(tuán)系統(tǒng)中除氨氮外,磷酸鹽也能夠被有效利用。

    在生物絮團(tuán)系統(tǒng)中,會出現(xiàn)3種氨氮轉(zhuǎn)化反應(yīng),第1種是異養(yǎng)細(xì)菌以氨氮為氮源、以有機(jī)碳為碳源合成自身菌體蛋白[17];第2種是自養(yǎng)硝化細(xì)菌以氨氮為氮源、以碳酸氫根為碳源合成自身菌體蛋白[17-18];第3種是反硝化細(xì)菌以硝酸鹽為氮源、以有機(jī)碳為碳源合成自身菌體蛋白[17]。根據(jù)水質(zhì)指標(biāo)的變化得知:水體中的氨氮產(chǎn)生了第1種[17]的反應(yīng),且在大多數(shù)生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中都會出現(xiàn)硝酸鹽的積累現(xiàn)象。黎爽等[20]在探究光照強(qiáng)調(diào)對凡納濱對蝦生物絮團(tuán)養(yǎng)殖的影響中,也在試驗(yàn)后期出現(xiàn)了硝酸鹽的積累,最高質(zhì)量濃度達(dá)到了16 mg/L;Samocha等[21]曾在不換水集約化跑道式養(yǎng)殖系統(tǒng)中硝酸鹽質(zhì)量濃度最高達(dá)到了400 mg/L;Wu等[22]在生物絮團(tuán)凡納濱對蝦養(yǎng)殖系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn),養(yǎng)殖11周后,水體中硝酸鹽質(zhì)量濃度從0 mg/L積累到16 mg/L。在本試驗(yàn)中,除PHBV碳源組中鹽度系統(tǒng)中在后期達(dá)到16 mg/L以外,其他試驗(yàn)組為6~8 mg/L,要低于養(yǎng)殖系統(tǒng)中的硝酸鹽質(zhì)量濃度,可能與反應(yīng)系統(tǒng)中沒有養(yǎng)殖種參與整個生物絮團(tuán)系統(tǒng)構(gòu)建,氮源的提供主要依靠模擬養(yǎng)殖廢水有關(guān)。

    3.2 不同鹽度下以PLA與PHBV為碳源的系統(tǒng)中外加碳源的釋放規(guī)律

    碳氮比的變化不僅反應(yīng)碳源的釋放情況,同時還反應(yīng)水體中氮含量的變化。整個試驗(yàn)過程,氨氮變化不明顯、亞硝酸鹽和硝酸鹽質(zhì)量濃度一直在上升,除PLA碳源高鹽度組外,其他組在試驗(yàn)中期出現(xiàn)的碳氮比減小說明氮含量在上升,但有機(jī)碳釋放量減少并不明顯,而在后期,PLA和PHBV兩種碳源都能很好地適應(yīng)氮含量的增加,相應(yīng)增加有機(jī)碳的釋放,這也從另一個方向反映出,PLA和PHBV作為生物絮團(tuán)系統(tǒng)中的外加碳源在提供有機(jī)碳方面強(qiáng)大的適應(yīng)性,相比于傳統(tǒng)碳源的人工調(diào)節(jié),PLA和PHBV根據(jù)養(yǎng)殖水體需求做出的自動化調(diào)整具有重要的意義。在碳氮比變化上,PHBV碳源在同時期相較于PLA碳源更加有利于水體中碳氮比的保持和調(diào)節(jié),具有一定的優(yōu)越性。

    在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中,碳氮比在工廠化養(yǎng)殖的各種模式中都具有重要意義,合理的碳氮比能夠促進(jìn)微生物群落、藻類的生長生活,引導(dǎo)微生物群落的發(fā)展朝著需要適合養(yǎng)殖需要的方向發(fā)展,對于整個水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)具有重要意義。在生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中,碳氮比的檢測與控制尤為重要。金毅等[23]在生物絮團(tuán)日本沼蝦養(yǎng)殖中,發(fā)現(xiàn)生物絮團(tuán)的產(chǎn)生和水質(zhì)處理在碳氮比為20時最佳,碳氮比為25或15時欠佳,碳氮比為10時基本不會產(chǎn)生生物絮團(tuán),日本沼蝦的特定生長率也是在碳氮比為20時最佳;魏繼紅[24]在控制養(yǎng)殖水體絮體質(zhì)量濃度的情況下發(fā)現(xiàn),在總固體顆粒懸浮物量為500 mg/L時,碳氮比20時對氨氮、亞硝酸鹽的去除率最大,但各組顯著性較低;王廣軍等[25]在零換水雜交鱧稚魚養(yǎng)殖中發(fā)現(xiàn)當(dāng)碳氮比大于等于10時可以形成較多的生物絮團(tuán)并達(dá)到調(diào)控水質(zhì)的目的,但當(dāng)碳氮比超過15時會對雜交鱧稚魚產(chǎn)生不利影響;孫盛明等[26]通過對零換水團(tuán)頭魴養(yǎng)殖的研究發(fā)現(xiàn)碳氮比影響水體生物絮團(tuán)的形成并會改變團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu);盧炳國等[27]在草魚池生物絮團(tuán)形成的研究中發(fā)現(xiàn)當(dāng)碳氮比大于等于15時,形成的生物絮團(tuán)可以有效地調(diào)節(jié)水質(zhì)。通過以上可以了解到碳氮比在不同養(yǎng)殖種的養(yǎng)殖水體中適合的碳氮比不同,在本試驗(yàn)中,由于系統(tǒng)中沒有養(yǎng)殖動物的參與,碳氮比相對較高。

    3.3 不同鹽度下以PLA與PHBV為碳源的系統(tǒng)中微生物群落多樣性及結(jié)構(gòu)分析

    在生物絮團(tuán)技術(shù)中,一般使用芽孢桿菌或EM菌微生態(tài)制劑來誘導(dǎo)生物絮團(tuán)的生成,加快生物絮團(tuán)的產(chǎn)生生物絮團(tuán)系統(tǒng)中微生物群落的演變以及結(jié)構(gòu)的研究有利于引導(dǎo)生物絮團(tuán)技術(shù)走向更加精確的養(yǎng)殖方向。王博等[28]在墨吉明對蝦生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中設(shè)置不同養(yǎng)殖密度進(jìn)行試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),系統(tǒng)中微生物群落的豐富度和多樣性會隨著養(yǎng)殖密度的增加而增加;秦海鵬等[29]通過高通量測序發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)中微生物的菌群豐度和多樣性都隨著養(yǎng)殖周期的增加而增加,在門水平上,變形菌門(Proteobacteria)的豐度逐漸下降,與本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)微生物群落的發(fā)展在前期是向著生物群落多樣性逐漸上升、微生物種類逐漸增加的方向發(fā)展的結(jié)論一致;廖栩崢等[30]在凡納濱對蝦生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中同樣發(fā)現(xiàn)變形菌門(Proteobacteria)豐度最高;郭小澤等[31]在以糖蜜為碳源的草魚生物絮團(tuán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)變形菌門(Proteobacteria)豐度占比較高。由此可知生物絮團(tuán)系統(tǒng)中,在一般情況下,變形菌門(Proteobacteria)的豐度較高,在大部分情況是其優(yōu)勢種,接下來對于變形菌門(Proteobacteria)在生物絮團(tuán)系統(tǒng)中重要作用進(jìn)行研究十分重要。在本試驗(yàn)中,微生物群落系統(tǒng)在門水平上,變形菌門(Proteobacteria)占有絕對優(yōu)勢,在屬水平上,就碳源種類而言,芽孢桿菌屬(Bacillus)在PLA碳源系統(tǒng)中較高于PHBV碳源系統(tǒng),這同樣也驗(yàn)證了PLA碳源系統(tǒng)中微生物群落的發(fā)展較落后于PHBV碳源系統(tǒng)中。

    在PLA碳源系統(tǒng)中,高鹽度系統(tǒng)中,象牙白棲東海菌屬(Donghicola)這種只存在于兩個高鹽度系統(tǒng)中的菌屬異常升高,與芽孢桿菌屬(Bacillus)共同構(gòu)成了更加穩(wěn)定的海水生物絮團(tuán)系統(tǒng);在PHBV碳源系統(tǒng)中,象牙白棲東海菌屬(Donghicola)雖然存在但豐度較小。兩個系統(tǒng)中的象牙白棲東海菌屬(Donghicola)的含量對比可以初步推測PLA碳源高鹽度系統(tǒng)在后期的微生物群落完善要快于PHBV碳源高鹽度系統(tǒng)。

    4 結(jié)論

    PLA與PHBV生物可降解聚合物都可以用于生物絮團(tuán)技術(shù)在海水養(yǎng)殖中進(jìn)行應(yīng)用,PHBV的水質(zhì)處理效果和系統(tǒng)建立速度要優(yōu)于PLA;低鹽度更有利于生物絮團(tuán)系統(tǒng)的建立。在微生物群落建立中,在高鹽度系統(tǒng)中會出現(xiàn)象牙白棲東海菌屬(Donghicola)與芽孢桿菌屬(Bacillus)相互配合形成穩(wěn)定系統(tǒng)的情況,PLA碳源組表現(xiàn)更為明顯,另外象牙白棲東海菌屬(Donghicola)只存在于高鹽度系統(tǒng)中。

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