微波協(xié)同L-苯丙氨酸處理對苦蕎萌發(fā)中黃酮的影響

許先猛，卞紫秀，王順民, ，陸 寧，張慧敏，王俊珍

（1.亳州學院生物與食品工程系，安徽亳州 236800；2.藥食同源功能食品亳州市重點實驗室，安徽亳州 236800；3.安徽工程大學生物與食品工程學院，安徽蕪湖 241000；4.四川省涼山州西昌農(nóng)業(yè)科學研究所，四川西昌 615000）

苦蕎（Tartary buckwheat）是一種蓼科蕎麥屬雙子葉植物，富含黃酮、多肽、植物甾醇等生物活性成分[1?2]。苦蕎中黃酮類化合物含量豐富[3?5]，這是苦蕎區(qū)別于其它禾谷類作物的顯著特征?？嗍w萌發(fā)后黃酮類化合物含量顯著增加，提高了其芽苗的營養(yǎng)價值和保健作用[6]。黃酮類化合物是苦蕎在萌發(fā)過程中產(chǎn)生的一類次生代謝產(chǎn)物，其合成途徑受光[7]、磁場[8]、激素、鹽脅迫等逆境因子調(diào)控。

微波屬于一種電磁波，能夠引發(fā)生物體內(nèi)的生理生化反應(yīng)[9]，微波非熱效應(yīng)還能夠改變細胞膜表面的電荷密度和膜內(nèi)外電壓變化。近年來，國內(nèi)學者[10?14]開展了大量關(guān)于微波處理提高種子活力和生物量積累的研究工作，包括冰草、苜蓿、大豆、黃豌豆和蔬菜等。研究表明，微波處理苦蕎能夠?qū)ζ涿劝l(fā)產(chǎn)生一定生物效應(yīng)，從而促進種子的萌發(fā)和萌發(fā)過程中黃酮類物質(zhì)的合成[15]。植物代謝過程中的黃酮類物質(zhì)是以苯丙烷類物質(zhì)作為底物，在苯丙氨酸解氨酶（PAL）、查爾酮異構(gòu)酶（CHI）和黃酮醇合酶（FLS）等多種酶的作用下合成[16]。苯丙氨酸（Phenylalanine,Phe）屬于芳香族氨基酸，是苯丙烷代謝的前體物質(zhì)，對植物的苯丙烷代謝起著重要作用[15]。Seo等[17]研究指出，添加外源5 mmol/L的L-苯丙氨酸（Lphenylalanine，L-Phe）能夠顯著促進苦蕎麥芽中酚類單體及總酚類化合物的合成。目前，采用單一微波處理或者L-Phe處理促進種子萌發(fā)和富集黃酮研究較多，但微波協(xié)同L-Phe處理苦蕎種子促進發(fā)芽苦蕎富集黃酮類化合物等研究鮮見報道。

本課題組前期研究表明[15]，在微波功率400 W條件下處理10 s協(xié)同5 mmol/L L-Phe處理下，萌發(fā)第7 d苦蕎芽中黃酮含量為5.1 g/100 g。為確定微波協(xié)同L-Phe處理下苦蕎萌發(fā)富集黃酮的最佳工藝，本研究進一步考察了微波時間、微波功率、不同濃度L-Phe營養(yǎng)液處理對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮類物質(zhì)富集的影響，并通過響應(yīng)面設(shè)計法優(yōu)化微波協(xié)同LPhe處理對苦蕎萌發(fā)富集黃酮的工藝條件。采用高效液相色譜法對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮成分進行分析，初步明確苦蕎芽中部分黃酮成分和含量，以期為微波協(xié)同L-Phe促進苦蕎萌發(fā)富集黃酮的機理研究提供參考，為苦蕎芽產(chǎn)品和富含苦蕎芽黃酮類化合物功能食品的開發(fā)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

川蕎1號苦蕎種子 產(chǎn)自四川涼山，購買當年產(chǎn)、自然陰干的苦蕎種子，置于4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆?；L-Phe 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；綠原酸、牡荊素 色譜純，中國藥品生物藥品檢定所；蘆丁標準品 色譜純，北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司；氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、乙醇、牛血清白蛋白、3,5-二硝基水楊酸、蔗糖、葡萄糖、苯酚和濃硫酸

分析純，國藥集團化學試劑有限公司；高錳酸鉀分析純，宿州化學試劑廠。

P4543-1風力懸浮控溫微波裝置 安徽工程大學與蕪湖眾維教研儀器研發(fā)公司共同研發(fā)；YRG-300光照種子發(fā)芽箱 上海臺恒儀器設(shè)備有限公司；LGJ-10真空冷凍干燥機 北京松源華興科技有限公司；Waters2487高效液相色譜儀 美國Waters公司；L3S可見分光光度計 上海儀電分析儀器有限公司；JY1002電子天平 上海精密科學儀器有限公司；KS-100DE液晶超聲波清洗器 昆山潔力美超聲儀器有限公司；TGL-16A醫(yī)用離心機 長沙平凡儀器儀表有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 苦蕎種子預(yù)處理 苦蕎種子預(yù)處理參照趙強等[18]方法，并略做調(diào)整：選取顆粒飽滿、均勻、無霉變的苦蕎種子適量，1.0 g/L高錳酸鉀溶液消毒，消毒時間5 min，蒸餾水沖洗，然后在室溫條件下用蒸餾水浸泡催芽4 h，中間換一次水。催芽后過濾，濾紙吸除苦蕎種子表面水分，備用。

1.2.2 苦蕎萌發(fā)富集黃酮 定量稱取催芽后苦蕎種子，采用一定微波功率，分別微波處理一定時間，微波溫度為（40±2）℃。然后，將種子均勻平鋪于發(fā)芽盤上，發(fā)芽盤底盤裝入營養(yǎng)液，營養(yǎng)液為一定濃度的L-Phe溶液，營養(yǎng)液液面剛剛接觸發(fā)芽盤鋪種盤，每24 h更換一次營養(yǎng)液，發(fā)芽盤置于種子發(fā)芽箱（25 ℃，75%±5% RH）中避光培養(yǎng)7 d，以未經(jīng)微波處理的苦蕎種子組為對照，分別取培養(yǎng)1、3、5、7 d的苦蕎芽進行指標測定。

1.2.3 單因素實驗

1.2.3.1 微波時間對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量影響定量稱取催芽后苦蕎種子，采用微波功率300 W，分別處理25、50、75和100 s，微波溫度為（40±2）℃。然后，將種子均勻平鋪于發(fā)芽盤上，發(fā)芽盤底盤裝入營養(yǎng)液，營養(yǎng)液為0 mmol/L的L-Phe溶液（蒸餾水），營養(yǎng)液液面剛剛接觸發(fā)芽盤鋪種盤，每24 h更換一次營養(yǎng)液，發(fā)芽盤置于種子發(fā)芽箱（25 ℃，75%±5% RH）中避光培養(yǎng)7 d，以未經(jīng)微波處理的苦蕎種子組為對照，分別取培養(yǎng)1、3、5、7 d的苦蕎芽進行指標測定。

1.2.3.2 微波功率對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量影響定量稱取催芽后苦蕎種子，分別采用微波功率200、300、400和500 W處理50 s，微波溫度為（40±2）℃。然后，將種子均勻平鋪于發(fā)芽盤上，發(fā)芽盤底盤裝入營養(yǎng)液，營養(yǎng)液為0 mmol/L的L-Phe溶液（蒸餾水），營養(yǎng)液液面剛剛接觸發(fā)芽盤鋪種盤，每24 h更換一次營養(yǎng)液，發(fā)芽盤置于種子發(fā)芽箱（25 ℃，75%±5% RH）中避光培養(yǎng)7 d，以未經(jīng)微波處理的苦蕎種子組為對照，分別取培養(yǎng)1、3、5、7 d的苦蕎芽進行指標測定。

1.2.3.3 L-Phe濃度對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量影響定量稱取催芽后苦蕎種子，將種子均勻平鋪于發(fā)芽盤上（不進行微波處理），發(fā)芽盤底盤裝入營養(yǎng)液，營養(yǎng)液為0、1、2、3、4、5 mmol/L的L-Phe溶液，營養(yǎng)液液面剛剛接觸發(fā)芽盤鋪種盤，每24 h更換一次營養(yǎng)液，發(fā)芽盤置于種子發(fā)芽箱（25 ℃，75%±5% RH）中避光培養(yǎng)7 d，分別取培養(yǎng)1、3、5、7 d的苦蕎芽進行指標測定。

1.2.4 苦蕎萌發(fā)富集黃酮響應(yīng)面試驗設(shè)計 以苦蕎芽中黃酮含量為指標，采用Design expert軟件CCD響應(yīng)面分析法，對微波功率、微波時間、營養(yǎng)液LPhe濃度3個因素進行響應(yīng)面設(shè)計，研究各因素及各因素交互所用對苦蕎芽中黃酮含量的影響，并采用二次多項式回歸方程進行模型預(yù)測，以優(yōu)化微波協(xié)同L-Phe處理苦蕎萌發(fā)富集黃酮的最佳工藝條件。試驗因素水平表見表1。

1.2.5 苦蕎芽中黃酮含量的測定 采用亞硝酸鈉-硝酸鋁顯色法[19?20]測定苦蕎芽中黃酮含量?？嗍w芽于?40 ℃溫度下真空冷凍干燥48 h，準確稱取0.5 g苦蕎芽凍干干樣，置于研缽中充分粉碎，加入5 mL 60%乙醇溶液，置于350 W超聲功率下恒溫（50 ℃）提取0.5 h，然后在8000 r/min離心10 min，取上清液；沉淀物加入5 mL 60%乙醇溶液再次提取，連續(xù)提取三次，合并提取液，并定容至25 mL，備用。以不加樣液為對照，在波長為502 nm處測定吸光度值。以蘆丁標準品繪制標準曲線，結(jié)果以每克苦蕎芽中所含蘆丁當量表示（g/100 g）測定樣品（干基）中黃酮的含量。

1.2.6 苦蕎芽黃酮成分高效液相色譜（HPLC）分析

1.2.6.1 測定波長選擇 研究表明，苦蕎萌發(fā)后黃酮中含量較高的成分有蘆丁、綠原酸、牡荊素等[21]，因此本研究用紫外分光光度計對標準品蘆丁、綠原酸、牡荊素溶液分別進行全波長紫外掃描。得到各單酚在紫外區(qū)的最大吸收波長，進一步確定最佳測定波長。

1.2.6.2 混合標準品溶液配制 分別精確稱取標準品10.0 mg綠原酸、3.0 mg牡荊素、5.0 mg蘆丁于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得到1.0 mg/mL綠原酸、0.3 mg/mL牡荊素、0.5 mg/mL蘆丁的混合標準品溶液，避光冷藏，備用。

1.2.6.3 樣品溶液制備 苦蕎種子經(jīng)消毒、催芽，采用微波功率250 W處理90 s，微波溫度為（40±2）℃，在溫度25 ℃，濕度75%±5% RH條件下避光培養(yǎng)7 d，發(fā)芽盤底盤中裝入2.90 mmol/L的L-Phe溶液作為營養(yǎng)液。取培養(yǎng)萌發(fā)7 d苦蕎芽，在?40 ℃溫度下真空冷凍干燥48 h，將苦蕎芽干樣置于研缽中充分粉碎。精確稱取2.5 g（精確到0.0001 g）苦蕎芽干粉，加入75%乙醇溶液30 mL，80 ℃下回流提取1 h（重復2次），過濾后合并濾液。待旋蒸至干后，殘渣加丙酮溶解并定容至5 mL，過0.45 μm微孔濾膜后，待測。空白試驗：試驗中所使用的試劑按上述方法處理后，進行HPLC分析。

1.2.6.4 色譜條件 色譜柱：Agilent C18（4.6 m×250 mm×5 μm）；檢測器：DAD檢測器；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；流速：1.0 mL/min；波長：330 nm；流動相A（乙腈溶液）和流動相B（0.4%磷酸溶液）梯度洗脫35 min，梯度程序為：0 min，6%A，94%B；0~30 min，18%A，82%B；30~35 min，6%A，94%B。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

實驗為3次重復，結(jié)果以平均值±標準差的形式表示。用SPSS 22.0軟件中的Duncan’s多重比較法進行方差分析，顯著水平為P<0.05。采用Sigmaplot 10.0和Origin 2018軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦蕎萌發(fā)富集黃酮單因素實驗結(jié)果

2.1.1 微波時間對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量的影響微波時間對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量的影響結(jié)果如圖1。由圖1可知，苦蕎芽中的黃酮含量隨著苦蕎培養(yǎng)時間的延長逐漸增加，隨著微波時間的延長呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢。在微波時間50、75 s時，苦蕎芽中黃酮含量與對照組比較顯著增加（P<0.05），在微波功率300 W下處理75 s，微波溫度為（40±2）℃，苦蕎萌發(fā)第7 d苦蕎芽中的黃酮含量最高，與對照組比較提高了3.25%。這是由于微波預(yù)處理可以促進谷物的次生代謝過程，從而增加發(fā)芽谷物中黃酮等次生代謝產(chǎn)物的含量，Randhir等[22]研究結(jié)果顯示，蠶豆經(jīng)微波處理后萌發(fā)的蠶豆芽苗中酚類物質(zhì)的含量增加700%。王順民等[23]研究表明，微波處理豌豆后豌豆芽黃酮含量較對照組增加了23.3%，達1.48 mg/100 mg。大米[24]和黍米[25]經(jīng)微波處理后萌發(fā)，胚芽米的胚芽油中α-生育酚和植物甾醇含量分別增加約1.5倍和15%，黍米中的可接受性多酚的含量增加顯著，與本文結(jié)果類似。

圖1 微波時間對苦蕎芽中黃酮含量的影響Fig.1 Effect of microwave time on total flavonoid content in tartary buckwheat sprouts

2.1.2 微波功率對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量的影響微波功率對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量影響結(jié)果如圖2。由圖2可知，苦蕎芽中的黃酮含量隨著苦蕎培養(yǎng)時間的延長逐漸增加，隨著微波功率的增加呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢。在微波功率200、300 W時，苦蕎芽中黃酮含量與對照組比較顯著增加（P<0.05），在微波功率400 W下處理50 s，微波溫度為（40±2）℃，苦蕎萌發(fā)第7 d苦蕎芽中的黃酮含量最高，與對照組比較提高了1.66%。這是由于微波輻射時間過長，微波功率過大都會對種子萌發(fā)產(chǎn)生負面影響[26?29]。微波輻射對種子萌發(fā)、萌發(fā)種芽中次生代謝產(chǎn)物和促進生物量積累的影響取決于種子類型，同時微波頻率、微波功率和微波時間等因素也有較大影響，這與張蕊思等[30]微波輻射對冰草種子生理特性影響的研究結(jié)果一致。

圖2 微波功率對苦蕎芽中黃酮含量的影響Fig.2 Effect of microwave power on total flavonoid content in tartary buckwheat sprouts

2.1.3 營養(yǎng)液L-Phe濃度對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量的影響 營養(yǎng)液L-Phe濃度對萌發(fā)苦蕎芽中黃酮含量影響結(jié)果如圖3。由圖3可以看出，苦蕎芽中的黃酮含量隨著苦蕎培養(yǎng)時間的延長逐漸增加，而隨著營養(yǎng)液L-Phe濃度的增加呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢。其中，在營養(yǎng)液L-Phe濃度為3.0 mmol/L條件下，苦蕎芽中的黃酮含量最高，苦蕎萌發(fā)第7 d時，苦蕎芽中黃酮含量與對照組比較提高了5.5%。同時，在營養(yǎng)液L-Phe濃度為3.0 mmol/L條件下，苦蕎萌發(fā)第7 d苦蕎芽中黃酮含量與苦蕎萌發(fā)第1 d比較提高了2.19倍。L-Phe是苦蕎萌發(fā)和生長過程中黃酮類物質(zhì)合成的前體物質(zhì)，因此苦蕎萌發(fā)和L-Phe營養(yǎng)液處理都能促進苦蕎黃芽中酮類化合物的合成，這與Seo等[17]研究結(jié)果一致。

圖3 L-Phe濃度對苦蕎芽中總黃酮含量的影響Fig.3 Effect of L-Phe concentration on total flavonoid content in tartary buckwheat sprouts

2.2 苦蕎萌發(fā)富集黃酮的響應(yīng)面優(yōu)化

2.2.1 響應(yīng)面試驗結(jié)果 以苦蕎芽中黃酮含量（g/100 g）為指標進行響應(yīng)面試驗設(shè)計，選取微波時間（A）、微波功率（B）和營養(yǎng)液L-Phe濃度（C）為影響因素，進行3因素3水平的響應(yīng)面分析。試驗結(jié)果如表2所示。

表2 響應(yīng)面試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Design and results of response surface experiments

2.2.2 響應(yīng)面試驗回歸模型及方差分析 應(yīng)用Design-Expert V8.0.6軟件，對表2的數(shù)據(jù)進行處理、分析，預(yù)測模型為：R1=6.35?0.091A?0.19B?0.053 C?0.050AB+0.058AC+0.093BC?0.22A2?0.22B2?0.35C2。

對試驗結(jié)果進行擬合的二次模型方差分析，結(jié)果見表3。F值為96.38，回歸方程模型達到極顯著水平（P<0.0001），說明響應(yīng)面模型極度顯著。根據(jù)各因素的F值可知，影響苦蕎萌發(fā)后黃酮含量的因素依次為B>A>C，交互項依次為BC>AC>AB。除AC、AB影響顯著（P<0.05）外，其他各項影響均極顯著（P<0.01）。多元決定系數(shù)為R2=0.9076，失擬P為0.1595（P>0.05），該模型預(yù)測值與實際試驗值擬合較好?？梢岳迷摶貧w方程對微波協(xié)同L-Phe處理對苦蕎萌發(fā)富集黃酮結(jié)果進行分析，對響應(yīng)值進行預(yù)測。

2.2.3 響應(yīng)面分析交互作用 由表3和圖4可知，微波功率B與微波時間A對苦蕎芽中黃酮含量的交互作用顯著（P<0.05）。當微波功率B一定時，苦蕎芽中黃酮含量隨著微波時間A的增加先增加后降低。在微波時間A為88.19 s，微波功率B為248.07 W時苦蕎芽中黃酮含量最高。L-Phe濃度C和微波時間A對苦蕎芽中黃酮含量的交互作用顯著（P<0.05）。當微波時間A一定時，苦蕎芽中黃酮含量隨著LPhe濃度C的增加先增加后降低，在L-Phe濃度為2.90 mmol/L時苦蕎芽中黃酮含量最高。L-Phe濃度C和微波功率B對苦蕎芽中黃酮含量的的交互作用極顯著（P<0.01）。當微波功率B一定時，苦蕎芽中黃酮含量隨著L-Phe濃度C的升高呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢。以上分析與方差分析結(jié)果一致。

表3 響應(yīng)面試驗結(jié)果方差分析Table 3 Variance analysis of response surface experiments

圖4 因子交互作用對苦蕎芽中總黃酮含量的曲面圖與等高線圖Fig.4 Surface plot and contour plot of total flavonoid content in tartary buckwheat sprouts of the interaction between factors

2.3 驗證實驗

利用Design-expert 8.0軟件在設(shè)定的因素水平內(nèi)對回歸方程進行數(shù)學規(guī)劃，得到微波協(xié)同LPhe處理對苦蕎萌發(fā)富集黃酮各因素最優(yōu)值為：苦蕎種子經(jīng)消毒、催芽，采用微波功率248.07 W處理88.19 s，微波溫度為（40±2）℃，在溫度25 ℃，濕度75%±5%RH條件下避光培養(yǎng)7 d，發(fā)芽盤底盤中裝入2.90 mmol/L的L-Phe溶液作為營養(yǎng)液，培養(yǎng)第7 d萌發(fā)的苦蕎芽中黃酮含量預(yù)測值為6.30 g/100 g。經(jīng)校正，微波協(xié)同L-Phe處理對苦蕎萌發(fā)富集黃酮條件為：苦蕎種子經(jīng)消毒、催芽，采用微波功率250 W處理90 s，微波溫度為（40±2）℃，在溫度25 ℃，濕度75%±5% RH條件下避光培養(yǎng)7 d，發(fā)芽盤底盤中裝入2.90 mmol/L的L-Phe溶液作為營養(yǎng)液，培養(yǎng)第7 d萌發(fā)的苦蕎芽中測定黃酮含量為6.26 g/100 g。驗證實驗表明，微波協(xié)同L-Phe處理促進苦蕎萌發(fā)富集黃酮，苦蕎芽中黃酮含量預(yù)測值與實際測定值接近，經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化所得的微波協(xié)同L-Phe處理對苦蕎萌發(fā)富集黃酮工藝科學可信，具有指導實際生產(chǎn)的應(yīng)用價值。

2.4 方法學考察結(jié)果

2.4.1 線性關(guān)系 分別精確吸取混合標準品溶液適量，配制系列質(zhì)量濃度標準品溶液，注入液相色譜儀并測定。以各成分峰面積（Y）為縱坐標，質(zhì)量濃度（X, μg·mL?1）為橫坐標，進行線性回歸，其回歸方程見表4。

表4 各種成分的線性關(guān)系Table 4 Linerity of various constituents

2.4.2 精密度試驗 精確吸取混合標準品溶液適量，注入液相色譜儀并測定，重復進樣6次，記錄色譜圖并計算峰面積的RSD。綠原酸、牡荊素、蘆丁峰面積RSD分別為0.32%、0.43%、0.55%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取同一批樣品（微波功率300 W，處理25 s樣品組）溶液，室溫下放置，分別于0、4、8、12、24 h時進樣測定，測得綠原酸、牡荊素、蘆丁峰面積RSD分別為0.63%、0.52%、0.57%，表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復性試驗 取同一批樣品（微波功率400 W，處理50 s樣品組），制備樣品溶液6份，進樣測定，記錄色譜圖，按外標法計算各成分含量及其RSD。結(jié)果綠原酸、牡荊素、蘆丁平均含量分別為2.8815、0.5146、30.1142 mg·g?1，RSD分別為0.76%、0.63%、0.85%，表明該方法重復性良好。

2.4.5 加樣回收試驗 稱取已知含量樣品（微波功率400 W，處理50 s樣品組）9份，分成3組，精密稱定，分別加入混合標準溶液1.0、2.0、3.0 mL，進樣測定，記錄色譜圖，計算綠原酸、牡荊素、蘆丁加樣回收率在98.87%~102.31%范圍內(nèi)，RSD在0.38%~0.81%范圍內(nèi)。

2.5 苦蕎芽樣品黃酮含量測定結(jié)果

紫外掃描結(jié)果顯示，綠原酸、牡荊素、蘆丁標準品的最大吸收波長在330 nm左右，故將330 nm作為樣品紫外檢測波長。混合標準品溶液和樣品溶液稀釋后進行HPLC分析，結(jié)果如圖5，同時記錄色譜圖，按外標法計算綠原酸、牡荊素、蘆丁含量，結(jié)果如表5。

圖5 混合標準品和樣品HPLC色譜圖Fig.5 The HPLC chromatogram of standards and samples

表5 樣品含量測定結(jié)果Table 5 Content determination results of samples

由圖5a可知，混合標準品中綠原酸保留時間是12.765 min；牡荊素保留時間是28.157 min；蘆丁保留時間是28.898 min。比較圖5a混合標準品色譜圖和圖5b樣品色譜圖的相對保留值，樣品中對應(yīng)的綠原酸、牡荊素和蘆丁保留時間分別為：12.823、28.188、28.875 min。樣品中蘆丁含量最高，其次為綠原酸、牡荊素，由表5可知，其含量分別為31.8962、3.2764和0.5644 mg/g。此外，樣品中還含有多種其它成分，保留時間分別為：1.481、1.905、8.889、15.238、18.307、23.915、27.513、33.709 min，需要進一步的研究。

3 結(jié)論

微波處理和營養(yǎng)液L-Phe溶液處理都具有提高苦蕎芽中黃酮含量的作用，微波處理及營養(yǎng)液LPhe溶液處理在一定范圍內(nèi)對苦蕎萌發(fā)富集黃酮類物質(zhì)有協(xié)同促進作用。采用CCD響應(yīng)面優(yōu)化的方法，以苦蕎芽中黃酮含量為指標，優(yōu)化得到微波協(xié)同L-Phe處理對苦蕎萌發(fā)富集黃酮的最佳工藝為：苦蕎種子經(jīng)消毒、催芽，采用微波功率250 W處理90 s，微波溫度為（40±2）℃，在溫度25 ℃，濕度75%±5% RH條件下避光培養(yǎng)7 d，發(fā)芽盤底盤中裝入2.90 mmol/L的L-Phe溶液作為營養(yǎng)液，培養(yǎng)第7 d萌發(fā)的苦蕎芽中測定黃酮含量達到了6.26 g/100 g。

采用高效液相色譜法（HPLC）對苦蕎芽中黃酮成分進行分析，分離和確定出綠原酸、牡荊素、蘆丁三種黃酮類物質(zhì)和含量，另外有8種成分需要進一步分析和確定。本研究為微波協(xié)同L-Phe促進苦蕎萌發(fā)富集黃酮的機理研究提供了參考，為苦蕎芽產(chǎn)品和富含苦蕎芽黃酮類化合物功能食品的開發(fā)提供了技術(shù)支持。